Techniques de dénombrement en microbiologie alimentaire en

Techniques de dénombrement en microbiologie alimentaire en milieu solide
(les pages indiquées font référence au livre « Activités technologiques en microbiologie – Terminale BGB » CRDP Bordeaux.
Type de microorganisme dénombré
Nom
Moisissures (p25)
Milieu au malt et
saccharose
Flore totale (p86) =
micro-organismes
aérobies totaux à 30°C
PCA (plate count
agar)
Coliformes (p101)
Milieu
Principaux composants
Technique d'ensemencement
Conditions d'incubation
Malt
Saccharose
Chloramphénicol
Glucose
extraits de levures
+ 1 % de lait écrémé pour analyse
du lait cru)
Etalement de 0,1 mL de
dilution en surface.
25°C, 2 à 3 jours
1 mL de dilution dans la
masse + double couche (sauf
pour eau et lait).
Désoxycholate 0,1 %
Lactose
Rouge neutre
Désoxycholate de Na
1 mL de dilution dans la
masse + double couche
Gélose lactosée au
TTC et Tergitol 7
Lactose
BBT
Tergitol 7
TTC (chlorure de 2-3-5 triphényl
tétrazolium)
Jaune d'œuf
Tellurite de potassium
Filtration sur membrane d'eau
: déposé le filtre sur le milieu
(face septique vers le haut)
Etalement de 0,1 mL de
dilution en surface.
Filtration sur membrane d'eau
: déposé le filtre sur le milieu
(face septique vers le haut)
En tube : 1 mL de dilution
dans la masse pour aliments
frais ou surgelés. 10 mL pour
semi-conserves (Cf p105)
Staphylococcus aureus
(p94)
Baird Parker
Streptocoques fécaux Enterococcus (p113)
Slanetz
Anaérobies sulfito
réducteurs à 46°C
(p103)
Milieu TSC
Glucose
Azide de sodium
TTC
Tryptone-sulfite-cyclosérine
Milieu TSN
Tryptone sulfite néomycine
Dilutions dénombrées
Tests complémentaires ou poursuite
d'analyse.
Aucun
24 heures à 30°C
entre 5 et 50 thalles
(moisissures) et entre 30 et
300 colonies de levures.
entre 30 et 300 colonies.
Autres possibles :
45°C Æ micro-organismes totaux
thermophiles
20°CÆ micro-organismes totaux
cryophiles
24 heures à :
™ 30°C pour les coliformes totaux
™ 44°C pour coliformes
thermotolérants (ou fécaux)
24 heures à :
™ 37°C pour les coliformes totaux
™ 44°C pour les coliformes
thermotolérants
entre 15 et 150 colonies.
On dénombre les colonies
rouges d'au moins 0,5 mm de
diamètre.
Entre 15 et 150 colonies.
Colonies lactose+ : colonie
rouge ou rose (réduction TTC)
halo jaune (virage du BBT)
Aucun
24 à 48 heures à 37°C
Entre 1 et 100 colonies.
On dénombre les colonies
noires avec liseré blanc et
entourées d'un halo
d'éclaircissement
24 à 37°C
Entre 15 et 150 colonies. On
dénombre les colonies roses
ou rouges (réduction du TTC)
On dénombre les colonies
noires (réduction des sulfites)
Identifier :
™ toutes les colonies suspectes s'il y
en a moins de 10.
™ Racine carré du nombre de
colonies, s'il y en a moins de 100,
mais tester au moins 5 colonies.
™ S'il y a plus de 100 colonies,
proposer
un
nouveau
dénombrement avec de nouvelles
dilutions.
Identification des colonies suspectes
par repiquage sur gélose BEA (on doit
obtenir des colonies noires.
Identification possible de Clostridium
perfringens
24 à 48 h à 46°C
Aucun
identification de chaque colonie
suspecte par test IMVIC (p100) ou
galerie classique.
En boîte : 1 mL de dilution
20 h à 46°C en anaérobiose.
dans la masse + double couche
Spores de Clostridium Milieu TSC
Tryptone-sulfite-cyclosérine
En tube : analyse de 20 mL
24 à 48 h à 37°C
On dénombre les colonies
Identification possible de Clostridium
sulfito réducteurs
d'eau réparties en 4 tubes
noires (réduction des sulfites) perfringens
(p103)
Milieu Wilson-Blair
Milieu VF + sulfite et alun de fer
(ensemencement de 5 mL dans
la masse) (Cf p105)
Pour les coliformes on dénombre entre 15 et 150 colonies car au delà on risque d'avoir des colonies faussement négatives par ré-alcalinisation du milieu.
Dans tous les cas si le dénombrement est supérieur ou inférieur aux fourchettes fixées (ex : moins de 15 colonies ou plus de 150 sur TTC) on réalise le dénombrement et l'interprétation en précisant que le résultat est soumis à caution car les
conditions de dénombrement ne sont pas optimale.
Composition des milieux de culture :
Baird Parker page 96
BEA page 114
BLBVB page 102
Désoxycholate 0,1 % (Gélose au) page 102
EMB (Gélose) page 102
Gélose à l'ADN + bleu de toluidine page 96
Slanetz page 114
TSC page 105
TSN page 105
TTC (Gélose) page 102
VRBL (Gélose) page 102
Wilson Blair page 105