DOSAGE DU GLUCOSE EN SOLUTION PAR

BTS Diététique
Glucide
TP de Biochimie
DOSAGE DU GLUCOSE EN SOLUTION PAR
SPECTROPHOTOMETRIE
1. Présenter le but et le principe de la réaction. (Vous présenterez notamment les formules
semi-développées des acides picrique et picramique, sachant que le groupement « nitro »
est NO2.)
But : Déterminer la concentration d’une solution de glucose inconnue en utilisant les propriétés
réductrices des oses au moyen d’un dosage colorimétrique utilisant l’acide picrique.
Principe : L’acide picrique est réduit en acide picramique par le groupement réducteur du
glucose. L’acide picramique est orange et, dans les conditions opératoires utilisées, l’intensité
de cette coloration orange sera proportionnelle à la quantité de glucose en solution, ce qui
permettra la réalisation d’un dosage colorimétrique à 570 nm (suit la loi de Beer-Lambert).
2. Indiquer, dans un tableau, la masse de glucose (en mg) présente dans chaque tube de la
gamme (tubes 1 à 6) et l’absorbance de chacun de ces tubes mesurée à 570 nm.
Rappel du tableau colorimétrique
Tube
1
2
3
4
5
6
X
Solution de glucose à 2‰ (mL)
0
0,4
0,8
1,2
1,6
2
0
Solution X (mL)
0
0
0
0
0
0
2
Eau déminéralisée (mL)
2
1,6
1,2
0,8
0,4
0
0
Réactif à l’acide picrique (mL)
1
1
1
1
1
1
1
Calcul de la masse de glucose (cas du tube 2)
 On connaît :
o V = 0,4 mL = 0,4.10-3 L
o  = une concentration proche de 2 g.L-1
 D’où :
ρ  m donc m  ρ x V  2 x 0,4.10-3  8.10-4 g  0,8 mg 
V
Tube
1
2
3
4
5
6
Solution de glucose à 2‰ (mL)
0
0,4
0,8
1,2
1,6
2
Masse de glucose1 par tube (mg)
0
0,82
1,63
2,45
3,26
4,08
Absorbances2
0,000
0,001
0,02
0,037
0,057
0,078
1
Les masses de glucose sont approximatives et devaient tenir compte de la masse de glucose réellement
pesée
2
Valeurs données par le spectrophotomètre
1
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Glucide
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Attention, lors de la lecture spectrophotométrique, certaines précautions doivent être prises :
 S’assurer que la cuve est propre et ne bloque pas le passage du faisceau lumineux
 S’assurer que la solution est homogène et ne présente pas de précipité
 Rincer la cuve entre le passage de deux solutions uniquement si les concentrations ne
sont pas croissantes
 Fermer la porte du spectrophotomètre lors de la lecture
 Noter la valeur exacte sachant que l’appareil n’affiche pas le premier chiffre s’il s’agit
d’un zéro (exemple : 0,076 sera affiché .076)
3. Sur une feuille de papier millimétrée (fournie en TP), tracer la droite A = f (quantité de
glucose par tube en mg)
Le tracé pouvait être réalisé sur du papier millimétré ou à l’ordinateur (logiciel : Excel,
regresim, …)
Exemple : Droite d’étalonnage A570 nm = f (masse de glucose)
0,09
0,08
Droite moyenne
Absorbance (570 nm)
0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
Masse de glucose (mg)
Dans ce cas, il ne fallait pas tenir compte du point 0 et tracer la droite d’après les autres points.
Il n’est d’ailleurs par rare d’une droite d’étalonnage ne passa pas par zéro.
4. Reporter l’absorbance obtenue avec la solution X sur la courbe d’étalonnage et estimer la
quantité de glucose présente dans le tube puis la concentration de la solution X.
Si l’absorbance observée pour le tube X était de 0,04, alors la masse de glucose présente dans
ce tube était de 2,45 mg
2
BTS Diététique
Glucide
TP de Biochimie
0,09
0,08
Droite moyenne
Absorbance (570 nm)
0,07
0,06
0,05
0,04
A = 0,04
0,03
0,02
0,01
mglucose = 2,45 mg
0
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
Masse de glucose (mg)
Pour calculer la concentration en glucose de la solution X, il suffisait de rapporter cette masse
au volume de solution X déposé dans le tube X puisqu’il s’agissait là de la seule source de
glucose du tube.
Calcul :
 On connaît :
o V = 2 mL = 2.10-3 L
o m = 2,45 mg = 2,45.10-3 g (lecture graphique)
 D’où :
2,45.10-3
ρ m 
 1,25 g.L-1
V
2.10-3
Vous deviez trouver une concentration proche 1 g.L-1.
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