Prélèvement de Parasitologie et Mycologie - AP-HM

AP-HM LBM Service de parasitologie-Mycologie
Pr PIARROUX Renaud
CHU la Timone
16PREP01D003
Fiche technique de prelevement de Parasitologie et Mycologie
Date d’application: 2015-10-23
Version : 2
Rédaction : BAYLE Joelle
Validation : FARAUT Françoise
Approbation : PIARROUX Renaud
MYCOLOGIE et PARASITOLOGIE
PREREQUIS
-
Remplir entièrement le bon de prescription. Vérifier qu’il soit daté et signé.
Consulter le site intranet / intranet des laboratoires pour s’informer sur les examens prescrits et
l’ouverture du laboratoire.
Consulter le dossier du patient pour s’informer d’éventuelles précautions à prendre pour le
prélèvement.
Préparer le nombre d’étiquettes du patient correspondant au nombre d’échantillons biologiques à
prélever
Noter la date et heure du prélèvement
Recherche Directe de parasites et Biologie moléculaire
Plasmodium
Filaire, babesia et
trypanosomes
Pneumocystis
jiroveci
Parasites
intestinaux : kystes,
œufs et larves
d’anguillules
Œufs d’oxyures
Prélever 2 tubes de sang sur EDTA
- Faire un interrogatoire détaillé et noter les dates de voyages récents en zone
tropicale avec date de retour
- Préciser les signes cliniques et biologiques (thrombopénies associées, etc.), les
traitements anti parasitaires
- Acheminer au laboratoire dans un délai maximum de 1 heure. Pendant les horaires de
fermeture du laboratoire de Parasitologie, les recherches sont assurées sur Nord et
Timone dans le laboratoire d’Hématologie du site correspondant.
Prélever un tube de sang sur EDTA
- Faire un interrogatoire détaillé et noter les dates de voyages récents en zone
tropicale avec date de retour
- Préciser les signes cliniques et biologiques
- En dehors des heures d’ouverture du laboratoire, conserver à température
ambiante, maximum 48 heures
Prélèvements d’origine pulmonaire : crachats, expectorations induites, LBA, Biopsies
- Préciser les signes cliniques, biologiques et radiologiques
Prélèvements de selles
- éviter une alimentation riche en résidus la veille du prélèvement
- matériel : pot plastique à vis stérile avec spatule
- Répéter 3 fois l’examen à 3 jours d’intervalle
- Si recherche de larves d’anguillules : A préciser sur le bon de demande
Transport au laboratoire et délai d’acheminement
Selles en dehors du laboratoire :
- inférieur à 1 heure pour recherche de formes végétatives d’amibes ou de
flagellés et à température ambiante (18 à 25 degrés)
- Inférieur à 4 heures à température ambiante pour les coprologies standards
- Si délai différé, il faut conserver les selles à +4 °
Selles transmises par un laboratoire pour confirmation diagnostique de recherche de
parasites, kystes, ou œufs, l’échantillon est transmis dans le MIF ou du Bailanger.
Biopsies intestinales dans pots secs à vis
Scotch test de Graham
- Au lever, avant la toilette et avant émission des selles :
- Placer le coté adhésif d’un morceau de scotch transparent sur les plis de la
marge anale après écartement et plusieurs appuis pour s’assurer d’une bonne
imprégnation.
- Placer le scotch sur une lame porte objet pour envoi au laboratoire dans une
boite de pétri.
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Œufs de bilharzies
(Schistosomes)
dans les urines
Leishmanies
Amibes oculaires
(Acanthamoeba)
Ectoparasites et
examen
morphologiques de
parasites
Recueil des urines
Pour la recherche de Bilharzies, il faut faire un prélèvement d’urine de fin de miction
forcée :
- Vider la vessie sans forcer
- Faire plusieurs flexions fesses-talons
- Forcer la fin de miction
- Recueil des urines dans un pot stérile à vis
- Sang sur EDTA
- Moelle sur EDTA (jamais de tube hépariné)
- Prélèvement cutané recueilli dans pot à vis sec stérile sans milieu de
conservation
- Il est impératif de travailler sur grattage cornéen placé dans un pot stérile (pas
d’écouvillonnage).
- Dans le cas de porteur de lentilles, joindre aux lentilles, le boitier contenant le
liquide de conservation.
Recueillir l’élément à identifier dans un pot à vis sec.
Pour une recherche de gale :
- Repérer le sillon scabieux à l’aide d’un dermatoscope.
- Prélever à l’extrémité du sillon au niveau de la vésicule perlée qui contient
l’acarien.
- Avec un vaccinostyle, gratter le sillon et la vésicule, ou utiliser des grattoirs à
usage chirurgical.
- Déposer le produit de grattage sur une lame placée dans une boite de pétri qui
sera fermée hermétiquement pour éviter la contamination.
- Prélever au moins 3 lésions
Diagnostic de la Toxoplamose
Sérologie sur
échantillon
sanguin
Recherche d’Acs
sur autres liquides
biologiques
Recherche
d’ADN et
inoculation à la
souris
Recherche d’ADN
sur sang total
Recherche d’ADN
sur autres liquides
biologiques
Cf procédure générale 00PREP01D003 relative au prélèvement d’un échantillon
sanguin. Il faut impérativement compléter le bon de demande par les
renseignements suivants :
1. Pour une femme enceinte
- Renseigner date de grossesse
- Résultats antérieurs si externe à l’AP-HM
2. Pour un sang de cordon
Indiquer le nom de la mère sur le bon. Le sang de cordon doit être
impérativement au nom de l’enfant
3. Pour un bilan mère enfant
o Joindre la fiche de renseignement fournie par le laboratoire.
o Ou indiquer date de séroconversion maternelle, date et résultat du DPN,
traitement reçu par la mère (date de début et posologie), nom du pédiatre à
joindre
- Indiquer le couple maman / bébé sur chacun des deux bons de demandes.
- Pour le suivi sérologique d’un enfant né d’une mère ayant fait une
séroconversion pendant la grossesse
o
Rappeler le nom de la mère (nom de jeune fille ++)
- LCR : 0.5 ml minimum dans tube sec
- Humeur aqueuse : 0.2 ml minimum dans tube sec sans gel séparateur
Doit être accompagné d’un prélèvement sanguin sur tube sec
Placenta :
- Il est conseillé d'adresser au laboratoire, la totalité du placenta. En cas de
transmission différée au laboratoire, il faudra le conserver à +4°
- Pour le diagnostic de toxoplasmose congénitale, il faudra accompagner le
placenta du sang de la mère et du sang du cordon sur tubes secs.
Liquide amniotique
- Prélever dans 2 tubes stériles au minimum 4 ml/tube.
Demande sera accompagnée obligatoirement du consentement de la patiente.
En cas d’immunodépression sévère ou recherche chez un nouveau-né, né d’une
mère ayant séroconvertie dans le dernier mois de la grossesse : Un tube EDTA
- Prélèvements pulmonaires profonds, Biopsie : pot stérile
- Humeur aqueuse : tube sec sans séparateur.
- Moelle osseuse : tube EDTA
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Sérologies parasitaires et fongiques
Sur échantillon
sanguin
Recherche d’Ac
ou d’Ag sur
autres liquides
biologiques
Cf. procédure générale 00PREP01D003 relative au prélèvement d’un échantillon
sanguin.
- LCR : 0.5 ml minimum dans tube sec si recherche d’Ag cryptocoque.
- Humeur aqueuse :
o 0.2 ml si recherche isolée d’Acs parasitaires
o Doit être accompagné d’un prélèvement sanguin sur tube sec
- LBA et urines : à prélever dans pot à vis stérile
Examen Mycologique et Biologie Moléculaire
Hémoculture
fongique
Cf. procédure générale 00PREP01D003 relative au prélèvement d’un échantillon
sanguin.
Pour la recherche fongique, il faut utiliser le flacon hémoculture spécifique
« MYCOSIS »
En dehors des horaires d’ouverture du laboratoire, les flacons doivent être
conservés à température ambiante.
Prélèvement par écouvillonnage
Prélever à l'aide de 2 écouvillons (coton ou avec milieu de transport pour culture et
Biologie moléculaire : bouchon violet)
- Gorge
- Oreille (Otites externes)
- Œil, paupières (conjonctivites, blépharites, dacryocystites)
- Plaies superficielles, ulcérations, etc.
Prélèvements broncho-pulmonaires
Examen
mycologique
standard :
recherche de
levures et de
filamenteux
-
Crachats et expectorations induites
le matin, au réveil, après rinçage bucco-dentaire à l’eau distillée stérile et lors
d’un effort de toux aidé, si besoin d’une kinésithérapie. Le prélèvement sera
envoyé au laboratoire dans un pot à vis stérile.
-
LBA
Précéder le lavage par une aspiration bronchique dans un pot à vis stérile.
Faire le lavage et le récupérer dans un pot à vis stérile.
Envoyer rapidement les deux pots au laboratoire
Prélèvements Profonds
-
Biopsie
Placer la biopsie au fond d'un tube stérile
• Ajouter 3 ou 4 gouttes d'eau physiologique stérile pour les petits échantillons
• Les prélèvements effectués au bloc opératoire doivent être rapidement
acheminés au laboratoire et accompagnés de renseignements cliniques ainsi
que la localisation précise de l’endroit où ils ont été effectués.
• Les biopsies chirurgicales sont déposées dans un pot stérile
-
Ponction
Les prélèvements de liquides péritonéaux, de pus d’abcès et de sérosités sont
recueillis à l’aide d’une seringue et déposés dans un pot stérile.
-
LCR
La ponction lombaire est réalisée avec une asepsie rigoureuse.
Pour la Parasitologie - Mycologie, il faut prévoir un tube contenant si possible 3
ml de LCR .Pour la recherche de cryptocoque, il faut joindre un prélèvement de
sang sur tube sec.
Autres prélèvements biologiques (selles, urines, …)
Prélever sur pots secs à vis stériles
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-
Recherche de
mycoses
superficielles et
de
dermatophytes
Recherche de
pityriasis
versicolor et
malassezioses
-
Quand prélever : avant tout traitement anti fongique, ou après une fenêtre
thérapeutique de 15 jours pour la peau et les cheveux et 2 mois pour les ongles.
Comment prélever :
o Lésions de la peau glabre :
Dermatophytose
 Racler les squames à la périphérie des lésions (dermatophytie
circinée) à l’aide d’une curette de Brocq, à défaut, d’un
vaccinostyle stérile.
 Puis frotter avec une compresse stérile.

Recueillir les échantillons dans une boîte de Pétri ou un pot
stérile.
o Lésions des plis intertrigo- inguinal ou eczéma marginé de Hebra
 Lésions sèches et squameuses :
 gratter à la curette les squames en bordure de la lésion.
 Puis frotter avec une compresse stérile.
 Recueillir les échantillons dans une boîte de Pétri un
pot stérile
 Lésions suintantes
 Prélever les sérosités à l’aide de 2 ou 3 écouvillons
(coton ou avec milieu de transport pour culture et
biologie moléculaire : bouchon violet)
o Les ongles
Couper toute la partie de l’ongle atteint avec des ciseaux, jusqu’à la
limite des tissus sains. Il est aussi possible de prélever des
poussières d’ongles en raclant la tablette interne de l’ongle, ou les
îlots blanchâtres de la surface de l’ongle, au vaccinostyle, à la
curette stérile ou avec une meule si possible
Prélever le pus de périonyxis éventuel (écouvillon pour recherche
de Candida)
o Cuir chevelu et zone pilleuse (recherche de teignes)
Les cheveux
Examiner les cheveux sous une lampe de Wood.
Arracher avec une pince à épiler les cheveux fluorescents (cas des
teignes microsporiques et faviques).
Sinon, prélever les cheveux cassés à la loupe à proximité du bulbe.
Les squames
Gratter les squames et les croûtes éventuelles en raclant à la
curette.
Puis frotter avec une compresse stérile.
Recueillir les échantillons dans une boîte de Pétri
En cas de lésion inflammatoire suppurée, prélever le pus avec un
écouvillon.
Examen direct (Pityriasis versicolor)
o
Prélèvement à la cellophane adhésive («scotch-test ») des lésions :
Placer le coté adhésif d’un morceau de scotch transparent sur la lésion et
appuyer fermement plusieurs fois puis coller sur une lame porte objet
Culture (pityriasis versicolor et autres malassezioses) :
Frotter la peau ou le cuir chevelu avec une compresse stérile ; puis mettre
la compresse dans une boîte de Pétri ou un pot stérile
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