Le dossier toxicologique (prŽ
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Le dossier toxicologique (prŽ
Les études toxicologiques LE PRODUIT À TESTER • De nombreux facteurs peuvent influencer la pharmacocinétique et/ou la toxicité : – – – – forme galénique impuretés excipients taille des particules • Les études toxicologiques seront réalisées avec des lots de produits proche de ceux qui seront utilisés pour les essais cliniques ou commercialisés. • Collaboration toxicologues/galénistes. LA VOIE D'EXPOSITION • En général la voie orale plus une autre voie (intrapéritonéale, I.V., inhalation,...) • Dépend de l'utilisation envisagée • Si une utilisation I.V. est prévue, l'utilisation de cette voie est obligatoire • Les différences de toxicité observées entre deux voies doivent être expliquées : – Intérêt des études toxicocinétiques • Voie orale – Solutions – Suspensions • dans l'eau • dans une solution d'hydroxyméthyl cellulose à 0.5 % ... – Gavage – Dans l'alimentation • La voie I.V. – Bolus – Perfusion • Application sur la peau – Animal rasé ou "nu" – Eviter le léchage – Utiliser éventuellement un pansement • Inhalation – Gaz – Utilisation d'un masque – Exposition de l'animal entier • peu utilisé pour les médicaments • contamination (peau, nourriture...) LES DOSES • Exprimées en mg/kg • Le choix des doses ICH M3 (R2) Les études toxicologiques réalisées en vue de l’obtention d’une AMM • But : évaluer les propriétés d’une nouvelle molécule sur le plan de la sécurité • Appréciation générale du bénéfice attendu par rapport aux risques encourus • Ces études permettent d’évaluer – – – – – les doses maximales tolérables les organes, tissus et cellules cibles les fonctions physiologiques altérées les risques d’altérations génétiques et de cancérogenèse les risques sur la fonction de reproduction Toxicité par administration unique = toxicité aiguë • Première des études toxicologiques • Administration unique d’une dose élevée • La recherche d’une dose létale n’est plus obligatoire depuis longtemps DOSE MINIMALE MORTELLE (DMM) • Dose minimale capable de tuer un animal (arrêt cardiaque) • Donne une indication pour les études de DL50 (si on la recherche) LA DL50 (Dose létale 50) • Dose qui tue 50 % des animaux • Directive de 1987 (CEE) demande une DL50 approximative – "La DL50 est approximativement de..." – "La DL50 est supérieure à...« • On peut donner la « DL0 » • Utile pour classer le produit dans l'échelle des toxicités • Parfois utile en cas d'intoxication accidentelle ou volontaire chez l'homme (connaissance des organes cibles et des lésions observées) • Utile pour le choix des doses des études ultérieures • Première approche de la dose maximale tolérée Protocole standard des études de tox aigue • Deux espèces rongeurs (en général rat et souris) • On utilise parfois le chien en tox aigue mais en principe à des doses non létales • Tests sur substance médicamenteuses et parfois sur métabolites et impuretés • Travailler sur les 2 sexes au moins pour une espèce – Deux voies d'administration (en général P.O., I.P.) – Toutes les conditions opératoires (âge et poids des animaux, conditions d'administration...) doivent être fixées et précisées dans le rapport final – Si DL50, recherche approximative : 3 groupes de 3 ou 5 animaux sont suffisants – La DL50 peut être approchée avec 30 animaux (vs 400 auparavant) • Surveillance des animaux – – – – Pendant les heures qui suivent Jusqu'à 14 jours Mortalité, évolution pondérale Système nerveux central • comportement • mouvements • réactions aux stimuli – Système nerveux végétatif • myosis • mydriase – Fonction respiratoire – ... – Fonction cardiaque • Tachycardie • Bradycardie • ... – Fonction digestive • Vomissements • Diarrhée • Causes des décès – Autopsie – Recherche de l'organe-cible – Période où la mort survient Toxicité par administration réitérée = toxicité chronique et subaiguë • BUTS – Mettre en évidence les altérations fonctionnelles et anatomopathologiques consécutives aux administrations répétées de la substance – Déterminer la dose maximale non toxique – Coefficient de sécurité • Dose non toxique/dose thérapeutique chez l’homme • Ou calcul sur les AUC – Quel est le premier organe lésé ? – Au bout de combien de temps ? – Le changement est-il réversible ? • Des études toxicocinétiques sont réalisées en parallèle – Lot satellite (rongeur) • 3 animaux/points • 3/5 points/dose ICH M3 (R2) Choix des doses Durée des études Protocole des études de tox en doses répétées • IMPORTANCE DU CHOIX DES ESPÈCES – Métabolisme proche de l’homme (mais le métabolisme chez l’homme est souvent inconnu à ce stade) – Deux espèces dont une non rongeur (chien, singe) – Le nombre d’animaux pour l’espèce non rongeur sera réduit (4 de chaque sexe) • LE PRODUIT TESTÉ SERA AUSSI PROCHE QUE POSSIBLE DU PRODUIT FINI QUI SERA COMMERCIALISÉ • LA VOIE D’ADMINISTRATION SERA IDENTIQUE À CELLE QUI SERA UTILISÉE CHEZ L’HOMME CHOIX DES DOSES • Une dose faible, que l’on espère bien tolérée (sans toxicité) mais qui sera déjà un multiple de la dose thérapeutique humaine • Une dose forte qui est souvent la dose maximale tolérée. Dose toxique mais non létale • Une dose intermédiaire RECHERCHE D'UNE DOSE SANS EFFET • No Observed Adverse Effect Level = N.O.A.E.L. • No observed Effect Level = N.O.E.L. • Examen clinique quotidien • Dosages biochimiques et hématologiques • Recherche de phénomènes particuliers – Accumulation – Induction enzymatique • En fin d'étude – Euthanasie de l'animal – Etude histologique de 31 tissus ou organes + pesées • Les animaux morts en cours d'étude sont également autopsiés • Importance des témoins – Animaux – Produits de référence Etudes de Pharmacocinétique (toxicocinétique) et de métabolisme sous l'angle de la sécurité (ICH) • Améliorer l'interprétation des études toxicologiques • Validation des résultats des études toxicologiques • Pertinence du choix des espèces • Relation Concentration/Toxicité • Rôle des métabolites Exemple d’une étude 4 semaines chez le chien NOAEL = 4.6 mg/kg/J Exemple tox répétée Exemple de données individuelles histopathologie