Le dossier toxicologique (prŽ

Les études toxicologiques
LE PRODUIT À TESTER
• De nombreux facteurs peuvent influencer la
pharmacocinétique et/ou la toxicité :
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–
–
forme galénique
impuretés
excipients
taille des particules
• Les études toxicologiques seront réalisées avec des
lots de produits proche de ceux qui seront utilisés
pour les essais cliniques ou commercialisés.
• Collaboration toxicologues/galénistes.
LA VOIE D'EXPOSITION
• En général la voie orale plus une autre voie (intrapéritonéale, I.V., inhalation,...)
• Dépend de l'utilisation envisagée
• Si une utilisation I.V. est prévue, l'utilisation de cette
voie est obligatoire
• Les différences de toxicité observées entre deux
voies doivent être expliquées :
– Intérêt des études toxicocinétiques
• Voie orale
– Solutions
– Suspensions
• dans l'eau
• dans une solution d'hydroxyméthyl cellulose à 0.5 %
...
– Gavage
– Dans l'alimentation
• La voie I.V.
– Bolus
– Perfusion
• Application sur la peau
– Animal rasé ou "nu"
– Eviter le léchage
– Utiliser éventuellement un pansement
• Inhalation
– Gaz
– Utilisation d'un masque
– Exposition de l'animal entier
• peu utilisé pour les médicaments
• contamination (peau, nourriture...)
LES DOSES
• Exprimées en mg/kg
• Le choix des doses ICH M3 (R2)
Les études toxicologiques réalisées en vue de
l’obtention d’une AMM
• But : évaluer les propriétés d’une nouvelle molécule
sur le plan de la sécurité
• Appréciation générale du bénéfice attendu par
rapport aux risques encourus
• Ces études permettent d’évaluer
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–
–
–
–
les doses maximales tolérables
les organes, tissus et cellules cibles
les fonctions physiologiques altérées
les risques d’altérations génétiques et de cancérogenèse
les risques sur la fonction de reproduction
Toxicité par administration unique = toxicité
aiguë
• Première des études toxicologiques
• Administration unique d’une dose élevée
• La recherche d’une dose létale n’est plus
obligatoire depuis longtemps
DOSE MINIMALE MORTELLE (DMM)
• Dose minimale capable de tuer un animal
(arrêt cardiaque)
• Donne une indication pour les études de DL50
(si on la recherche)
LA DL50
(Dose létale 50)
• Dose qui tue 50 % des animaux
• Directive de 1987 (CEE) demande une DL50
approximative
– "La DL50 est approximativement de..."
– "La DL50 est supérieure à...«
• On peut donner la « DL0 »
• Utile pour classer le produit dans l'échelle des
toxicités
• Parfois utile en cas d'intoxication accidentelle ou
volontaire chez l'homme (connaissance des organes
cibles et des lésions observées)
• Utile pour le choix des doses des études ultérieures
• Première approche de la dose maximale tolérée
Protocole standard des études de tox aigue
• Deux espèces rongeurs (en général rat et souris)
• On utilise parfois le chien en tox aigue mais en
principe à des doses non létales
• Tests sur substance médicamenteuses et parfois sur
métabolites et impuretés
• Travailler sur les 2 sexes au moins pour une espèce
– Deux voies d'administration (en général P.O., I.P.)
– Toutes les conditions opératoires (âge et poids des
animaux, conditions d'administration...) doivent être fixées
et précisées dans le rapport final
– Si DL50, recherche approximative : 3 groupes de 3 ou 5
animaux sont suffisants
– La DL50 peut être approchée avec 30 animaux (vs 400
auparavant)
• Surveillance des animaux
–
–
–
–
Pendant les heures qui suivent
Jusqu'à 14 jours
Mortalité, évolution pondérale
Système nerveux central
• comportement
• mouvements
• réactions aux stimuli
– Système nerveux végétatif
• myosis
• mydriase
– Fonction respiratoire
– ...
– Fonction cardiaque
• Tachycardie
• Bradycardie
• ...
– Fonction digestive
• Vomissements
• Diarrhée
• Causes des décès
– Autopsie
– Recherche de l'organe-cible
– Période où la mort survient
Toxicité par administration réitérée = toxicité
chronique et subaiguë
• BUTS
– Mettre en évidence les altérations fonctionnelles et
anatomopathologiques consécutives aux administrations
répétées de la substance
– Déterminer la dose maximale non toxique
– Coefficient de sécurité
• Dose non toxique/dose thérapeutique chez l’homme
• Ou calcul sur les AUC
– Quel est le premier organe lésé ?
– Au bout de combien de temps ?
– Le changement est-il réversible ?
• Des études toxicocinétiques sont réalisées en
parallèle
– Lot satellite (rongeur)
• 3 animaux/points
• 3/5 points/dose
ICH M3 (R2)
Choix des doses
Durée des études
Protocole des études de tox en doses
répétées
• IMPORTANCE DU CHOIX DES ESPÈCES
– Métabolisme proche de l’homme (mais le métabolisme chez
l’homme est souvent inconnu à ce stade)
– Deux espèces dont une non rongeur (chien, singe)
– Le nombre d’animaux pour l’espèce non rongeur sera réduit (4 de
chaque sexe)
• LE PRODUIT TESTÉ SERA AUSSI PROCHE QUE POSSIBLE DU PRODUIT
FINI QUI SERA COMMERCIALISÉ
• LA VOIE D’ADMINISTRATION SERA IDENTIQUE À CELLE QUI SERA
UTILISÉE CHEZ L’HOMME
CHOIX DES DOSES
• Une dose faible, que l’on espère bien tolérée (sans
toxicité) mais qui sera déjà un multiple de la dose
thérapeutique humaine
• Une dose forte qui est souvent la dose maximale
tolérée. Dose toxique mais non létale
• Une dose intermédiaire
RECHERCHE D'UNE DOSE SANS EFFET
• No Observed Adverse Effect Level = N.O.A.E.L.
• No observed Effect Level = N.O.E.L.
• Examen clinique quotidien
• Dosages biochimiques et hématologiques
• Recherche de phénomènes particuliers
– Accumulation
– Induction enzymatique
• En fin d'étude
– Euthanasie de l'animal
– Etude histologique de 31 tissus ou organes + pesées
• Les animaux morts en cours d'étude sont également
autopsiés
• Importance des témoins
– Animaux
– Produits de référence
Etudes de Pharmacocinétique (toxicocinétique) et de
métabolisme sous l'angle de la sécurité (ICH)
• Améliorer l'interprétation des études toxicologiques
• Validation des résultats des études toxicologiques
• Pertinence du choix des espèces
• Relation Concentration/Toxicité
• Rôle des métabolites
Exemple d’une étude 4 semaines chez le
chien
NOAEL = 4.6 mg/kg/J
Exemple tox répétée
Exemple de données individuelles
histopathologie