Formation continue en Hématologie pour le DXH800 de

Transcription

LABORATOIRE DE L’ICHV À MARTIGNY
FORMATION CONTINUE EN
HEMATOLOGIE POUR LE DXH800
DE BECKMANN COULTER
Travail de Diplôme
Ecole Supérieure de la Santé TAB 54e
Responsable Philippe Godon
Morand Fanny
30/03/2015
Figure 1 : DxH800
Travail de Diplôme
Formation continue en Hématologie pour le DxH800 de Beckman Coulter
Laboratoire ICHV de l’hôpital de Martigny
Sommaire
Le DxH800 de Beckman Coulter est un automate d’hématologie de nouvelle génération. Il est
actuellement installé dans tous les laboratoires de l’Institut Central des Hôpitaux Valaisans
(ICHV).
Lors du travail de routine en hématologie plusieurs patients ont été sélectionnés en fonction des
pathologies dont ils sont atteints. Ce travail va mettre en avant les caractéristiques propres à
certaines maladies pouvant être détectées à l’aide des nouvelles représentations proposées par
le DxH800, dans le but d’améliorer le suivi et la détection de pathologies.
Afin d’obtenir mon diplôme de technicienne en analyses biomédicales (TAB) et en vue de
terminer ma formation, j’ai réalisé un travail de diplôme durant mon stage de dernière année au
laboratoire de l’ICHV de l’hôpital de Martigny sous la supervision du technicien chef en
analyses biomédicales. J’ai fondé mon travail d’après des données de prélèvements sanguins
de patients hospitalisés. Ce travail m’a permis de démontrer qu’à partir des hémogrammes et
des scattergrammes fournis par le DxH800 il est possible d’orienter le diagnostic.
Mots clés :
DxH800, hématologie, hémogramme, scattergramme, pathologies
Abstract
The Beckman Coulter DxH800 is a new generation hematology automat. It is a present installed
in all of the laboratories of the Institute Central of Wallis Hospital.
During routine hematology work several patients were selected according to the pathologies
they were suffering from. This study will show that certain characteristics typical of certain
illnesses can be detected with the help of new pathways proposed by the DxH800. This
technology can thus the detection and follow up of the pathologies concerned.
In order to obtain my biomedical laboratory technician diploma and finish my formation during
my last year of work experience I did some pratical research for my diploma under the
supervision of the head biomedical laboratory technician. I based my work on routine blood
samples taken from hospitalised patients. By looking at the blood samples results. I was able to
prove that from the blood counts and the scatterplot provied by the DxH800 it is possible to
assist in the diagnosis of certain pathologies.
Keywords :
DxH800, hematology, blood counts, scatterplot, pathologies.
Morand Fanny TAB 54e
École supérieure de la Santé de Lausanne
Mars 2015
2
Travail de Diplôme
Table des matières
1
INTRODUCTION .................................................................................................................................. 5
1.1
1.2
PRÉSENTATION DU LABORATOIRE (1) ................................................................................................ 5
PRÉSENTATION DU TRAVAIL DE DIPLÔME ........................................................................................... 6
2
BUTS .................................................................................................................................................... 7
3
DÉVELOPPEMENT ............................................................................................................................. 8
3.1
MATÉRIEL ET MÉTHODE ................................................................................................................... 8
3.1.1 Présentation du DxH800 Beckman Coulter.............................................................................. 8
3.1.2 Principe de mesure du DxH800................................................................................................ 9
3.1.2.1
3.1.2.2
Comptage cellulaire ( (2) p.193-197 (3) p.108) ............................................................................... 9
Répartition cellulaire ( (2) p.194-195 (3) p.161-170) ..................................................................... 10
3.1.3 Numération des érythrocytes ( (3) p.107-113) ....................................................................... 12
3.1.4 Numération des thrombocytes ( (3) p.140-148) ..................................................................... 13
3.1.5 Numération de leucocytes ( (3) p.149-158) ............................................................................ 14
3.1.6 Répartition leucocytaire ( (3) p.159-176) ................................................................................ 15
3.1.7 Quantification des érythroblastes ( (3) p.177-182) ................................................................. 17
3.1.8 Quantification des réticulocytes ( (3) p.183-192).................................................................... 19
3.1.9 Alarmes du DxH800( (3) p.219).............................................................................................. 20
3.2
MODE OPÉRATOIRE ....................................................................................................................... 21
3.2.1 Comment rechercher un patient sur le DxH800 ..................................................................... 21
3.2.2 Comment imprimer les feuilles de résultats ........................................................................... 22
3.2.3 Comment enregistrer numériquement les hémogrammes et les scattergrammes ................ 22
3.3
RÉSULTATS ................................................................................................................................... 23
3.3.1 Pathologie érythrocytaires ...................................................................................................... 23
3.3.1.1
3.3.1.2
3.3.1.3
3.3.2
Pathologie leucocytaire .......................................................................................................... 40
3.3.2.1
3.3.2.2
3.3.2.3
3.3.2.4
3.3.2.5
3.3.2.6
3.3.3
Anémie Ferriprive ( (4) p.49-53 (2) p.324-326 (5) p.8-15) ............................................................. 23
Β-Thalassémie mineure ( (4)p.67-71 (2)p.331) ............................................................................. 29
Malaria (6) ..................................................................................................................................... 34
Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) ( (4) p.285-291 (2) p.391-393) ........................................ 40
Mononucléose infectieuse ( (4) p.267-275 (2) p.355-358) ............................................................ 46
Leucémie Myéloïde Chronique (LMC) ( (4) p.382-384 (2) p.215-220) .......................................... 52
Myélofibrose primaire ( (4) p.225-228 (2) p.384-386 (7)p.131-132) .............................................. 59
Leucémie MyéloMonocytaire Chronique (LMMC) ( (4) p.242 (2)p.390 (7) p.146) ......................... 67
Anémie Réfractaire avec Excès de Blastes (AREB) ( (4) p.241-242 (2) p.389-390 (8) p.11-23)... 74
Autres particularités préanalytiques ....................................................................................... 80
3.3.3.1
3.3.3.2
Agrégats de thrombocytes dus à l’EDTA ...................................................................................... 80
Agrégats de neutrophile dus à l’EDTA .......................................................................................... 83
3.4
DISCUSSION .................................................................................................................................. 86
3.4.1 Anémie ferriprive, Monsieur F. M. né, le 18.02.1945 ............................................................. 86
3.4.2 -Thalassémie mineure, Madame T. E. née, le 02.08.1984 .................................................. 86
3.4.3 Malaria, Monsieur L. J-M. né, le 13.09.1954 .......................................................................... 86
3.4.4 Leucémie Lymphoïde Chronique, Monsieur O. P. né, le 30.04.1933 .................................... 87
3.4.5 Mononucléose infectieuse, Monsieur S. D. né, le 29.10.1998 ............................................... 87
3.4.6 Leucémie Myéloïde Chronique, Monsieur R. S. né, le 16.05.1946 ........................................ 87
3.4.7 Myélofibrose primaire, Monsieur H. M. né, le 29.09.1939 ...................................................... 88
3.4.8 Leucémie Myélomonocytaire Chronique, Monsieur B. R. A. né, le 15.12.1937 ..................... 88
3.4.9 Anémie Réfractaire avec Excès de Blastes, Madame B. J.-M. née, le 18.06.1935 ............... 88
4
CONCLUSION ................................................................................................................................... 89
5
CONCLUSION PERSONNELLE ....................................................................................................... 90
Mars 2015
3
Travail de Diplôme
6
REMERCIEMENTS ............................................................................................................................ 91
7
TRAVAUX CITÉS ............................................................................................................................... 92
8
ICONOGRAPHIE ............................................................................................................................... 93
9
RÉFÉRENCE DE L’ICONOGRAPHIE ............................................................................................... 97
10
LEXIQUE ............................................................................................................................................ 98
11
ANNEXES ........................................................................................................................................ 100
11.1
11.2
11.3
11.4
11.5
11.6
11.7
11.8
11.9
11.10
11.11
11.12
11.13
11.14
11.15
11.16
11.17
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT F.M NÉ, LE 18.02.1945 .. 100
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LA PATIENTE T.E. NÉE, LE 02.08.1984
102
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT L.J.-M. NÉ, LE 13.09.1954
103
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE DE BÂLE POUR LE PATIENT L.J.-M. NÉ, LE 13.09.1954 .......... 105
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT O.P. NÉ, LE 30.04.1933 . 106
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT S.D. NÉ, LE 29.01.1998 . 107
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT R.S. NÉ, LE 16.05.1946 . 109
RAPPORT DÉFINITIF DU DR LOVEY POUR LE PATIENT R.S. NÉ, LE 16.05.1946 ................................ 110
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE DE CYTOGÉNÉTIQUE DU CHUV POUR LE PATIENT R.S. NÉ, LE
16.05.1946 ................................................................................................................................ 112
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE DE BIOLOGIE MOLÉCULAIRE DU CHUV POUR LE PATIENT R.S. NÉ,
LE 16.05.1946 ............................................................................................................................ 113
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT H.M. NÉ, LE 29.09.1939 114
RAPPORT DÉFINITIF DU DR LOVEY POUR LE PATIENT H.M. NÉ, LE 29.09.1939 ................................ 116
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT B.R.A. NÉ, LE 15.12.1937
118
RAPPORT DÉFINITIF DU DR LOVEY POUR LE PATIENT B.R.A NÉ, LE 16.05.1946 .............................. 120
RAPPORT DÉFINITIF DU LABORATOIRE ICHV MARTIGNY POUR LE PATIENT B.J.-M. NÉE, LE 18.06.1935
122
RAPPORT DÉFINITIF DU DR LOVEY POUR LE PATIENT B.J.-M. NÉE, LE 18.06.1935 .......................... 124
DOSSIER DXH800 DU PATIENT G. J.-P. NÉ, LE 20.01.1929 ........................................................... 126
Mars 2015
4
Travail de Diplôme
1 Introduction
Durant la dernière année de formation en vue l’obtention du diplôme de technicienne en
analyses biomédicales un travail de diplôme doit être effectué, en relation avec la
profession. Mon travail de diplôme a été réalisé au laboratoire de l’ICHV de Martigny lors
de mon dernier stage d’une durée de 6 mois. Ce laboratoire est polyvalent, mais mon
travail de diplôme porte sur la recherche et l’interprétation de cas pathologiques sur un
nouvel appareil d’hématologie le DxH800 de Beckman Coulter. Le choix du thème s’est fait
en accord avec le responsable du laboratoire. Un power point contenant les hémogrammes
et les scattergrammes des cas pathologiques présentés lors de ce travail sera fourni au
laboratoire afin de permettre une meilleure interprétation des données du DxH800.
1.1
Présentation du laboratoire (1)
Le laboratoire d’analyses médicales de l’hôpital de Martigny est un des laboratoires de
l’Institut Central des Hôpitaux Valaisans dont le siège principal se trouve à Sion. Ce
laboratoire est sous la direction de M. Philippe Godon, technicien chef en analyses
biomédicales, sous la responsabilité des différents FAMH de chaque domaine du
laboratoire.
L’hôpital de Martigny compte 150 lits comprenant des services de médecine, de
gériatrie, d’orthopédie, d’hémodialyse, de soins ambulatoires, de soins continus,
d’oncologie et d’urgences. Le laboratoire compte 12 techniciens en analyses
biomédicales ES polyvalents assurant des prestations dans 4 principaux domaines tels
que la chimie clinique, l’hématologie, l’hémostase et la sérologie transfusionnelle. Le
laboratoire assure un service de jour comme de nuit pour l’exécution d’analyses
médicales en continu.
Mars 2015
5
Travail de Diplôme
1.2
Présentation du travail de diplôme
Pour une meilleure standardisation des méthodes de travail, tous les laboratoires
d’hématologie de l’ICHV ont fait l’acquisition d’un nouvel appareil d’hématologie : le
DxH800 de Beckman Coulter. Cet automate de nouvelle génération, dont les principes
de mesures seront expliqués, permet une plus grande précision de comptage et de
différenciation. Ce travail va sensibiliser le personnel à être plus attentif aux nouvelles
représentations du DxH800 afin de permettre une meilleure investigation des cas
présents lors du travail de routine.
Les cas pathologiques ont été choisis, lors de la routine, en fonction des différents
paramètres caractéristiques de chaque pathologie. Ainsi le technicien en analyses
biomédicales peut accéder à de nouvelles informations simplement grâce aux
paramètres et aux nouveaux graphiques du DxH800. Un certain nombre d’anomalies
peuvent être mis en évidence afin de nous permettre d’orienter le diagnostic.
Le DxH800 ne suffira pas à remplacer les techniciens en analyses biomédicales, car
certaines suspicions doivent être analysées manuellement par le technicien en
analyses biomédicales afin de valider le résultat.
Les différentes pathologies étudiées dans mon travail vont faire l’objet d’un rappel
théorique étudié lors de ma formation et des points essentiels à l’orientation du
diagnostic. Les hémogrammes et les scattergrammes m’ont permis de mettre en
évidence les caractéristiques de chaque pathologie. Les cas pathologiques
documentés seront présentés aux techniciens en analyses biomédicales du laboratoire
de l’ICHV de Martigny et une copie de mon travail de diplôme sera distribuée aux
autres laboratoires de l’ICHV.
Mars 2015
6
Travail de Diplôme
2 Buts
Ce travail va permettre de mieux comprendre les principes de mesures du DxH800, ainsi
que la recherche et l’interprétation de résultats de cas pathologiques rencontrés et
sélectionnés lors de mon stage de dernière année de ma formation de technicienne en
analyses biomédicales au laboratoire ICHV de l’hôpital de Martigny.
Ce travail repose sur une base de données présente dans le DxH800, isolée à partir des
prélèvements sanguins effectués sur des patients hospitalisés ou présents en consultation
ambulatoire.
À l’aide de ces données, j’ai réalisé une étude de cas en utilisant des hémogrammes et des
scattergrammes propres à certaines pathologies. Les patients ont été choisis en fonction de
paramètres hématologiques spécifiques à leurs pathologies.
En se basant sur l’interprétation des paramètres donnés par le DxH800, il est important de
pouvoir déceler les caractéristiques propres à certaines pathologies et ainsi orienté le
diagnostic.
Un power point contenant les hémogrammes et les scattergrammes des cas pathologiques
présentés lors de ce travail sera fourni aux laboratoires afin de permettre une meilleure
interprétation des données et une meilleure utilisation du DxH800.
Mars 2015
7
Travail de Diplôme
3 Développement
3.1
Matériel et méthode
3.1.1 Présentation du DxH800 Beckman Coulter
Le DxH800 est utilisé pour les analyses de routine en hématologie. Cet automate
est capable de réaliser les formules sanguines simples (FSS), les formules
sanguines complètes (FSC) et la numération des réticulocytes (Réti).
Les paramètres suivants sont analysés :
Formule simple FSS :
GB
Globules Blancs
UWBC
Globules Blancs non-corrigés
GR
Globules Rouges
HB
Hémoglobine
Ht
Hématocrite
VMC
Volume Corpusculaire Moyen d’un érythrocyte
TCMH
Teneur Corpusculaire Moyenne d’un érythrocyte
CCMH
Concentration Corpusculaire Moyenne des érythrocytes
IDC
= RDW = anisocytose érythrocytaire
PLT
Plaquettes
VMP
Volume Moyen Thrombocytaire
Formule complète FSC :
GB
Globules Blancs
UWBC
Globules Blancs non-corrigés
GR
Globules Rouges
HB
Hémoglobine
Ht
Hématocrite
VMC
Volume Corpusculaire Moyen d’un érythrocyte
TCMH
Teneur Corpusculaire Moyenne d’un érythrocyte
CCMH
Concentration Corpusculaire Moyenne des érythrocytes
IDC
= RDW = anisocytose érythrocytaire
PLT
Plaquettes
VMP
Volume Moyen Thrombocytaire
NE-NE#
Neutrophiles totaux en valeur relative et absolue
LY-LY#
Lymphocytes en valeurs relative et absolue
MO-MO#
Monocytes en valeurs relative et absolue
EO-EO#
Eosinophiles en valeur relative et absolue
BA-BA#
Basophiles en valeur relative et absolue
ERB-ERB#
Erythroblastes en valeur relative et absolue
Réticulocytes :
Réti
Réti#
VMR
IMR
Réticulocytes en %
Réticulocytes en G/L
Volume Moyen d’un Réticulocytes
Rapport entre les réti. Immatures et les réti. Matures
Mars 2015
8
Travail de Diplôme
3.1.2 Principe de mesure du DxH800
3.1.2.1 Comptage cellulaire ( (2) p.193-197 (3) p.108)
Le DxH800 utilise le principe Accucount regroupant la mesure de l’impédance et
la micro-cinétique pour les comptages des différentes cellules sanguines telles
que les leucocytes, les érythrocytes et les thrombocytes. La micro cinétique
établit le temps de passage entre chaque élément.
La mesure de l’impédance correspond à la détection et à la mesure des
modifications de la résistance électrique entre deux électrodes.
L’échantillon est aspiré de façon constante par l’automate. Les cellules
contenues dans l’échantillon sont mises en suspension dans un liquide
conducteur (solution électrolytique). Ainsi, elles vont pouvoir passer une à une
devant le détecteur pour être comptabilisées. Lors du passage d’une cellule à
travers l’orifice calibré, elle déplace avec elle un volume donné de liquide
conducteur créant une variation de résistance entre les deux électrodes.
Cette variation est enregistrée sous forme d’impulsion. Le nombre de variation du
courant électrique est proportionnel au nombre de cellules de l’échantillon ayant
traversé l’orifice. Il enregistre également l’amplitude de la variation qui est
proportionnelle au volume de la cellule.
Les différentes variations sont classées dans différents canaux en fonction de
leur amplitude afin de générer un histogramme et d’en déterminer le volume
moyen. Afin d’assurer une bonne résolution, il est nécessaire d’avoir un nombre
de canaux élevés. Le DxH800 traduit avec précision la réalité cellulaire, car il
possède 256 canaux pour chacune des trois dimensions soit 2563 canaux.
Lorsque deux cellules passent en même temps dans l’orifice cela génère une
impulsion de grande amplitude. Ce phénomène est appelé le passage en
coïncidence. L’automate corrige automatiquement le passage en coïncidence.
A la sortie de l’orifice, il possède un flux de balayage qui empêche les cellules
déjà comptées de retourner dans la zone de détection et de les compter à
nouveau.
Figure 2 : Principe Coulter
Mars 2015
9
Travail de Diplôme
3.1.2.2 Répartition cellulaire ( (2) p.194-195 (3) p.161-170)
Le DxH800 effectue les répartitions cellulaires selon le principe de la cytomorphologie digitalisée. Ce principe utilise la technologie VCS, correspondant au
Volume, à la Conductivité et aux Scattergrammes. La nouveauté du DxH800
permet de réaliser des scattergrammes en utilisant 5 angles de mesures. Cette
méthode permet d’effectuer des répartitions leucocytaires et de quantifier les
érythroblastes et les réticulocytes.
Afin de procéder à la répartition cellulaire, l’échantillon sanguin est dirigé dans le
système de cytométrie de flux. L’échantillon est dilué et passe à travers une
solution isotonique appelée liquide de gainage. L’échantillon dilué et le liquide de
gainage ne sont pas soumis à la même pression ce qui facilite le passage des
cellules une à une à travers la cellule de mesure. C’est ce que l’on appelle la
focalisation hydrodynamique.
Lorsque les cellules traversent une à une la cellule de mesure, elles sont
soumises à 7 mesures simultanées :
La mesure du volume : calculé selon le principe Accucount expliqué
précédemment.
La mesure de la conductivité : les éléments sont soumis à un courant
de haute fréquence. Selon la structure de leurs noyaux (taille, forme, chromatine,
nucléole) et la composition de leur cytoplasme, le courant va être modifié. Cette
modification permet de différencier les éléments de même taille mais de
structures différentes.
La mesure de la diffraction laser : à l’aide d’une diode laser rouge la
diffraction correspond à la structure interne, à la surface de la membrane et à la
nature des granulations. Le DxH800 permet d’analyser 5 angles de diffraction
différents.
1. Electrode inférieure
2. Electrode supérieure
3. Petre de lumière axial 0°
AL2 = Axial Light Loss
4. Dispersion de la lumière à angle faible 5°
LALS = Low Angle Light Scatter
5. Diffusion de la lumière médiane inférieure 9-19°
LMALS = Low Median Angle Light Scatter
6. Diffusion de la lumière médiane supérieure 20-43°
UMALS = Upper Median Angle Light Scatter
7. UMALS + LMALS = MALS
Figure 3 : Cytométrie de flux
Mars 2015
10
Travail de Diplôme
Angle LALS à 5°
Figure 4 : Diffraction
Nous renseigne sur la taille de la cellule grâce à la diffraction.
Angle AL2
à 0°
Figure 5 : Faisceau axial
Nous indique la lumières absorbée par la cellule, en mesurant
l’ombre portée, à l’aide d’un faisceau axial.
3 angles
de 9° à 43°
Figure 6 : Granularité
Nous informe sur la granularité et la complexité des cellules grâce
aux angles :
MALS :
LMALS + UMALS
LMALS :
de 9° à 19°
UMALS :
de 20° à 43°
Mars 2015
11
Travail de Diplôme
3.1.3 Numération des érythrocytes ( (3) p.107-113)
La numération se fait selon le principe Accucount expliqué précédemment.
L’automate procède à une dilution 1/650e à partir de l’échantillon. Cet échantillon
dilué est ensuite dirigé vers trois orifices de comptage. Le DxH800 a la particularité
d’effectuer trois comptages dans trois orifices de comptage différents ce que ne
possédait pas l’ancien automate. Il effectue une comparaison statistique des
différents comptages et il rend le résultat à partir d’une moyenne calculée sur les
différents comptages.
Intervalle de référence pour les érythrocytes :
Érythropénie :
Polyglobulie :
4.40-5.90 T/L
<4.40 T/L
>5.90 T/L
Le volume moyen d’un érythrocyte est de 80 à 100 fL. Le DxH800 enregistre les
globules rouges ayant un volume compris entre 24 et 360 fL. La plage de mesure
allant de 24 à 36 fL sert à la détection des interférences. Pour l’étude de la
population érythrocytaire les valeurs sont prises entre 36 et 360 fL. Les érythrocytes
ayant un volume inférieur à 80 fL sont plus petits que la moyenne, on dit qu’ils sont
microcytaires. Les hématies de plus de 100 fL sont considérées comme
macrocytaires, plus grandes que la moyenne.
Nombre
Le DxH800 fournis un hémogramme représentatif de la population érythrocytaire.
Volume
Figure 7 : Hémogramme des globules rouges
Si lors de la période de mesure le nombre d’impulsions obtenu est insuffisant, il
procède alors à une extension de comptage (par calcul) afin de rendre un résultat
avec une meilleure précision possible en cas d’érythropénie.
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12
Travail de Diplôme
3.1.4 Numération des thrombocytes ( (3) p.140-148)
L’analyse des plaquettes se fait en même temps que les érythrocytes. Le DxH800
procède à la même dilution au 1/650e que pour les globules rouges. Cet échantillon
dilué et ensuite envoyé vers les trois orifices de comptages pour effectuer trois
comptages différents et en faire une comparaison statistique. Le résultat est rendu à
partir d’une moyenne calculée sur les différents comptages.
Intervalle de référence des thrombocytes :
Thrombopénie :
Thrombocytose :
150-350 G/L
<150 G/L
>300 G/L
Les cellules sont enregistrées entre 2 et 25 fL. Les thrombocytes ayant le même
volume qu’un petit globule rouge >70 fL sont appelées plaquettes géantes.
Nombre
Si lors de la période de mesure le nombre d’impulsions obtenu est insuffisant, le
phénomène est identique que pour la numération des érythrocytes.
Volume
Figure 8 : Hémogramme des plaquettes
Les plaquettes passent également dans un canal EPICS du cytomètre de flux
permettant de distinguer des anomalies morphologiques tels que les plaquettes
géantes et les agrégats de plaquettes. Un algorithme utilise les données de
l’analyseur des érythroblastes afin d’identifier et de quantifier les populations
représentants des plaquettes géantes ou des agrégats plaquettaires.
Mars 2015
13
Travail de Diplôme
3.1.5 Numération de leucocytes ( (3) p.149-158)
L’automate procède à la lyse des globules rouges puis à une dilution au 1/250e à
partir de l’échantillon. Cet échantillon dilué est ensuite dirigé vers trois orifices de
comptage pour effectuer trois comptages différents. Le DxH800 effectue une
comparaison statistique des différents comptages et il rend le résultat d’une
moyenne calculée à partir d’au moins deux comptages.
Intervalles de référence pour les leucocytes :
Leucopénie :
Leucocytose :
4-10 G/L
<4 G/L
>10 G/L
La courbe de l’hémogramme permet de distinguer trois populations leucocytaires
sur les cinq présentes dans le sang. Les cellules sont enregistrées entre 30 et 450
fL. La plage entre 30 et 35 fL permet la détection d’interférences (érythroblastes,
agrégat de plaquette). Pour l’étude de la population leucocytaire les valeurs sont
prises entre 35 et 450 fL.
bleu
vert
rose
Nombre
Les lymphocytes
Les monocytes
Les neutrophiles
Volume
Figure 9 : Hémogramme des globules blancs
Si le nombre d’impulsion obtenue lors de la période de mesure est insuffisant, le
DxH800 procède à une extension de comptage (par calcul) afin de rendre un
résultat avec la meilleure précision possible en cas de leucopénie.
Mars 2015
14
Travail de Diplôme
3.1.6 Répartition leucocytaire ( (3) p.159-176)
La répartition se fait au niveau d’un cytomètre utilisant le principe de la cytomorphologie digitalisée. Le module d’aspiration délivre un volume de sang total
dans cette chambre de comptage. Un agent lysant est additionné pour détruire la
population érythrocytaire, puis un stabilisant pour stopper la lyse et maintenir les
globules blancs dans un état proche de l’état natif. L’automate effectue sa répartition
sur 8'192 cellules correspondant approximativement à 250'000 données. Les
résultats de la formule sont donnés en pourcentage et en valeur absolue dont l’unité
est en G/L. Ils sont représentés en mono-, bi- et tri-dimension.
Le DxH800 distingue 5 populations différentes :
Les neutrophiles totaux
Intervalle de référence :
Valeurs absolues
Valeurs relatives
1.5-7.0 G/L
(45-75%)
Seuls les neutrophiles totaux sont mentionnés lorsqu’il s’agit d’une répartition
effectuée par l’automate.
Les lymphocytes
1.0-4.0 G/L
(25-40%)
Les monocytes
<0.8 G/L
(<8 %)
Les éosinophiles
<0.5 G/L
(<5 %)
Les basophiles
<0.1 G/L
(<1 %)
Lors d’une répartition manuelle, on différentie les types leucocytaires sur 100 ou sur
200 leucocytes. On doit ensuite effectuer un calcul afin de pouvoir rendre les
résultats de la différenciation en valeur absolue (G/L).
Leuco. Totaux (G/L) x le nombre d’un type de leucocytes (%) = G/L
100
Mars 2015
15
Travail de Diplôme
Une gestion des données permet un traitement multidimensionnel en temps réel de
toutes les mesures réalisées sur les 8'192 cellules analysées. Cette gestion permet
la représentation des différentes populations leucocytaires sur un scattergramme
dont les coordonnées sont le volume, la conductivité et la diffraction laser (5
angles). Les différentes populations de leucocytes forment alors des nuages de
points en fonction de leur résultat VCS. Ces populations sont identifiables en
fonction de leur position sur le graphique par rapport à leur taille et leur granularité.
Une représentation en stéréogramme (surface) permet une autre approche pour la
distinction des cellules anormales.
Pour rendre la lecture plus facile, un code couleur spécifique correspond aux
différentes populations leucocytaires :
Les neutrophiles :
rose
Les lymphocytes :
bleu
Les monocytes :
vert
Les éosinophiles :
orange
Les basophiles :
blanc
Figure 10 : Scattergramme Diff 3D
Figure 12 : Scattergramme Diff Surface
Il peut également y avoir une zone extra leucocytaire, représentée par des points
rouges. Ces points peuvent correspondre à :
Des érythroblastes
Des amas de plaquettes
Des globules rouges non lysés
Des débris cellulaires
Mars 2015
16
Travail de Diplôme
3.1.7 Quantification des érythroblastes ( (3) p.177-182)
Grâce à la méthode de cyto-morphologie digitalisée, le DxH800 effectue la
quantification des érythroblastes. Le module d’aspiration délivre un volume de sang
total dans la chambre des érythroblastes. Dans la chambre de comptage, un agent
lysant est additionné pour détruire les érythrocytes et les éléments non nucléés.
L’automate effectue sa quantification sur 8'192 cellules correspondant
approximativement à 250'000 données. Une gestion des données permet le
traitement multidimensionnel en temps réel des mesures réalisées sur les 8'192
cellules analysées. Ce module permet la représentation spatiale des érythroblastes
dans un espace cubique dont les coordonnées sont le volume, la conductivité et la
diffraction laser (5 angles).
Pour rendre la lecture plus facile, un code couleur spécifique correspond aux
différentes populations :
Les leucocytes
Bleu
Les thrombocytes et autres
Vert
Les érythroblastes
Rouge
1
N
lymphocytes 2neutrophiles
2
2
Figure 14 : Scattergramme Erb 3D
1
1
Figure 15 : Scattergramme Erb 2D
1
2
Figure 16 : Scattergramme Erb Surface
Le DxH800 possède un panel de 28 paramètres qui prennent en compte le volume
moyen et la déviation standards des populations érythroblastiques et non
érythroblastiques. Ce panel permet de définir si cette cellule appartient à la
population érythroblastique ou à une autre population.
Mars 2015
17
Travail de Diplôme
Les scattergrammes du DxH800 permettent une bonne discrimination entre les
érythroblastes et les globules blancs. Ils établissent une meilleure détection des
agrégats plaquettaires ou de plaquettes géantes.
Agrégats plaquettaires
Figure 17 : Agrégats plaquettaire scattergramme Erb 2D
Plaquettes géantes
Figure 18 : plaquettes géantes scattergramme Erb 2D
Mars 2015
18
Travail de Diplôme
3.1.8 Quantification des réticulocytes ( (3) p.183-192)
Grâce à la méthode de cyto-morphologie digitalisée, le DxH800 effectue la
quantification des réticulocytes. Le module d’aspiration délivre un volume de sang
total dans la chambre des réticulocytes. En premier lieu, il y a une coloration
supravitale effectuée sur l’aliquote de sang. On ajoute ensuite le transparisant qui
permet de rendre l’hémoglobine invisible, afin de rendre les érythrocytes
optiquement neutre (invisible). Pour une meilleure standardisation, la température
de la chambre de coloration est régulée à 41°C pour que la réaction se produise
plus rapidement. De plus, le réactif de transparisation est maintenu à température
par un effet appelé Peltier. L’automate effectue sa quantification sur 32'000
érythrocytes correspondant approximativement à 1 million de données.
Une gestion des données permet le traitement multidimensionnel en temps réel des
mesures réalisées sur les 32'000 érythrocytes analysés. La gestion des données
permet également la représentation spatiale des réticulocytes dans un espace
cubique dont les coordonnées sont le volume, la conductivité et la diffraction laser (5
angles).
Les réticulocytes
violet
Les érythrocytes
rouge
Les leucocytes
bleu
Les thrombocytes et autres
vert
Figure 19 : Scattergramme Réti 3D
Figure 20 : Scattergramme Réti 2D
Figure 21 : Scattergramme Réti Surface
Une importante quantité d’ARN cellulaire rend la diffraction plus élevée, ainsi plus le
nuage s’étire vers la droite du graphique plus les réticulocytes sont immatures. Le
DxH800 possède également un panel de 14 paramètres tenant compte du volume
moyen et de la déviation standard des populations réticulocytaires et non
réticulocytaires. Il permet de définir si une cellule fait partie de la population
réticulocytaire ou non.
Mars 2015
19
Travail de Diplôme
3.1.9 Alarmes du DxH800( (3) p.219)
En fonction de toutes les données obtenues lors de l’analyse sanguines, le DxH800
est capable de détecter des anomalies et de les signaler à l’aide de différentes
alarmes.
ALARME
R:
D:
P
H:
L:
SIGNIFICATION
Revoir le résultat
Résultat sous réserve
Apparait éventuellement
accompagné d’un message
système
Delta check
Résultat différent du résultat
antérieur du même patient
Aspiration partielle
Supérieur à la limite de référence
haute
Inférieur à la limite de référence
basse
aH :
Supérieur à la limite d’action haute
aL :
Inférieur à la limite d’action basse
cH :
Supérieur à la limite critique haute
cL :
Inférieur à la limite critique basse
ACTION
Suivre la conduite préconisée pour le
message accompagnant le code R.
Pour les PLT, validation ou vérification
au microscope selon la forme de la
courbe.
Rechercher les résultats antécédents
Vérifier le tube / repasser l’échantillon
Résultat à surveiller,
Validation manuelle des résultats
Résultats à surveiller,
Validation manuelle des résultats
Validation manuelle des résultats,
Répartition et/ou Morphologie
manuelle
manuelle
Communication du résultat à
l’hématologue
manuelle
Communication du résultat à
l’hématologue
manuelle
Ces alarmes, si elles sont présentes, apparaissent sur les feuilles de résultats dans
une colonne prévue à cet effet.
Mars 2015
20
Travail de Diplôme
3.2
Mode opératoire
3.2.1 Comment rechercher un patient sur le DxH800
Afin de rechercher un patient, il faut cliquer sur l’image de la loupe située dans le
menu supérieure du DxH800 à droite.
Figure 22 : Menu supérieur de DxH800
Une fenêtre s’ouvre permettant d’introduire les critères de recherche pour le patient
comme l’identifiant de l’échantillon, son nom, son prénom. Une fois les données
entrées appuyé sur le bouton OK.
Figure 23 : Fenêtre rechercher le patient
Une autre fenêtre s’ouvre demandant de sélectionner l’un des échantillons affiché
puis de cliquer sur le bouton OK.
Figure 24 : Résultat de la recherche d’échantillon
Les données du patient recherchées s’affiche à l’écran.
Mars 2015
21
Travail de Diplôme
3.2.2 Comment imprimer les feuilles de résultats
Réimprimer les feuilles de compte rendu fourni par le DxH800 lors de la routine.
Il faut mettre à l’écran le patient dont on veut réimprimer les résultats de la numération
cellulaire et de la différenciation leucocytaire s’il s’agit d’une formule complète. Il faut
appuyer sur le bouton représentant une imprimante sur la droite en haut de l’écran du
DxH800.
Figure 25 : Bouton imprimer
Imprimer les feuilles des données complémentaires et des scattergrammes
Il faut faire apparaître à l’écran les données du patient que l’on veut imprimer. Puis
appuyer sur le bouton impr. écran du clavier d’ordinateur du DxH800, ainsi on pratique
une capture d’écran et les données s’impriment de la même façon qu’elles
apparaissent à l’écran.
Figure 26 : Bouton
impr. écran
Figure 27 : clavier du DxH800
3.2.3 Comment enregistrer numériquement les hémogrammes et les
scattergrammes
La page reste en mémoire une fois que la capture d’écran a
été effectuée. Cliquez dans menu puis avancé, accessoires
et enfin paint. Un page vierge de paint s’ouvre à l’écran on
colle la capture d’écran et ensuite on peut l’enregistrer dans
une clé UBS préalablement installé pour avoir une version
informatique des résultats.
Figure 28 : Menu déroulant du DxH800
Mars 2015
22
Travail de Diplôme
3.3
Résultats
3.3.1 Pathologie érythrocytaires
3.3.1.1 Anémie Ferriprive ( (4) p.49-53 (2) p.324-326 (5) p.8-15)
Monsieur, F. M. né, le 18.02.1945
L’anémie ferriprive est l’anémie la plus fréquente dans le monde. On estime
qu’elle touche environ 20 à 30 % de la population mondiale. Elle touche les
sujets de tous âges avec une fréquence plus importante chez les femmes
(menstruation et grossesse) et les jeunes enfants (croissance). Le mécanisme de
l’anémie est la carence en fer de l’organisme entraînant une diminution de la
quantité d’hémoglobine produite.
Les origines d’une carence en fer peuvent être multiples :
-
Les hémorragies chroniques (utérines, digestives, les hémolyses
intravasculaires,…)
L’augmentation des besoins (grossesse, croissance, sport intensif)
La malabsorption (Helicobacter pylori, pH gastrique alcalin,
entéropathie)
La malnutrition (alimentation pauvre en vitamine C, absence de viande)
Les carences en fer peuvent survenir rapidement. Pour compenser les pertes
journalières, il faut une quantité importante de nourriture riche en fer.
Il existe trois stades dans la carence en fer :
Stade I
Stade II
Stade III
Ferritine (sérum)
Diminuée
Diminuée
Diminuée
Fer (médullaire)
Diminué
Diminué
Diminué
Transferrine (sérum)
Normale
Elevée
Elevée
Fer (sérum)
Normal
Diminué
Diminué
Hémoglobine
Normale
Normale
Diminuée
MCV
Normal
Normal
Diminué
MCH
Normal
Normal
Diminué
Mars 2015
23
Travail de Diplôme
Diagnostic biologique
Hémogramme
Leucocytes :
Normaux
Erythrocytes :
Diminués
Hb :
diminuée
Ht :
diminuée
MCV :
diminué
MCH :
diminué
MCHC :
diminué
Anisocytose et poïkilocytose
Thrombocytes :
Normaux ou Augmenté (perte de sang chronique)
DONNÉE DE LA NUMÉRATION CELLULAIRE DU DXH800
GR :
HB :
Ht :
VMC :
TCMH :
CCMH :
IDC :
PLT :
3.92 T/L
76 g/L
0.253 L/L
64.5 fL
19.4 pg
301 g/L
20.3
382 G/L
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
(80-100 fL)
(26-34 pg)
(310-360 g/L)
(<15)
(150-350)
Anémie
microcytaire
hypochrome,
érythrocytaire et thrombocytose
Diminués
Diminuée
Diminuée
Diminué
Diminué
Diminué
Augmenté
Augmentés
anisocytose
Figure 29 : Numération cellulaire
Mars 2015
24
Travail de Diplôme
HÉMOGRAMME DE LA LIGNÉE ÉRYTHROCYTAIRE DU DXH800
Figure 30 : Hémogramme anémie ferriprive
Figure 31 : Hémogramme normal
On observe un déplacement de la courbe vers la droite indiquant une
microcytose.
La courbe est également plus large démontrant la présence d’anisocytose.
HÉMOGRAMME DE LA LIGNÉE THROMBOCYTAIRE DU DXH800
Figure 32 : Hémogramme anémie ferriprive
Figure 33 : Hémogramme Normal
On observe une déformation de la fin de la courbe des plaquettes indiquant la
présence d’érythrocytes microcytaires.
Mars 2015
25
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
Figure 34 : Messages d’alarme du DxH800
MORPHOLOGIE MANUELLE1
Erythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Hypochromie
Poïkilocytose
++
+++
+++
++
Annulocytes
Cellules cibles
Stomatocytes
Acanthocytes
Polychromasie
Neutrophiles
Granulations
Hypersegmentés
Thrombocytes
Anisocytose
Macrocytose
1
++
+
+
+/+/-
Fines à moyennes
+
+
+
Annexe 10.1
Mars 2015
26
Travail de Diplôme
SCATTERGRAMME DE LA DIFFÉRENCIATION LEUCOCYTAIRE DU DXH800
Figure 35 : Scattergramme anémie ferriprive 2D
Figure 36 : Scattergramme normal 2D
Figure 37 : Scattergramme anémie ferriprive surface
Figure 38 : Scattergramme normal surface
Figure 39 : Scattergramme anémie ferriprive 3D
Les amas signalés en rouges sur les différents scattergrammes représentent un excès
des érythrocytes non lysés due à l’hypochromie et à la présence d’annulocytes.
Mars 2015
27
Travail de Diplôme
Moelle
Il est rarement nécessaire de faire une moelle pour diagnostiquer une anémie
ferriprive. Il est tout fois possible d’y pratiquer une évaluation des réserves en fer
médullaire. Pour mettre en évidence le fer, on effectue une coloration appelée
bleu de Prusse. Le résultat de la coloration nous oriente sur une forte diminution
des réserves médullaires en fer et une diminution du nombre de sidéroblastes.
Tests complémentaires
Fer :
Diminué
Le dosage du fer n’a pas été effectué pour ce patient, car le taux de fer varie
durant la journée.
Ferritine :
Diminuée
2
Résultat du patient : 12 g/L
(30-400g/L)
Diminuée
Transferrine :
Augmentée
3
Résultat du patient : 3.6 g/L
(2.0-4.0 g/L)
Normal, limite
supérieure
2
3
Annexe 10.1
Annexe 10.1
Mars 2015
28
Travail de Diplôme
3.3.1.2 Β-Thalassémie mineure ( (4)p.67-71 (2)p.331)
Madame T. E. née, le 02.08.1984
Les thalassémies sont caractérisées par une anomalie constitutionnelle de
l’hémoglobine due à un défaut de synthèse d’une ou de plusieurs chaines de
globine. Ce défaut de synthèse entraine une diminution de production d’une ou
de plusieurs chaines de globine. La précipitation des chaines libres en excès
entraine la formation de corps d’inclusion dans les érythrocytes. La durée de vie
des globules rouges est généralement diminuée.
Les thalassémies sont regroupées en deux groupes :
Les α-thalassémie caractérisées par un défaut de synthèse de la chaine de la
globine-. Ce défaut est dû à une délétion chromosomique. Elles se retrouvent
essentiellement dans le sud-est asiatique, ainsi que dans l’Afrique noir.
Les -thalassémie ont subi une mutation au niveau du chromosome 11,
entrainant un défaut de synthèse de la chaine de globine-. Elle se retrouve
essentiellement dans le bassin méditerranéen, particulièrement en Sicile,
Sardaigne, Calabre et Grèce.
Pour ce cas, il s’agit d’une β-thalassémie mineure. Elle présente un tableau
variable, mais plus atténué que les β-thalassémies majeures ou intermédiaires.
Elle est souvent asymptomatique et sa découverte est fortuite.
Hémogramme
Leucocytes :
Normaux
Erythrocytes :
Polyglobulie
Anémie
Microcytaire et hypochrome
Parfois :
anisocytose
Poïkilocytose : cellules cibles
Ponctuation basophile
Absence d’érythroblaste (présent dans les .thalassémies majeures ou
intermédiaires)
Thrombocytes :
Normaux
Mars 2015
29
Travail de Diplôme
DONNÉES DE LA NUMÉRATION CELLULAIRE DU DXH800
GR :
HB :
5.62 T/L
116 g/L
(4.40-5.90 T/L)
(117-157 g/L)
Normaux
Diminuée
VMC :
TCMH :
63.4 fL
20.6 pg
(80-100 fL)
(26-34 pg)
Diminué
Diminué
Anémie microcytaire hypochrome
Figure 42 : Hémogramme -thalassémie mineure
On peut noter un déplacement de la courbe des rouges vers la droite, indiquant
une microcytose érythrocytaire.
Figure 44 : Hémogramme -thalassémie mineure
On observe une déformation de la fin de la courbe des thrombocytes, cela
montre la présence de cellules érythrocytaires microcytaires.
Mars 2015
30
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
Erythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Poïkilocytose
++
++
++
Elliptocytes
Acanthocytes
Dacryocytes
Schizocytes
Ponctuations basophiles
Neutrophiles
Granulations
Hypersegmentés
Thrombocytes
Anisocytose
4
+
+
+
+/-
+/Fines à moyennes
Fines à moyennes
+
+
Annexe 10.2
Mars 2015
31
Travail de Diplôme
Figure 47 : Scattergramme -thalassémie mineure 2D
Figure 49 : Scattergramme -thalassémie mineure surface
Figure 51 : Scattergramme -thalassémie mineure 3D
On peut mettre en évidence quelques amas de couleur rouges révélant la présence de débris
cellulaire comme les schizocytes.
Mars 2015
32
Travail de Diplôme
Moelle
Légère hyperplasie érythroblastique.
Erythropoïèse inefficace avec accumulation de chaine α non appariées dans les
érythroblastes, ce qui peut entrainer une érythropoïèse extramédullaire dans le
foie et la rate.
Fer :
Augmenté
Ferritine :
Augmentée
Transferrine :
Diminuée
Électrophorèse de l’Hémoglobine :
HbF (α2ϒ2) augmenté
(normalement absent)
Mars 2015
33
Travail de Diplôme
3.3.1.3 Malaria (6)
Monsieur L. J.-M. né, le 13.09.1954
Le plasmodium est un parasite sanguin touchant les globules rouges
responsable de la malaria aussi appelée paludisme. Il existe quatre espèces
principales de plasmodium pathogène pour l’homme :




Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
Plasmodium ovale
Plasmodium malariae
régions équatoriales et tropicales
Amérique du sud et Asie
Afrique intertropicales et Pacifique
Afrique
Leurs répartitions géographiques ainsi que leurs différents
morphologiques nous permet de les différencier les uns des autres.
aspects
La transmission de la malaria se fait généralement par voies vectorielles. Le
vecteur est un moustique femelle du genre Anopheles.
Lors d’une malaria, il y a une destruction périodique de nombreux globules
rouges, entraînant des pics fébriles toutes les 48 à 72 heures.
Le diagnostic du paludisme est une urgence médicale. Les symptômes étant peu
spécifique il y a un risque de manquer le diagnostic. S’il n’y a pas de prise en
charge rapide et adaptée, le paludisme peut évoluer vers une forme plus grave
pouvant être mortelle. Toute fièvre chez un patient revenant d’une zone
endémique doit être considérée comme une malaria.
Mars 2015
34
Travail de Diplôme
Cycles du plasmodium
Figure 53 : Cycle du Plasmodium ovale
Phase Hépatique (extra-érythrocytaire)




Les sporozoïtes pénètrent dans la peau, la lymphe ou le sang via la
piqûre d’un moustique infecté.
Les sporozoïtes se dirigent vers le foie
Transformation des sporozoïtes en schizontes pré-érythroblastiques
Les schizontes éclatent après quelques jours de maturation et il y a
libération de mérozoïtes dans le sang.
Phase érythrocytaire



Introduction des mérozoïtes dans les globules rouges, maturation en
trophozoïte et en schizogonie et transformation en schizonte.
Destruction des hématies et libération de 8 à 32 mérozoïtes.
Pénétration dans de nouveaux érythrocytes et nouveau cycles de
réplication.
Mars 2015
35
Travail de Diplôme
Hémogramme
Lymphocytes :
Diminués
Erythrocytes :
Anémie hémolytique (absent en primo-invasion)
Présence de corps d’inclusion : plasmodies
Thrombocytes :
Diminués
GR :
HB :
Ht :
3.95 T/L
119 g/L
0.349 L/L
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
Diminués
Diminuée
Diminuée
PTL :
32 G/L
(150-350 G/L)
Diminuées
Anémie normocytaire normochrome et thrombopénie
Mars 2015
36
Travail de Diplôme
Figure 55 : Hémogramme malaria
La courbe est typique de la présence d’une thrombopénie.
MESSAGES DU DXH800
Figure 58 : Commentaire du DxH800
Erythrocytes
Anisocytose
Poïkilocytose
Thrombocytes
Anisocytose
+
+
+/-
Observation de la lame au microscope :
Malaria :
positive
Figure 59 : Gamétocytes de P.ovale objectif 100x
5
Figure 60 : Gamétocytes de P.ovale objectif 100x
Annexe 10.3
Mars 2015
37
Travail de Diplôme
SCATTERGRAMME DE LA DIFFÉRENCIATION ÉRYTHROBLASTIQUE DU DXH800
Figure 61 : Scattergramme malaria 2D
Figure 63 : Scattergramme malaria surface
Figure 65 : Scattergramme malaria 3D
On observe une accumulation de points verts sur le bas des scattergrammes situant les
plasmodies. Cette image est caractéristique d’une malaria. Toutefois lors d’une
parasitologie à Plasmodium falciparum cette image n’est pas présente.
Mars 2015
38
Travail de Diplôme
Moelle
La ponction de moelle osseuse n’est pas nécessaire pour le diagnostic d’une
malaria.
Au laboratoire ICHV de Martigny6 :
Pour chaque cas de suspicion de Malaria des tests rapides (savonnettes) sont
effectués pour la recherche de la Dengue et la recherche de la Malaria. De plus
une recherche au microscope d’érythrocytes parasités est effectuée (3 fois 15
minutes par 3 personnes différentes)
Résultats :
Test rapide Malaria :
Positif +++
Infection à P. vivax ou P. malariae ou P. ovale
Microscope :
Positif
Parasitémie : 10/1000
Test rapide Dengue :
Négatif
A l’institut tropical de Bâle7 :
Le laboratoire de Bâle est spécialisé dans les maladies tropicales comme la
malaria. Les experts de ce laboratoire sont capable d’identifier l’espèce de
malaria présente uniquement grâce à la morphologie observée au microscope.
Résultat :
Microscope :
6
7
Positif
Plasmodium ovale
Parasitémie : 6/1000
Annexe 10.3
Annexe 10.3 et Annexe 10.4
Mars 2015
39
Travail de Diplôme
3.3.2 Pathologie leucocytaire
3.3.2.1 Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) ( (4) p.285-291 (2) p.391-393)
Monsieur O. P. né, le 30.04.1933
Elle est caractérisée par la prolifération clonale excessive de lymphocytes B avec
envahissement sanguin, médullaire et ganglionnaire.
Cette hémopathie touche le plus souvent les personnes ayant plus de 60 ans.
Elle est plus fréquente chez les hommes que chez les femmes. En Europe, il
s’agit de la leucémie la plus fréquente touchant principalement les adultes
(environ 30% des leucémies).
La leucémie lymphoïde chronique se développe progressivement et souvent de
façon asymptomatique (fatigue et faiblesse). Elle est généralement découverte
lors d’un bilan de santé. La pathologie peut également se présenter avec des
adénopathies (80%) et une splénomégalie (50%). Dans un peu près 10 % des
cas, elle s’accompagne d’une anémie hémolytique auto-immune reflétant des
anomalies immunitaires dues à la prolifération lymphocytaire.
Hémogramme
Leucocytes :
entre 15 et 150 G/L
Lymphocytes :
>5 G/L, pendant au moins 3 mois
Morphologie : Essentiellement semblable aux petits
lymphocytes mûrs :
Chromatine grossière, très dense
Cellule légèrement plus grande
Et des prolymphocytes :
 Cellule plus grande
 Chromatine plus lâche
 Nucléole clairement visible
Il y a aussi présence de cellules altérées que l’on appelle « ombre de
Gumprecht », les lymphocytes plus fragiles ont été brisés lors de l’étalement du
frottis sanguins
Figure 67 : Ombre de Gumprecht objectif 100x
Erythrocytes :
Normaux, diminués dans les formes graves
Thrombocytes :
Normaux, diminués dans les formes graves
Mars 2015
40
Travail de Diplôme
DONNÉE DE LA NUMÉRATION CELLULAIRE DU DXH800
GB :
GR :
HB :
Ht :
79.5 G/L
3.77 T/L
102 g/L
0.325 L/L
(4.0-10.0 G/L)
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
Forte leucocytose
normochrome
avec
une
Augmentés
Diminués
Diminuée
Diminuée
anémie
normocytaire
DONNÉES DE LA DIFFÉRENCIATION LEUCOCYTAIRE DU DXH800
Ly# : 70.3 G/L
MO# : 3.1 G/L
(1.0-4.0 G/L) Augmentés
(<0.8 G/L)
Augmentés
Ba# : 0.4 G/L
(<0.1 G/L)
Forte lymphocytose
basophilie
avec
Augmentés
une
monocytose
et
une
Figure 69 : Différenciation cellulaire
HÉMOGRAMME DE LA LIGNÉE LYMPHOCYTAIRE DU DXH800
Figure 70 : Hémogramme LLC
La lymphocytose est si forte que la courbe représentant les neutrophiles
n’apparaît plus sur l’hémogramme.
Mars 2015
41
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION LEUCOCYTAIRE MANUELLE8
Cellules
Valeurs
relatives
Blastes
2.0%
Neutrophiles non
0.0%
segmentés
Neutrophiles
5.5%
segmentés
Granulations
Lymphocytes
90.0%
Masse de
Gumprecht
Valeurs
absolue
s
1.6 G/L
Intervalles
Observation
0.0 G/L
Augmentés
0.0 G/L
<1.0 G/L
Normaux
4.4 G/L
1.5-7.0 G/L
Normaux
Fines
71.5 G/L 1.0-4.0 G/L
Augmentés
Caractéristiques
++
Monocytes
Quelques lymphocytes encochés
2.5%
2.0 G/L
<0.8 G/L
Augmentés
Eosinophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.5 G/L
Normaux
Basophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.1 G/L
Normaux
Blastose avec une forte lymphocytose avec la présence de ++ de masse de
Gumprecht et monocytose
Érythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Poïkilocytose
+
++
++
Elliptocytes
Dacryocytes
Schizocytes
Ponctuation basophiles
Polychromasie
8
9
+
+/+/+/+/-
Annexe 10.5
Annexe 10.5
Mars 2015
42
Travail de Diplôme
Figure 73 : Scattergramme LLC 2D
Figure 75 : Scattergramme LLC surface
On voit que la représentation des lymphocytes est augmentée indiquant une lymphocytose
avec présence de lymphocytes polymorphes.
Mars 2015
43
Travail de Diplôme
Figure 81 : Scattergramme LLC surface
La région bleue des globules blancs correspondant aux lymphocytes est augmentée.
Mars 2015
44
Travail de Diplôme
Moelle
Elle est normocellulaire ou hypercelluaire avec un envahissement de cellules
lymphoïdes (50-80%). Les autres éléments sont eux diminués. Une biopsie
médullaire permet de définir si l’infiltration est nodulaire, interstitielle, modérée,
mixte ou diffuse. Le pronostic varie en fonction du type d’infiltration médullaire.
On retrouve dans la moelle les mêmes cellules que dans le sang périphérique.
S’il y a une anémie hémolytique auto-immune, la lignée érythroblastique
augmente, car la moelle a une activité compensatrice.
Marqueurs de surface :
Immunophénotypisation :
CD 5+, CD20+, CD23+, CD19+
Cytogénétique :
ces anomalies ont une valeur pronostique :
Délétion 13q14 (55%)
Trisomie 12q13 (16%)
L’association de plusieurs anomalies cytogénétiques penche pour un pronostic
défavorable.
Mars 2015
45
Travail de Diplôme
3.3.2.2 Mononucléose infectieuse ( (4) p.267-275 (2) p.355-358)
Monsieur S. D. né, le 29.10.1998
La mononucléose infectieuse appartient aux syndromes mononucléosiques. Les
syndromes mononucléosiques présentent des hyperlymphocytoses associées à
des lymphocytes stimulés permettant une orientation diagnostic.
L’agent de la mononucléose infectieuse est l’Epstein-Barr Virus. Ce virus fait
partie de la famille Herpes viridae. C’est un virus à ADN encapsidé. Sa
transmission se fait par la salive de ce fait, la mononucléose est aussi appelée la
maladie du baiser.
La mononucléose est très contagieuse et elle touche principalement les jeunes
adultes entre 17 et 25 ans.
Les symptômes peuvent facilement être confondus avec un état de fatigue ou
une angine, ce qui fait que cette infection peut passer inaperçue. Les signes
cliniques principaux sont des atteintes oro-pharyngées (dans deux tiers des cas),
des adénopathies et une splénomégalie modérée (dans deux tiers des cas).
Elle est caractérisée par une lymphocytose avec des lymphocytes stimulés, par
la présence d’anticorps anti-EBV. L’évolution de cette infection est spontanément
favorable.
Hémogramme
Leucocytes :
Augmenté >10 G/L
Lymphocytose avec des lymphocytes stimulés
- Cellule de grande taille
- Cytoplasme abondant et basophile
Figure 85 : Lymphocyte stimulé objectif 100x
Figure 86 : Lymphocyte stimulé objectif 100x
Neutropénie avec de possibles granulations
toxiques et Corps Döhle
Erythrocytes :
Normaux
Thrombocytes :
Normaux ou légèrement diminués
Mars 2015
46
Travail de Diplôme
GB :
12.9 G/L
Leucocytose
DONNÉES DE LA DIFFÉRENCIATION LEUCOCYTAIRE DU DXH800
Ly# :
MO# :
6.8 G/L
1.0 G/L
(<0.8 G/L)
Augmentés
Lymphocytose et monocytose
Figure 88 : Différenciation cellulaire
HÉMOGRAMME DE LA NUMÉRATION DE LA LIGNÉS LYMPHOCYTAIRES DU DXH800
Figure 89 : Hémogramme mononucléose
On note la présence d’un affaissement de la courbe des neutrophiles dû à la
présence d’une lymphocytose.
Mars 2015
47
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION CELLULAIRE MANUELLE10
Cellules
Neutrophiles non
segmentés
Neutrophiles
segmentés
Valeurs
relatives
4.0%
Valeurs
absolues
0.5 G/L
Intervalles
Observation
<1.0 G/L
Normaux
38.0%
4.9 G/L
1.5-7.0 G/L
Normaux
48.0%
Fines à
moy.
6.2 G/L
1.0-4.0 G/L
Granulations
Lymphocytes
Augmentés
Lymphocytes
stimulés
Monocytes
9.0%
Caractéristiques
1.2 G/L
<0.8 G/L
Augmentés
Eosinophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.5 G/L
Normaux
Basophiles
1.0%
0.1 G/L
<0.1 G/L
Normaux
++
Lymphocytose avec ++ de lymphocytes stimulés et une monocytose
10
Annexe 10.6
Mars 2015
48
Travail de Diplôme
Figure 92 : Scattergramme mononucléose 2D
Figure 94 : Scattergramme mononucléose surface
Les lymphocytes étant stimulés, ils sont plus difficiles à différencier des monocytes.
Mars 2015
49
Travail de Diplôme
Figure 100 : Scattergramme mononucléose surface
Les lymphocytes stimulés perturbent la différenciation leucocytaire.
Mars 2015
50
Travail de Diplôme
Moelle
La moelle est normale, car elle n’est pas impliquée dans le processus infectieux
viral. La défense virale s’organise dans les ganglions. Une ponction de moelle
pourrait éventuellement être effectuée afin de différencier un syndrome
mononucléosique d’une leucémie aiguë.
Sérologie :
recherche d’anticorps anti-EBV de type IgM positive.
Recherche d’anticorps chez le patient11 :
EBV IgG (ELFA)
1.48
EBV IgM (ELFA)
positif
Infection récente probable
EBV nucl. Ag IgG (ELFA)
0.00
(<0.10)
(négatif)
(<0.10)
Figure 104 : Graphique d’une infection à Epstein-Barr Virus
Pour la détection du virus EBV nous possédons trois kits pour l’automate MiniVidas :
IgM anti-VCA présents en primo-infection
IgG anti-EBNA présents en phase de guérison
IgG anti-VCA présents lors d’infection ancienne
La présence de lymphocytes stimulés est due aux IgM anti-VCA lors de la primoinfection, ils disparaissent environ dix semaines après l’infection.
11
Annexe 10.6
Mars 2015
51
Travail de Diplôme
3.3.2.3 Leucémie Myéloïde Chronique (LMC) ( (4) p.382-384 (2) p.215-220)
Monsieur R. S. né, le 16.05.1946
La leucémie myéloïde chronique fait partie des néoplasies myéloprolifératives.
Ce terme désigne les hémopathies malignes chroniques avec une atteinte d’une
ou plusieurs lignées médullaires. Les néoplasies myéloprolifératives sont le
résultat d’une anomalie clonale d’une cellule souche hématopoïétique
multipotente. La myélofibrose primaire, la polyglobulie vraie et la thombocytémie
essentielle font également parties des néoplasies myéloprolifératives.
Il est plus approprié de parler de néoplasie myéloproliférative plutôt que de
syndrome myéloprolifératif, car le terme néoplasie suggère que la guérison
nécessite un traitement médical. Le terme syndrome inspire une guérison
possible sans traitement. La myélofibrose primaire, la polyglobulie vraie et la
thrombocytémie essentielle font également partis des principales néoplasies
myéloprolifératives.
Elle est caractérisée par la prolifération clonale et l’infiltration de la moelle, du
sang, de la rate et du foie par des cellules de la lignée granuleuse. Elle
représente 20% des leucémies de l’adulte. La leucémie myéloïde chronique se
diagnostic fréquemment de manière fortuite lors d’un bilan de santé. Elle peut
avoir une évolution lente ou chronique. La leucémie myéloïde chronique peut
aussi se transformer en leucémie aiguë myéloïde ou lymphoïde.
Dans la leucémie myéloïde chronique, lors de l’étude du caryotype, il y a
présence du chromosome Philadelphie. Ce chromosome a subit une
translocation entre le chromosome 9 et le chromosome 22, ce qui signifie qu’il y
a eu un échange de matériel entre ces deux chromosomes. Cette translocation
met en contact le gène BCR du chromosome 22 avec le site oncogène ABL du
chromosome 9. Ce gène BCR-ABL est responsable de la prolifération cellulaire
et de la protection contre l’apoptose. Le chromosome Philadelphie est recherché
par biologie moléculaire. Il est présent dans 95% des LMC, mais son absence ne
permet pas d’exclure une leucémie myéloïde chronique. On met en évidence le
gène de fusion BCR-ABL par la technique de FISH.
Mars 2015
52
Travail de Diplôme
Hémogramme
Leucocytes :
>10 G/L
Déviation à gauche
Myélémie
Neutrophilie
Basophilie
Éosinophilie
Erythrocytes :
Polyglobulie
Anémie modéré
Réticulocytes :
Normaux
Thrombocytes :
Normaux ou Augmenté (fréquent)
GB :
GR :
HB :
Ht :
VMC :
TCMH :
38.6 G/L
6.42 T/L
120 g/L
0.375 L/L
58.4 fL
18.7 pg
(4.0-10.0 G/L)
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
(80-100 fL)
(26-34 pg)
Augmentés
Augmentés
Diminuée
Diminuée
Diminué
Diminué
Forte leucocytose
Le patient, d’origine Sicilienne, présente une -thalassémie mineure,
expliquant la polyglobulie et l’anémie microcytaire hypochrome.
DONNÉES DE LA RÉPARTITION LEUCOCYTAIRE DU DXH800
NE# :
33.0 G/L
MO# :
1.4 G/L
(<0.8 G/L)
Augmentés
Ba# :
0.4 G/L
(<0.1G/L)
Augmentés
Neutrophilie, monocytose et basophilie
Figure 106 : Différenciation leucocytaire
Mars 2015
53
Travail de Diplôme
PRÉSENCE DE CELLULES IMMATURE DE LA LIGNÉE GRANULOCYTAIRE DU DXH800
Si >1.0 = présence de cellules immatures.
Figure 107 : Cellules immatures
HÉMOGRAMME DE LA LIGNÉE LEUCOCYTAIRE DU DXH800
Figure 108 : Hémogramme LMC
La neutrophilie a provoqué une augmentation de la courbe des neutrophiles et
une diminution de la courbe des lymphocytes.
Le déplacement de la courbe vers la droite indique une microcytose.
La présence de globules rouges microcytaire est signalée par la déformation en
fin de courbe.
Mars 2015
54
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION LEUCOCYTAIRE MANUELLE12
Cellules
Myélocytes
Valeurs
relatives
19.0%
Asynchronisme de
maturation
Métamyélocytes
1.0%
Valeurs
absolues
7.3 G/L
Intervalles
Observation
0.0 G/L
Augmentés
0.4 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Neutrophiles
4.0%
non segmentés
Neutrophiles
64.0%
segmentés
Forme pelgeroïde
1.5 G/L
<1.0 G/L
Augmentés
24.7 G/L
1.5-7.0 G/L
Augmentés
Granulations
Lymphocytes
8.0%
Fines.
3.1 G/L
1.0-4.0 G/L
Normaux
Monocytes
1.0%
0.4 G/L
<0.8 G/L
Normaux
Eosinophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.5 G/L
Normaux
Basophiles
3.0%
1.2 G/L
<0.1 G/L
Augmentés
Myélémie avec un asynchronisme de maturation et une déviation à gauche,
une neutrophilie avec la présence de forme pelgeroïde et une basophilie
Érythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Hypochromie
Poïkilocytose
Thrombocytes
Anisocytose
Macrocytes
12
13
+
++
+/++
Dacryocytes
Cellules cibles
++
++
+
+
Annexe 10.7
Annexe 10.7
Mars 2015
55
Travail de Diplôme
Figure 115 : Scattergramme LMC 2D
Figure 117 : Scattergramme LMC surface
On observe un étirement des neutrophiles vers le haut, cela indique qu’il y a présence de
cellules immatures.
Mars 2015
56
Travail de Diplôme
Figure 123 : Scattergramme LMC surface
La présence de cellules neutrophiles immatures est représentée par une déviation des
neutrophiles vers la droite.
Mars 2015
57
Travail de Diplôme
Moelle
Elle est hypercellulaire avec une prédominance de myélocytes. Dans le sang
périphérique, on retrouve la même répartition cellulaire que dans la moelle. On
note souvent une augmentation des micromégacaryocytes médullaires.
Caryotype :
Chez 95% des patients atteint d’une LMC possède
Le chromosome Philadelphie
Dans 90% des cas, il s’agit d’une translocation standard t(9 ; 22).
Chez 5% le chromosome Ph est masqué par une translocation
complexe.
Recherche du chromosome Philadelphie
Positif
Résultat du patient14 :
Mise en évidence du réarrangement BCR-ABL
La translocation (9 ; 22), (chromosome Ph) entraîne la formation du gène
de fusion BCR-ABL sur le chromosome 22. Ce gène BCR-ABL est
présent chez tous les patients ayant une LMC. Le gène de fusion BCRABL peut être mis en évidence par une hybridation in situ fluorescente
(FISH).
Recherche du réarrangement BCR-ABL
Positif
Résultat du patient15 :
14
15
Annexe 10.9
Annexe 10.10
Mars 2015
58
Travail de Diplôme
3.3.2.4 Myélofibrose primaire ( (4) p.225-228 (2) p.384-386 (7)p.131-132)
Monsieur H. M. né, le 29.09.1939
La myélofibrose fait aussi partie des néoplasies myéloprolifératives. Les causes
de la myélofibrose restent encore inconnues.
Elle est caractérisée par une fibrose médullaire secondaire à la libération de
cytokines et de facteurs de croissance produits par la prolifération clonale de
mégacaryocytes.
Elle est également caractérisée par une hématopoïèse extramédullaire
essentiellement dans la rate et le foie, mais également dans d’autres tissus.
Elle touche principalement les personnes ayant entre 50 et 70 ans sans
prédominance par rapport au sexe. La myélofibrose est généralement
découverte de manière fortuite, lors d’un bilan de santé. Il y a souvent présence
de splénomégalie et d’hépatomégalie.
Les analyses de ce patient sont fréquemment réalisées au laboratoire ICHV de
Martigny. En raison de ses nombreuses transfusions sanguines, les
caractéristiques peuvent être nuancées.
Hémogramme
Hémogramme assez évocateur
Leucocytes :
>10 G/L
Déviation à gauche
Myélémie
Basophilie
Éosinophilie
Erythrocytes :
Anémie (75%) :
Anisocytose
Poïkilocytose
Dacryocytes (signe majeur de l’existence d’une
fibrose médullaire)
Erythroblastes
Réticulocytes :
Normaux, augmenté, parfois diminué
Thrombocytes :
Normal (50%), peut être augmenté ou diminué
Anisocytose et éléments de grande taille (marcoplaquettes)
Présence de noyaux de mégacaryocytes
Mars 2015
59
Travail de Diplôme
GB :
5.5 G/L
(4.0-10.0 G/L)
Normaux
GR :
HB :
Ht :
IDC :
PLT :
2.61 T/L
82 g/L
0.233 L/L
16.3
69 G/L
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
(<15)
(150-300 G/L)
Diminués
Diminuée
Diminuée
Augmenté
Diminués
Anémie
normocytaire
thrombopénie
normochrome
avec
une
Ly# :
MO# :
0.6 G/L
0.9 G/L
(1.0-4.0 G/L)
(<0.8 G/L)
Diminués
Augmentés
Lymphopénie et monocytose
PRÉSENCE DE CELLULES IMMATURES DE LA LIGNÉE GRANULOCYTAIRE DU DXH800
Si >1.00 =présence de cellules immatures.
Mars 2015
60
Travail de Diplôme
HÉMOGRAMME DE LA NUMÉRATION DE LA LIGNÉE LEUCOCYTAIRE DU DXH800
Figure 130 : Hémogramme myélofibrose primaire
La présence de nombreuses cellules immatures et de schizocytes perturbent la
courbe des globules blancs.
HÉMOGRAMME DE LA NUMÉRATION DE LA LIGNÉE THROMBOCYTAIRE DU DXH800
Figure 132 : Hémogramme myélofibrose primaire
La déformation de la courbe des plaquettes nous montre la présence de
schizocytes.
Mars 2015
61
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION LEUCOCYTAIRE MANUELLE16 :
Cellules
Valeurs
absolues
0.1 G/L
Intervalles
Observation
Blastes
Valeurs
relatives
1.5%
0.0 G/L
Augmentés
Myélocytes
23.0%
1.1 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Métamyélocytes
5.0%
0.2 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Neutrophiles non
segmentés
Neutrophiles
segmentés
Granulations
Lymphocytes
13.5%
0.6 G/L
<1.0 G/L
Normaux
32.0%
1.5 G/L
1.5-7.0 G/L
Normaux
4.5%
Fines.
0.2 G/L
1.0-4.0 G/L
Diminués
Monocytes
14.0%
0.7 G/L
<0.8 G/L
Normaux
Eosinophiles
2.5%
0.1 G/L
<0.5 G/L
Normaux
Basophiles
4.0%
0.2 G/L
<0.1 G/L
Augmentés
Erythroblastes
14.5%
0%
Augmentés
Blastose avec une myélémie une lymphopénie, une basophilie et la présence
d’érythroblastes
 Attention, si il y a une présence d’érythroblastes >10%, il faut effectuer une
correction du nombre de leucocyte. En effet, les érythroblastes possèdent un
noyau et ils sont donc comptabilisés dans les leucocytes.
Formule de correction :
Nombre de leucocytes en G/L X 100 =
Leucocyte corrigés en G/L
Nombre d’érythroblastes en % + 100
Leucocytes corrigés :
5.5 G/L X 100 = 4.8 G/L
14.5% + 100
16
Annexe 10.11
Mars 2015
62
Travail de Diplôme
MORPHOLOGIE MANUELLE17 :
Érythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Macrocytose
Poïkilocytose
Polychromasie
17
++
+
+
++
Elliptocytes
Dacryocytes
Schizocytes
Mégalocytes
+/+
+
+
+/+/-
Annexe 10.11
Mars 2015
63
Travail de Diplôme
Figure 135 : Scattergramme myélofibrose primaire 2D
Figure 137 : Scattergramme myélofibrose primaire surface
Les scattergrammes nous montrent la présence de cellules immatures et les points rouges
nous signalent la présence de schizocytes.
Mars 2015
64
Travail de Diplôme
Figure 143 : Scattergramme myélofibrose primaire surface
On peut noter la présence de cellules immatures, les points dévient vers la droite.
Mars 2015
65
Travail de Diplôme
Moelle
Une aspiration non productive et très pauvre est observée lors de la ponction
médullaire. On parle alors d’aspiration blanche. Cette aspiration blanche est due
à une fibrose médullaire importante, caractéristique de la myélofibrose primaire
Caryotype :
absence du chromosome de Philadelphie
Absence du réarrangement BCL-ABL
Présence de la mutation JAK-2 (50%)
Calréticuline :
la calréticuline fait partie d’un complexe protéique
du réticulum endoplasmique. C’est un nouveau
marqueur biologique. Lors de myélofibrose primaire
ou de thombocytémie essentielle la calréticuline
subit une mutation de l’exon 9 caractéristique.
Afin de pouvoir diagnostiquer une myélofibrose, il faut la présence de 3 critères
majeurs et de 2 critères mineures.
Critères majeurs
1.
2.
3.
Prolifération de mégacaryocytes atypiques avec une fibrose ou en
l’absence de fibrose, une hyperplasie de la lignée mégacaryocytaire et
granulocytaire.
Absence de critères pour une autre NMP (LMC, PV, TE) ou une autre
néoplasie myéloïde.
Présence de la mutation JAK-2 V617F (50%) ou d’un autre marqueur de
clonalité et exclure une cause secondaire à la myélofibrose.
Critère mineurs
1.
2.
3.
4.
Erythroblastomyélémie
Augmentation des LDH sériques
Anémie
Splénomégalie
Mars 2015
66
Travail de Diplôme
3.3.2.5 Leucémie MyéloMonocytaire Chronique (LMMC) ( (4) p.242 (2)p.390
(7) p.146)
Monsieur B. R. A. né, le 15.12.1937
Selon la classification de l’organisme mondial de la santé, la leucémie
myélomonocytaire appartient aux néoplasies myéloproliférative et aux
syndromes myélodysplasiques (NMP/SMP).
Elle est caractérisée par une monocytose >1G/L persistante pendant au
minimum 3 mois. Les autres causes de monocytose doivent être exclues. Elle
touche principalement les personnes ayant plus de 60 ans (75%). La forme
chronique de cette maladie est moins fréquente que la phase aiguë. C’est la
monocytose qui permet de faire la différence entre une leucémie
myélomonocytaire chronique et une anémie réfractaire avec excès de blastes
(AREB).
On peut classer les leucémies myélomonocytaires en deux groupes :
LMMC-1 :
Sang :
Moelle :
<5% blastes (et promonocytes)
<10% blastes (et promonocytes)
LMMC-2 :
Sang :
5-19% blastes (et promonocytes)
Moelle :
10-19% blastes (et promonocytes)
Ou présence de bâtonnet d’Auer
Hémogramme
Leucocytes :
généralement >10 G/L
Monocytose >1 G/L
Présence variable de promonocytes
Myélémie
Erythrocytes :
Anémie importante fréquente
Thrombocytes :
Thrombopénie modérée
Mars 2015
67
Travail de Diplôme
GB :
GR :
HB :
Ht :
72.1 G/L
2.33 T/L
71 g/L
0.229 L/L
(4.0-10.0 G/L)
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
Augmentés
Diminués
Diminuée
Diminuée
PLT :
63 G/L
(150-300 G/L)
Diminués
Forte leucocytose avec une
normochrome et une thrombopénie
anémie
normocytaire
NE# :
MO# :
Ba# :
61.7 G/L
6.5 G/L
0.4 G/L
(1.5-7.0 G/L)
(<0.8 G/L)
(<0.1 G/L)
Augmentés
Augmentés
Augmentés
Neutrophilie avec une monocytose et une basophilie
PRÉSENCE DE CELLULES IMMATURES DE LA LIGNÉE GRANULOCYTAIRE DU DXH800
Si >1.0 = présence de cellules immatures.
Figure 150 : Hémogramme LMMC
On peut observer une augmentation des monocytes et des neutrophiles.
Mars 2015
68
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION MANUELLE18 :
Cellules
Valeurs
absolues
0.4 G/L
Intervalles
Observation
Blastes
Valeurs
relatives
0.5%
0.0 G/L
Augmentés
Promyélocytes
0.5%
0.4 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Myélocytes
16.5%
11.9 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Dégranulés
Métamyélocytes
Neutrophiles non
segmentés
Dégranulés
Neutrophiles
segmentés
Dégranulés
+
6.0%
4.3 G/L
0.0 G/L
Augmentés
36.0%
25.9 G/L
<1.0 G/L
Augmentés
1.5-7.0 G/L
Augmentés
+
29.5%
21.3 G/L
+
Granulations
Fines.
Plages basophiles
Lymphocytes
+
6.0%
4.3 G/L
1.0-4.0 G/L
Augmentés
Monocytes
5.0%
3.6 G/L
<0.8 G/L
Augmentés
Eosinophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.5 G/L
Normaux
Basophiles
0.0%
0.0 G/L
<0.1 G/L
Normaux
Blastose avec la présence de promyélocytes, myélémie, déviation à gauche,
neutrophilie, lymphocytose et monocytose.
18
Annexe 10.13
Mars 2015
69
Travail de Diplôme
MORPHOLOGIE MANUELLE19 :
Érythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Macrocytose
Poïkilocytose
Polychromasie
Thrombocytes
Anisocytose
Macrocytes
19
++
+/+
+
Elliptocytes
Annulocytes
Schizocytes
Mégalocytes
+/+/-
+
+/+/+/-
++
+
Annexe 10.13
Mars 2015
70
Travail de Diplôme
Figure 153 : Scattergramme LMMC 2D
Figure 155 : Scattergramme LMMC surface
On peut observer un étirement des points représentant les neutrophiles et les monocytes
indiquant la présence de cellules immatures.
Mars 2015
71
Travail de Diplôme
Figure 161 : Scattergramme LMMC surface
La dispersion des points vers la droite indique la présence de cellules jeunes.
Mars 2015
72
Travail de Diplôme
Moelle
Elle est hyperplasique, avec la présence de monocytes et de myélocytes et un
nombre de blastes <20%.
Il y a absence du chromosome Philadelphie.
Le réarrangement BCR-ABL est négatif.
La coloration double estérases est positive.
Cette coloration permet de mettre en évidence les estérases monocytaires et les
estérases myéloïdes. Lors d’une leucémie myélomonocytaire les cellules
présentes à la fois des estérases monocytaires et des estérases myéloïdes.
Mars 2015
73
Travail de Diplôme
3.3.2.6 Anémie Réfractaire avec Excès de Blastes (AREB) ( (4) p.241-242 (2)
p.389-390 (8) p.11-23)
Madame B. M.-J. née, le18.06 1935
L’anémie réfractaire avec excès de blastes est la plus fréquente des syndromes
myélodysplasiques (SMD). Les syndromes myélodysplasiques sont caractérisés
par une hématopoïèse inefficace entraînant des cytopénies chroniques, des
anomalies de maturation et de productions cellulaires, ainsi qu’une durée de vie
des cellules diminuées.
Elle touche généralement les personnes âgées de plus de 70 ans (50%). Elle se
présente le plus souvent sous forme asymptomatique, avec une cytopénie
unique ou multiple due à une hématopoïèse inefficace.
On peut classer les anémies réfractaires avec excès de blastes en deux
groupes :
AREB-1 :
sang :
Moelle :
AREB-2 :
sang :
Moelle :
<5% Blastes
5-9% Blastes
5-19% Blastes
Bâtonnet d’Auer +/10-19% Blastes
Bâtonnet d’Auer +/-
Hémogramme
Les signes de dysplasies touchent généralement les trois lignées cellulaires,
provoquant une pancytopénie.
Leucocytes :
Diminués
Neutropénie
Monocytose >1G/L
≤19% Blastes
<5% Myélémie
Erythrocytes :
Thrombocytes :
Anémie
Diminués
Mars 2015
74
Travail de Diplôme
GR :
HB :
Ht :
2.89 T/L
92 g/L
0.268 L/L
(3.80-5.2 T/L) Diminués
(117-157 g/L)
Diminuée
(0.350-0.470 L/L)
Diminuée
PLT :
31 G/L
(150-350 G/L)
Diminués
Bicytopénie : érythropénie et thrombopénie
Anémie normocytaire normochrome
NE# : 1.5 G/L
(1.5-7 G/L)
Normaux
EO# : 1.0 G/L
Ba# : 0.2 G/L
(<0.5 G/L)
(<0.1 G/L)
Augmentés
Augmentés
Éosinophilie et une basophilie
Figure 167 : Hémogramme AREB
En pourcentage, il y a presque autant d’éosinophiles que de neutrophiles, ce qui
provoque un aplatissement de la courbe des neutrophiles.
Figure 169 : Hémogramme AREB
La déformation de la courbe est due é la présence de schizocytes.
Mars 2015
75
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
RÉPARTITION MANUELLE20 :
Cellules
Valeurs
absolues
0.2 G/L
Intervalles
Observation
Blastes
Valeurs
relatives
4.0%
0.0 G/L
Augmentés
Myélocytes
2.0%
0.1 G/L
0.0 G/L
Augmentés
Neutrophiles non
segmentés
Neutrophiles
segmentés
Dégranulés
2.0%
0.1 G/L
<1.0 G/L
Normaux
26.0%
1.0 G/L
1.5-7.0
G/L
Diminués
Normaux
++
Granulations
Lymphocytes
38.0%
Fines.
1.5 G/L
Monocytes
1.0%
0.0 G/L
1.0-4.0
G/L
<0.8 G/L
Eosinophiles
25.0%
1.0 G/L
<0.5 G/L
Augmentés
<0.1 G/L
Normaux
0%
Augmentés
Hypogranulaires
Basophiles
2.0%
Erythroblastes
2.0%
Normaux
++
0.1 G/L
Blastose, myélémie, neutropénie, éosinophilie
MORPHOLOGIE MANUELLE :21
Érythrocytes
Anisocytose
Microcytose
Macrocytose
Poïkilocytose
++
+
+/+
Elliptocytes
Acanthocytes
Annulocytes
Schizocytes
+/-
+
+
+/+/-
Thrombocytes
Anisocytose
+
Vu reste de noyau de mégacaryocytes
Macrocytes
+
20
21
Annexe 10.15
Annexe 10.15
Mars 2015
76
Travail de Diplôme
Figure 172 : Scattergramme AREB 2D
Figure 174 : Scattergramme AREB surface
On peut observer la présence d’érythroblastes représentés par les points rouges et la
présence d’environ le même pourcentage de neutrophiles que d’éosinophiles.
Mars 2015
77
Travail de Diplôme
Figure 180 : Scattergramme AREB surface
Les érythroblastes sont représentés par les points rouges et on a une augmentation des
point entres les lymphocytes et les neutrophiles indiquant la présence d’une éosinophilie.
Mars 2015
78
Travail de Diplôme
Moelle
Hypercellulaire mais avec une dysérythopoïèse, une dysgranulopoïèse et une
dysmégacaryocytopoïèse, présence de blastes entre 5-19%
Anomalies cytogénétiques :
Anomalies moléculaires :
anomalies du chromosome 5 ou 7
mutations ou anomalies génétiques
Mars 2015
79
Travail de Diplôme
3.3.3 Autres particularités préanalytiques
3.3.3.1 Agrégats de thrombocytes dus à l’EDTA
Monsieur D. J.-M. né, le 08.04.1943
Les prélèvements sanguins sont effectués sur des tubes EDTA dans le but de
conserver la morphologie cellulaire. Mais dans certains cas l’EDTA est
responsable d’une exposition de certains antigènes portés par les plaquettes
reconnus par des antigènes, provoquant la formation d’agrégats.
La numération cellulaire indique une thrombopénie car elle ne compte les
plaquettes contenues dans les agrégats. L’observation du frottis permet de
confirmer la présence d’agrégats plaquettaires.
Grâce aux nouvelles technologies, le DxH800 est capable de modéliser les
agrégats à l’aide de scattergrammes.
Les pseudo-thrombopénies dues à l’EDTA s’observe régulièrement dans les
laboratoires d’hématologie. Lors de la découverte d’agrégats, le personnel
demande un nouveau prélèvement sanguin fait sur un tube contenant un autre
anticoagulant. Au laboratoire de l’ICHV de Martigny, nous demandons un
nouveau prélèvement sur un tube thombexact.
GR :
HB :
Ht :
3.39 T/L
110 g/L
0.314 L/L
(4.40-5.90 T/L)
(133-177 g/L)
(0.400-0.520 L/L)
Diminués
Diminuée
Diminuée
PLT :
131 G/L
(150-350 G/L)
Diminuées
Anémie normocytaire normochrome avec thrombopénie
Mars 2015
80
Travail de Diplôme
Figure 185 : Hémogramme agrégats de PLT
Les amas de thrombocytes sont pris pour des cellules nucléées de petite taille.
Figure 187 : Hémogramme agrégats de PLT
On observe la présence d’une anisocytose plaquettaire.
MESSAGES DU DXH800
Il faut rechercher dans le tube de prélèvement sanguin la présence d’un possible
caillot de sang, indiquant que le sang a coagulé. Si le sang est coagulé, on ne
peut pas rendre les résultats de la formule. Il faut pratiquer une nouvelle prise de
sang.
S’il n’y a pas de caillot, il faut étaler un frottis sanguin et rechercher la présence
de fibrine colorée en bleu indiquant qu’il y a eu coagulation ou la présence
d’amas de thrombocytes.
Image du frottis :
Figure 190 : agrégats de plaquettes objectif 100x
Mars 2015
81
Travail de Diplôme
Figure 191 : Scattergramme agrégats de PLT 2D
Figure 193 : Scattergramme agrégats de PLT surface
Figure 195 : Scattergramme agrégats de PLT 3D
Ce regroupement de points verts un peu plus haut que les lymphocytes, est caractéristique
de la présence d’agrégats de thrombocytes.
Mars 2015
82
Travail de Diplôme
3.3.3.2 Agrégats de neutrophile dus à l’EDTA
Madame S. J. née, le 25.11.1929
Ce phénomène est très rare et nous avons eu la chance de pouvoir observer les
paramètres d’un patient ayant des agrégats de neutrophiles sur prélèvement
EDTA. C’est la raison pour laquelle ce cas est présenté dans mon travail.
Il n’y a pas beaucoup de documentation sur ce phénomène et le processus reste
encore méconnu, mais les images données par le DxH800 et le frottis sanguin
sont caractéristiques.
Lorsqu’il y a présence d’agrégats de neutrophiles sur le frottis du patient, le
laboratoire demande d’effectuer un nouveau prélèvement sanguin avec un autre
anticoagulant comme par exemple un tube trombexact.
NE# : 8.2 G/L
Ly# : 0.9 G/L
(1.5-7.0 G/L)
(1.0-4.0 G/L)
Augmentés
Diminués
Neutrophilie et lymphopénie
Figure 198 : Hémogramme agrégats de Neutro.
On peut observer un étalement de la taille des neutrophiles dû à la présence
d’agrégats de neutrophiles.
Mars 2015
83
Travail de Diplôme
MESSAGES DU DXH800
Image du frottis :
Figure 201 : Agrégats de neutrophiles objectif 50X
Figure 202 : Agrégats de neutrophiles objectif 100X
Mars 2015
84
Travail de Diplôme
Figure 203 : Scattergramme agrégats de Neutro. 2D
Figure 205 : Scattergramme agrégats de Neutro. surface
Figure 206 : Scattergramme agrégats de Neutro. surface
Figure 207 : Scattergramme agrégats de Neutro. 3D
On observe la présence d’un étalement au niveau de la taille de neutrophiles dû à la
présence des agrégats de neutrophiles.
Mars 2015
85
Travail de Diplôme
3.4
Discussion
Les résultats sont analysés dans le chapitre précèdent.
Confrontation des Résultats :
3.4.1 Anémie ferriprive, Monsieur F. M. né, le 18.02.1945
Tests
Résultats théoriques
Résultats pratiques
Leucocytes
Normaux
5.40 G/L
Normaux
Erythrocytes
Diminués
3.92 T/L
Diminués
Hémoglobine
Diminuée
76 g/L
Diminuée
MCV
Diminué
64.5 fL
Diminué
MCH
Diminué
19.4 pg
Diminué
Thrombocytes
Augmentés
382G/L
Augmentés
Ferritine
Diminuée
12 g/L
Diminué
Transferrine
Augmentée
3.6 g/L
Normale
Les résultats concordent avec la théorie. L’anémie microcytaire hypochrome ainsi que la
diminution du taux de ferritine et l’augmentation de la transferrine correspondent à une anémie
ferriprive.
3.4.2 -Thalassémie mineure, Madame T. E. née, le 02.08.1984
Tests
Leucocytes
Normaux
7.90 G/L
Normaux
Erythrocytes
Augmentés
5.62 T/L
Normaux
Hémoglobine
Diminuée
116 g/L
Diminuée
MCV
Diminué
63.4 fL
Diminué
MCH
Diminué
20.6 pg
Diminué
Thrombocytes
Normaux
166 G/L
Augmentés
Les résultats correspondent avec la théorie mis à part les érythrocytes qui devrait être
augmentés et qui se trouvent dans les valeurs normales hautes. L’anémie microcytaire
hypochrome et l’origine de la patiente nous oriente vers une -thalassémie mineure.
3.4.3 Malaria, Monsieur L. J-M. né, le 13.09.1954
Tests
Leucocytes
Diminués
5.6 G/L
Normaux
Erythrocytes
Diminués
3.95 T/L
Diminués
Hémoglobine
Diminuée
119 g/L
Diminuée
Identification microscopique
Plasmodium
Plasmodium ovale
Thrombocytes
Diminués
32 G/L
Diminués
Tous les résultats sont cohérents avec la théorie, mis à part les leucocytes, mais ce paramètre
n’est pas le plus caractéristique. La présence de plasmodium ovale intra-érythrocytaire nous
indique la présence d’une malaria.
Mars 2015
86
Travail de Diplôme
3.4.4 Leucémie Lymphoïde Chronique, Monsieur O. P. né, le 30.04.1933
Tests
Leucocytes
Augmentés
79.5 G/L
Augmentés
Lymphocytes
Augmentés
71.5 G/L
Augmentés
Masses de Gumprecht
Présentes
++
Erythrocytes
Normaux à Diminués
3.77 T/L
Diminués
Thrombocytes
159 G/L
Normaux
Tous les paramètres sont concordants avec la théorie. La forte leucocytose, la forte
lymphocytose et la présence de masse de Gumprecht nous signalent la présence possible
d’une leucémie lymphoïde chronique.
3.4.5 Mononucléose infectieuse, Monsieur S. D. né, le 29.10.1998
Tests
Leucocytes
Augmentés
12.9 G/L
Augmentés
Lymphocytes
Augmentés
6.2 G/L
Augmentés
Lymphocytes stimulés
présents
++
Erythrocytes
Normaux
5.45 T/L
Normaux
Thrombocytes
175 G/L
Normaux
Les résultats obtenus correspondent à la théorie. La présence de lymphocytes stimulés est
caractéristique d’un syndrome mononucléosiques, dont la mononucléose fait partie.
3.4.6 Leucémie Myéloïde Chronique, Monsieur R. S. né, le 16.05.1946
Tests
Leucocytes
Augmentés
38.6 G/L
Augmentés
Myélocytes
Augmentés
7.3 G/L
Augmentés
Métamyélocytes
Augmentés
0.4 G/L
Augmentés
Neutrophiles non segmentés
Augmentés
1.5 G/L
Augmentés
Neutrophiles segmentés
Augmentés
24.7 G/L
Augmentés
Basophiles
Augmentés
1.2 G/L
Augmentés
Eosinophiles
Augmentés
0.0 G/L
Normaux
Erythrocytes
Augmentés
6.42 T/L
Augmentés
Hémoglobine
Diminuée
120 g/L
Diminuée
Thrombocytes
Normaux à Augmentés 240 G/L
Normaux
Tous les résultats s’accordent avec la théorie à l’exception des éosinophiles absents lors de la
répartition. La leucocytose, la myélémie et la présence de neutrophiles non-segmentés peuvent
nous diriger vers une néoplasie myéloproliférative comme la leucémie myéloïde chronique.
Mars 2015
87
Travail de Diplôme
3.4.7 Myélofibrose primaire, Monsieur H. M. né, le 29.09.1939
Tests
Leucocytes
Augmentés
5.5 G/L
Normaux
Myélocytes
Augmentés
1.3 G/L
Augmentés
Métamyélocytes
Augmentés
0.3 G/L
Augmentés
Neutrophiles non segmentés
Augmentés
0.7 G/L
Normaux
Normaux
1.8 G/L
Normaux
Basophiles
Augmentés
0.2 G/L
Augmentés
Eosinophiles
Augmentés
0.1 G/L
Normaux
Erythrocytes
Diminués
2.61 T/L
Diminués
Erythroblastes
Présents
14.5%
Anisocytose
Présente
++
Dacryocytes
Présent
+
Hémoglobine
Diminuée
60 g/L
Diminuée
Thrombocytes
Normaux (50%)
69 G/L
Diminués
Seuls les leucocytes et les éosinophiles ne correspondent pas à la théorie, cela est
certainement dû au fait que ce patient reçoit un support transfusionnel régulier. La myélémie, la
déviation à gauche, la basophilie et la présence de dacryocytes nous mettent sur la voie d’une
myélofibrose primaire.
3.4.8 Leucémie Myélomonocytaire Chronique, Monsieur B. R. A. né, le 15.12.1937
Tests
Leucocytes
Augmentés
72.1 G/L
Augmentés
Myélocytes
Augmentés
11.9 G/L
Augmentés
Monocytes
Augmentés
3.6 G/L
Augmentés
Erythrocytes
Diminués
2.33 T/L
Diminués
Hémoglobine
Diminuée
71 g/L
Diminuée
Thrombocytes
Diminués
63 G/L
Diminués
Les résultats obtenus concordent avec la théorie. La présence d’une forte leucocytose, d’une
myélémie et d’une monocytose nous orientent vers les néoplasies myéloprolifératives et les
syndromes myélodysplasiques comme la leucémie myélomonocytaire chronique.
3.4.9 Anémie Réfractaire avec Excès de Blastes, Madame B. J.-M. née, le
18.06.1935
Tests
Leucocytes
Diminués
4.2 G/L
Normaux
Blastes
Augmentés
0.2 G/L
Augmentés
Myélocytes
Augmentés
0.1 G/L
Augmentés
Diminués
1.0 G/L
Diminués
Monocytes
Augmentés
0.0 G/L
Normaux
Erythrocytes
Diminués
2.89 T/L
Diminués
Hémoglobine
Diminuée
92 g/L
Diminuée
Thrombocytes
Diminués
31 G/L
Diminués
Le taux de leucocytes et de monocytes ne correspond pas à la théorie. L’anémie, la
thrombopénie et la présence de blastes <5 G/L nous dirigent vers les syndromes
myélodysplasiques dont l’anémie réfractaire avec excès de blastes fait partie.
Mars 2015
88
Travail de Diplôme
4 Conclusion
Ce travail permettra au personnel du laboratoire d’acquérir une meilleure connaissance des
principes de mesure du DxH800 et il pourra ainsi associer les hémogrammes et les
scattergrammes plus rapidement aux pathologies. Ce travail est essentiellement basé sur
l’interprétation des hémogrammes et des scattergrammes, mais ce nouvel automate
possède encore de nombreux paramètres pouvant aider au diagnostic.
À l’aide des éléments donnés par cet automate, des paramètres spécifiques à certaines
pathologies sont observés avant même l’examen du frottis sanguin au microscope et
oriente déjà vers un diagnostic.
Ce travail est fondé principalement sur des cas pathologiques retrouvés lors de l’examen
de la routine d’hématologie au laboratoire de l’ICHV de Martigny. Certaines de ces
pathologies sont relativement fréquentes et doivent être signalées à l’hématologue le plus
rapidement possible afin d’assurer une meilleure prise en charge du patient.
Ce dossier peut être complété en y ajoutant des nouveaux cas pathologiques mettant en
valeurs des spécificités sur les hémogrammes et les scattergrammes.
Mars 2015
89
Travail de Diplôme
5 Conclusion personnelle
Ce travail de diplôme m’a permis de mieux concevoir le travail quotidien et les
manipulations effectuées lors de la prise en charge de prélèvements sanguins en
hématologie. J’ai acquis une meilleure connaissance des principes de mesures utilisés par
le DxH800. Mon rôle a été de rechercher et d’expliquer les caractéristiques données par cet
automate dans le but d’aider le personnel du laboratoire à être attentif à ces différents
éléments. La plus grande partie pratique de ce travail fut la sélection et l’importation des
différents paramètres tels que les hémogrammes et les scattergrammes sur ordinateur, à
partir du DxH800. Je suis capable actuellement d’interpréter chaque information fournie par
cet appareil et de répondre à toutes questions.
Durant ce travail, il m’a été difficile de trouver des patients correspondant aux critères
propres de chaque maladie citée dans la littérature. En effet, les résultats ressemblants le
plus à la théorie sont généralement visibles lors du premier diagnostic de la maladie. Les
traitements et le stade de la maladie ont un effet majeur sur les résultats, car ils modifient
les examens sanguins du patient. Malheureusement, j’ai dû supprimer de ma sélection des
patients atteints de pathologies intéressantes mais qui ne présentent plus de résultats
significatifs.
Ce travail de diplôme m’a permis de faire une révision globale des cas pathologiques
d’hématologie étudiée lors de ma formation de technicienne en analyses biomédicales. J’ai
ainsi pu comparer mes connaissances théoriques aux résultats obtenus parmi les cas
sélectionnés.
J’ai réalisé un dossier qui peut être consulté à tout moment lorsque un nouvel employé ou
encore un nouveau stagiaire aura l’occasion d’utiliser l’appareil pour la première fois. C’est
une grande satisfaction pour moi d’avoir réalisé mon travail de diplôme au laboratoire de
l’ICHV de Martigny et qu’il puisse servir à former du nouveau personnel.
Mars 2015
90
Travail de Diplôme
6 Remerciements
Je suis reconnaissante de l’aide de Monsieur Philippe Godon pour sa collaboration dans le
choix du sujet particulièrement intéressant et je suis satisfaite d’avoir eu l’opportunité de
réaliser ce document durant mon stage polyvalent.
Au terme de ce travail de diplôme je tiens à remercier tout particulièrement Madame Emma
Giroud pour m’avoir soutenue, conseillée et aidée dans la correction et la relecture.
Je souhaite également remercier chaleureusement Philippe Godon, Céline Gianinetti et
Keren Palas pour leur soutien et les corrections apportées à ce travail.
Mes remerciements sont aussi adressés à tous les techniciens en analyses biomédicales
du laboratoire de Martigny qui ont spontanément répondu à toute mes interrogations et qui
ont transmis des informations essentielles sur la profession. Les différents documents et les
éléments complémentaires m’ont été fournis par le personnel du laboratoire afin de
terminer convenablement ce travail.
Mars 2015
91
Travail de Diplôme
7 Travaux cités
1. SARRASIN Etienne, VERVIER Nadine, GIANINETTI Céline, SAUDAN Cynthia, GODON
Philippe. programme de formation des stagiaires au laboratoire ICHV. s.l. : laboratoire ICHV,
site de Martigny, janvier 2012.
2. Dubé, Roselyn L'Italien et Hélène Lord. Hématologie 2e édition. s.l. : CCDMD les éditions
le griffon d'argile, 1998.
3. Beckman Coulter France - centre de formation agree. Manuel de formation UniCel®
DxH800. Octobre 2012.
4. Sébahoun, Gérard. Hématologie clinique et biologique 2e édition. s.l. : Arnette Groupe
Liaison SA, 2005.
5. Spertini, O. service d'hématologie CHUV. Anémies microcytaires: troubles du métabolisme
du fer et anémie inflammatoire. 2013.
6. P. Jaunin, enseignant ESSanté. plasmodium, cours de parasitologie 2014 .
7. Pierre-Michel Schmidt, Pierre Cornu, Anne Angelilo-Scherrer. Bases
physiopathologiques en hématologie général. s.l. : service d'hématologie, CHUV-Lausanne,
Univeritäklinik für Hämatologie, Inselspital-Bern, 2014, Version 16.0.
8. Pr. Olivier Spertini, hématologie CHUV. Néoplasies myéloprofilrératives et syndromes
myélodysplasiques: II Leucémie myéloïde chronique, syndromes myélodysplasiques, leucémie
myélomonocytaire. 2014.
Mars 2015
92
Travail de Diplôme
8 Iconographie
FIGURE 1 : DXH800........................................................................................................................................ 1
FIGURE 2 : PRINCIPE COULTER ....................................................................................................................... 9
FIGURE 3 : CYTOMÉTRIE DE FLUX .................................................................................................................. 10
FIGURE 4 : DIFFRACTION ............................................................................................................................... 11
FIGURE 5 : FAISCEAU AXIAL ........................................................................................................................... 11
FIGURE 6 : GRANULARITÉ .............................................................................................................................. 11
FIGURE 7 : HÉMOGRAMME DES GLOBULES ROUGES ........................................................................................ 12
FIGURE 8 : HÉMOGRAMME DES PLAQUETTES .................................................................................................. 13
FIGURE 9 : HÉMOGRAMME DES GLOBULES BLANCS ......................................................................................... 14
FIGURE 10 : SCATTERGRAMME DIFF 3D .................................................................................................... 16
FIGURE 11 : SCATTERGRAMME DIFF 2D ....................................................................................................... 16
FIGURE 12 : SCATTERGRAMME DIFF SURFACE ............................................................................................... 16
FIGURE 13 : SCATTERGRAMME DIFF 3D......................................................................................................... 16
FIGURE 14 : SCATTERGRAMME ERB 3D
........................................................... 17
FIGURE 15 : SCATTERGRAMME ERB 2D
........................................................... 17
FIGURE 16 : SCATTERGRAMME ERB SURFACE
........................................................... 17
FIGURE 17 : AGRÉGATS PLAQUETTAIRE SCATTERGRAMME ERB 2D ................................................................. 18
FIGURE 18 : PLAQUETTES GÉANTES SCATTERGRAMME ERB 2D ....................................................................... 18
FIGURE 19 : SCATTERGRAMME RÉTI 3D ...................................................................................................... 19
FIGURE 20 : SCATTERGRAMME RÉTI 2D ..................................................................................................... 19
FIGURE 21 : SCATTERGRAMME RÉTI SURFACE ............................................................................................... 19
FIGURE 22 : MENU SUPÉRIEUR DE DXH800 ................................................................................................... 21
FIGURE 23 : FENÊTRE RECHERCHER LE PATIENT ............................................................................................ 21
FIGURE 24 : RÉSULTAT DE LA RECHERCHE D’ÉCHANTILLON ............................................................................. 21
FIGURE 25 : BOUTON IMPRIMER..................................................................................................................... 22
FIGURE 26 : BOUTON IMPR. ÉCRAN ................................................................................................................ 22
FIGURE 27 : CLAVIER DU DXH800 ................................................................................................................. 22
FIGURE 28 : MENU DÉROULANT DU DXH800 .................................................................................................. 22
FIGURE 29 : NUMÉRATION CELLULAIRE .......................................................................................................... 24
FIGURE 30 : HÉMOGRAMME ANÉMIE FERRIPRIVE .................................................................................... 25
FIGURE 31 : HÉMOGRAMME NORMAL
.................................................................................................... 25
FIGURE 32 : HÉMOGRAMME ANÉMIE FERRIPRIVE .................................................................................... 25
.................................................................................................... 25
FIGURE 34 : MESSAGES D’ALARME DU DXH800 ............................................................................................. 26
FIGURE 35 : SCATTERGRAMME ANÉMIE FERRIPRIVE 2D ........................................................................... 27
............................................................................................. 27
FIGURE 36 : SCATTERGRAMME NORMAL 2D
FIGURE 37 : SCATTERGRAMME ANÉMIE FERRIPRIVE SURFACE .................................................................. 27
FIGURE 38 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE ...................................................................................... 27
FIGURE 39 : SCATTERGRAMME ANÉMIE FERRIPRIVE 3D .......................................................................... 27
............................................................................................ 27
FIGURE 42 : HÉMOGRAMME -THALASSÉMIE MINEURE ............................................................................ 30
............................................................................................ 30
FIGURE 44 : HÉMOGRAMME -THALASSÉMIE MINEURE ............................................................................ 30
............................................................................................ 30
FIGURE 47 : SCATTERGRAMME -THALASSÉMIE MINEURE 2D .................................................................. 32
..................................................................................... 32
Mars 2015
93
Travail de Diplôme
FIGURE 49 : SCATTERGRAMME -THALASSÉMIE MINEURE SURFACE .......................................................... 32
FIGURE 50 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE
.............................................................................. 32
FIGURE 51 : SCATTERGRAMME -THALASSÉMIE MINEURE 3D ................................................................... 32
..................................................................................... 32
FIGURE 53 : CYCLE DU PLASMODIUM ............................................................................................................. 35
FIGURE 55 : HÉMOGRAMME MALARIA ................................................................................................... 37
FIGURE 56 : HÉMOGRAMME NORMAL ............................................................................................................. 37
FIGURE 58 : COMMENTAIRE DU DXH800........................................................................................................ 37
FIGURE 59 : GAMÉTOCYTES DE P.OVALE OBJECTIF 100X ................................................................................ 37
FIGURE 60 : GAMÉTOCYTES DE P.OVALE OBJECTIF 100X ................................................................................ 37
FIGURE 61 : SCATTERGRAMME MALARIA 2D .......................................................................................... 38
FIGURE 62 : SCATTERGRAMME NORMAL 2D ................................................................................................... 38
FIGURE 63 : SCATTERGRAMME MALARIA SURFACE ................................................................................. 38
FIGURE 64 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE .......................................................................................... 38
FIGURE 65 : SCATTERGRAMME MALARIA 3D .......................................................................................... 38
FIGURE 67 : OMBRE DE GUMPRECHT OBJECTIF 100X ..................................................................................... 40
FIGURE 69 : DIFFÉRENCIATION CELLULAIRE ................................................................................................... 41
FIGURE 70 : HÉMOGRAMME LLC ........................................................................................................ 41
FIGURE 71 : HÉMOGRAMME NORMAL ............................................................................................................. 41
FIGURE 73 : SCATTERGRAMME LLC 2D .............................................................................................. 43
FIGURE 75 : SCATTERGRAMME LLC SURFACE ....................................................................................... 43
FIGURE 77 : SCATTERGRAMME LLC 3D ............................................................................................... 43
FIGURE 81 : SCATTERGRAMME LLC SURFACE ....................................................................................... 44
FIGURE 85 : LYMPHOCYTE STIMULÉ OBJECTIF 100X ........................................................................................ 46
FIGURE 86 : LYMPHOCYTE STIMULÉ OBJECTIF 100X ....................................................................................... 46
FIGURE 88 : DIFFÉRENCIATION CELLULAIRE ................................................................................................... 47
FIGURE 89 : HÉMOGRAMME MONONUCLÉOSE ........................................................................................ 47
....................................................................................................... 47
FIGURE 92 : SCATTERGRAMME MONONUCLÉOSE 2D ............................................................................... 49
FIGURE 93 : SCATTERGRAMME NORMAL 2D ................................................................................................ 49
FIGURE 94 : SCATTERGRAMME MONONUCLÉOSE SURFACE ...................................................................... 49
FIGURE 95 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE ........................................................................................ 49
FIGURE 100 : SCATTERGRAMME MONONUCLÉOSE SURFACE .................................................................... 50
FIGURE 101 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE ....................................................................................... 50
Mars 2015
94
Travail de Diplôme
FIGURE 102 : SCATTERGRAMME MONONUCLÉOSE 3D ............................................................................. 50
FIGURE 103 : SCATTERGRAMME NORMAL 3D .............................................................................................. 50
FIGURE 104 : GRAPHIQUE D’UNE INFECTION À EPSTEIN-BARR VIRUS .............................................................. 51
FIGURE 105 : NUMÉRATION CELLULAIRE ........................................................................................................ 53
FIGURE 106 : DIFFÉRENCIATION LEUCOCYTAIRE ............................................................................................. 53
FIGURE 107 : CELLULES IMMATURES ............................................................................................................. 54
FIGURE 108 : HÉMOGRAMME LMC ...................................................................................................... 54
FIGURE 109 : HÉMOGRAMME NORMAL ........................................................................................................... 54
FIGURE 114 : MESSAGES D’ALARME DU DXH800 ........................................................................................... 55
FIGURE 115 : SCATTERGRAMME LMC 2D ............................................................................................ 55
FIGURE 116 : SCATTERGRAMME NORMAL 2D ................................................................................................. 56
FIGURE 117 : SCATTERGRAMME LMC SURFACE .................................................................................... 54
FIGURE 123 : SCATTERGRAMME LMC SURFACE .................................................................................... 57
FIGURE 130 : HÉMOGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE .......................................................................... 61
........................................................................................... 61
FIGURE 132 : HÉMOGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE........................................................................... 61
........................................................................................... 61
FIGURE 135 : SCATTERGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE 2D ................................................................. 64
.................................................................................... 64
FIGURE 137 : SCATTERGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE SURFACE ......................................................... 64
............................................................................. 64
FIGURE 139 : SCATTERGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE 3D ................................................................ 64
.................................................................................... 64
.................................................................................... 65
FIGURE 143 : SCATTERGRAMME MYÉLOFIBROSE PRIMAIRE SURFACE ......................................................... 65
............................................................................. 65
.................................................................................... 65
FIGURE 150 : HÉMOGRAMME LMMC ................................................................................................... 68
FIGURE 153 : SCATTERGRAMME LMMC 2D .......................................................................................... 71
FIGURE 155 : SCATTERGRAMME LMMC SURFACE .................................................................................. 71
Mars 2015
95
Travail de Diplôme
FIGURE 161 : SCATTERGRAMME LMMC SURFACE .................................................................................. 72
FIGURE 167 : HÉMOGRAMME AREB .................................................................................................... 75
FIGURE 168 : HÉMOGRAMME NORMAL............................................................................................................ 75
FIGURE 169 : HÉMOGRAMME AREB .................................................................................................... 75
FIGURE 170 : HÉMOGRAMME NORMAL............................................................................................................ 75
FIGURE 171 : MESSAGES D’ALARME DU DXH800............................................................................................ 76
FIGURE 172 : SCATTERGRAMME AREB 2D ........................................................................................... 77
FIGURE 174 : SCATTERGRAMME AREB SURFACE .................................................................................. 77
FIGURE 180 : SCATTERGRAMME AREB SURFACE .................................................................................. 78
FIGURE 185 : HÉMOGRAMME AGRÉGATS DE PLT ................................................................................... 80
.................................................................................................... 81
FIGURE 187 : HÉMOGRAMME AGRÉGATS DE PLT ................................................................................... 81
.................................................................................................... 81
FIGURE 190 : AGRÉGATS DE PLAQUETTES OBJECTIF 100X............................................................................... 81
FIGURE 191 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE PLT 2D .......................................................................... 82
............................................................................................ 82
FIGURE 193 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE PLT SURFACE .................................................................. 82
FIGURE 194 : SCATTERGRAMME NORMAL SURFACE ...................................................................................... 82
FIGURE 195 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE PLT 3D .......................................................................... 82
............................................................................................ 82
FIGURE 198 : HÉMOGRAMME AGRÉGATS DE NEUTRO. ............................................................................. 83
............................................................................................. 83
FIGURE 201 : AGRÉGATS DE NEUTROPHILES OBJECTIF 50X ............................................................................ 84
FIGURE 202 : AGRÉGATS DE NEUTROPHILES OBJECTIF 100X .......................................................................... 84
FIGURE 203 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE NEUTRO. 2D.................................................................... 85
...................................................................................... 85
FIGURE 205 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE NEUTRO. SURFACE .................................................................. 85
FIGURE 206 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE NEUTRO. SURFACE ................................................................. 85
FIGURE 207 : SCATTERGRAMME AGRÉGATS DE NEUTRO. 3D ................................................................... 85
...................................................................................... 85
Mars 2015
96
Travail de Diplôme
9 Référence de l’iconographie
FIGURE 1 : DXH800 : Beckman Coulter (2000-2015), Unicel DxH Coulter Cellular Analysis
Système, consultée le 03.03.2015 sur Beckman Coulter :
https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/wsr/diagnostics/clinical-products/hematology/unicel-dxh-800-coultercellular-analysissystem/index.htm#2/10//0/25/1/0/asc/2/628134///0/1//0/%2Fwsrportal%2Fwsr%2Fdiagnostics%2Fclinicalproducts%2Fhematology%2Funicel-dxh-800-coulter-cellular-analysis-system%2Findex.htm/
FIGURE 53 : CYCLE DU PLASMODIUM : Centers of diseases control and prevention (2013),
identification of parasitic diseases of public heath concern, Plasmodium ovale, consultée le
03.03.2015 sur Centers of diseases control and prevention :
http://www.cdc.gov/dpdx/malaria/index.html
FIGURE 104 : GRAPHIQUE D’UNE INFECTION À EPSTEIN-BARR VIRUS : MemoBio, EBV,
diagnostic biologique, consultée le 04.03.2015 sur MemoBio :
http://www.memobio.fr/html/viro/vi_ebv_di.html
FIGURE 2-6 ET FIGURE 18 : Images fournies par Beckman Coulter
FIGURE 26-27, FIGURE 59-60, FIGURE 67, FIGURE 85-86, FIGURE 109 ET FIGURE 201-202 :
Images personnelles
FIGURE 7-17, FIGURE 19-25, FIGURE 28-52, FIGURE 54-58, FIGURE 61-66, FIGURE 68-84,
FIGURE 105-189, FIGURE 191-200, FIGURE 203-208 : Images exportées du DxH800
Mars 2015
97
Travail de Diplôme
10 Lexique
LEXIQUE
Anémie :
Diminution du taux d’hémoglobine.
Anisocytose :
Différence de taille entre les cellules.
Basophilie :
Augmentation du nombre de basophiles.
Blastose :
Présence de blastes lors de la répartition leucocytaire.
Coloration supravitale :
Permet de mettre en évidence l’ARN contenu dans les
réticulocytes, afin de les différencier plus facilement des
érythrocytes. Cette coloration est à base de bleu de Crésyl ou de
méthylène.
Déviation à gauche :
Augmentation du nombre de neutrophiles non segmentés.
Eosinophilie :
Augmentation du nombre d’éosinophiles.
Erythroblastes :
Stade cellulaire précédent le stade réticulocytes dans
l’érythropoïèse.
Hémogramme :
C’est l’étude quantitative et qualitative du sang périphérique. Il est
peut être présenté sous forme de liste ou d’un graphique.
Hémopathie :
Désigne une maladie du sang pouvant toucher les érythrocytes,
les leucocytes et les thrombocytes.
Hypochromie :
Diminution de l’hémoglobine contenue dans un érythrocyte.
Lyser :
Fragmentation et désintégration de cellules exercées par un agent
physique, chimique ou biologique.
Mégacaryocyte :
C’est une cellule de grande taille présente dans la moelle et
responsable de la production des plaquettes.
Monocytose :
Augmentation du nombre de monocytes.
Myélémie :
Présence de myélocytes et des métamyélocytes.
Neutropénie :
Diminution du nombre de neutrophiles.
Neutrophilie :
Augmentation du nombre de neutrophiles.
Pathologie :
Science ayant pour objet l’étude des maladies.
Poïkilocytose :
Présence dans le sang de globules rouges de formes différentes.
Polychromasie :
Présence dans le sang d’érythrocytes jeunes ayant une coloration
bleutée.
Réticulocytes :
Stade cellulaire précédent le stade érythrocyte dans
l’érythropoïèse.
Scattergramme :
C’est la représentation graphique par un nuage de points
permettant l’illustration de la différenciation cellulaire, de la
quantification érythroblastique et de la quantification
réticulocytaire.
Mars 2015
98
Travail de Diplôme
ABREVIATIONS
ADN :
Acide DésoxyriboNucléosique
AREB :
Anémie Réfractaire avec Excès de Blastes
ARN :
Acide RiboNucléosique
Diff :
Différentiation
EBV :
Epstein-Barr Virus
EDTA :
Ethylène Diamine Tétra-Acétique
Erb :
Erythroblaste
FISH :
Fluorescent In Situ Hybridization
GB :
Globules Blancs = Leucocytes
GR :
Globules Rouges = Erythrocytes = Hématies
ICHV :
Institut Central des Hôpitaux Valaisans
LLC :
Leucémie Lymphoïde Chronique
LMC :
Leucémie Myéloïde Chronique
LMMC :
Leucémie MyéloMonocytaire Chronique
MP :
Myélofibrose Primaire
NMP :
Néoplasie MyéloProliférative
Ph :
Philadelphie (chromosome)
PLT :
Plaquettes = Thrombocytes
PV :
Polycytemia Vera
SMD :
Syndrome MyéloDysplasique
TAB :
Technicien en Analyses Biomédicales
TE :
Thrombocytémie Essentielle
VCS :
Volume, Conductivité, Scattergramme
Mars 2015
99
Travail de Diplôme
11 Annexes
11.1 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient F.M né, le
18.02.1945
Mars 2015
100
Travail de Diplôme
Mars 2015
101
Travail de Diplôme
11.2 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour la patiente T.E. née, le
02.08.1984
Mars 2015
102
Travail de Diplôme
11.3 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient L.J.-M. né, le
13.09.1954
Mars 2015
103
Travail de Diplôme
Mars 2015
104
Travail de Diplôme
11.4 Rapport définitif du laboratoire de Bâle pour le patient L.J.-M. né, le
13.09.1954
Mars 2015
105
Travail de Diplôme
11.5 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient O.P. né, le
30.04.1933
Mars 2015
106
Travail de Diplôme
11.6 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient S.D. né, le
29.01.1998
Mars 2015
107
Travail de Diplôme
Mars 2015
108
Travail de Diplôme
11.7 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient R.S. né, le
16.05.1946
Mars 2015
109
Travail de Diplôme
11.8 Rapport définitif du Dr Lovey pour le patient R.S. né, le 16.05.1946
Mars 2015
110
Travail de Diplôme
Mars 2015
111
Travail de Diplôme
11.9 Rapport définitif du laboratoire de cytogénétique du CHUV pour le patient
R.S. né, le 16.05.1946
Mars 2015
112
Travail de Diplôme
11.10 Rapport définitif du laboratoire de biologie moléculaire du CHUV pour le
patient R.S. né, le 16.05.1946
Mars 2015
113
Travail de Diplôme
11.11 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient H.M. né, le
29.09.1939
Mars 2015
114
Travail de Diplôme
Mars 2015
115
Travail de Diplôme
11.12 Rapport définitif du Dr Lovey pour le patient H.M. né, le 29.09.1939
Mars 2015
116
Travail de Diplôme
Mars 2015
117
Travail de Diplôme
11.13 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient B.R.A. né, le
15.12.1937
Mars 2015
118
Travail de Diplôme
Mars 2015
119
Travail de Diplôme
11.14 Rapport définitif du Dr Lovey pour le patient B.R.A né, le 16.05.1946
Mars 2015
120
Travail de Diplôme
Mars 2015
121
Travail de Diplôme
11.15 Rapport définitif du laboratoire ICHV Martigny pour le patient B.J.-M. née, le
18.06.1935
Mars 2015
122
Travail de Diplôme
Mars 2015
123
Travail de Diplôme
11.16 Rapport définitif du Dr Lovey pour le patient B.J.-M. née, le 18.06.1935
Mars 2015
124
Travail de Diplôme
Mars 2015
125
Travail de Diplôme
11.17 Dossier DxH800 du patient G. J.-P. né, le 20.01.1929
Les analyses de ce patient sont arrivées une fois la rédaction du travail de diplôme
terminée, mais comme il y a une suspicion de Leucémie Myéloïde Aiguë et que cette
pathologie n’a pas été abordée dans ce dossier je me permets de mettre les résultats
bruts en annexe afin de compléter mon travail.
Compte rendu du laboratoire 1
Compte rendu du laboratoire 2
Mars 2015
126
Travail de Diplôme
Scattergramme de la différenciation leucocytaire en 2D
Scattergramme de la différenciation leucocytaire en 3D
Mars 2015
127
Travail de Diplôme
Scattergramme de la différenciation leucocytaire en surface
Scattergramme de la quantification des érythroblastes en 2D
Mars 2015
128
Travail de Diplôme
Scattergramme de la quantification des érythroblastes en 3D
Scattergramme de la quantification des érythroblastes en surface
Mars 2015
129

Formation continue en Hématologie pour le DXH800 de

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