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BK KINYOUN KIT
Para diagnóstico “in vitro”
PRINCIPIO
La tinción de Kinyoun es una variante de la tinción clásica de Ziehl-Neelsen que utiliza como colorante primario Fucsina básica con fenol a concentraciones altas, lo que permite la
coloración en frío, mientras que la tinción clásica de Ziehl-Neelsen precisa la utilización de calor en la etapa de la coloración primaria. El resto de las etapas del procedimiento son las
mismas que en la metódica original de Ziehl. Como colorante de contraste se utiliza Verde brillante, aunque también puede utilizarse Azul de Metileno.
La tinción de Ziehl–Neelsen se utiliza para la diferenciación de los microorganismos ácido-alcohol resistentes. Estos microorganismos poseen una pared celular lipídica especial, que
contiene entre otros ácido micólico, que les permite resistir la decoloración con ácido-alcohol después de la tinción con colorantes básicos como la fucsina y aparecen de color rosarojizo, mientras que el resto de los microorganismos se tiñe con el colorante de contraste. Se supone que la permeabilidad a través de las membranas intactas puede ser un componente
importante del mecanismo involucrado en el fenómeno de resistencia a la decoloración por alcohol ácido indicado.
Aunque el mecanismo de la diferenciación no está plenamente establecido, la metódica está totalmente aceptada como procedimiento diagnóstico de sospecha precoz así como para
proporcionar información sobre el número de bacilos presentes en la muestra.
Los microorganismos ácido-alcohol resistentes son básicamente las Mycobacterias, aunque existen otros microorganismos que también presentan esta característica como son el género
Nocardia y algunos parásitos como Cryptosporidium.
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
Los colorantes para tinción de Kinyoun se utilizan para realizar tinciones de cultivos o
muestras que se sospecha que contienen micobacterias, para el diagnóstico precoz de
infección micobacteriana y su caracterización.
MUESTRA
Extensiones procedentes de cultivos bacterianos. Muestras procedentes de diversos fluidos
corporales: esputos, fluidos pulmonares, sedimentos de orina, líquido cefalorraquídeo,
tejido, etc.
REACTIVOS
Kit 3 x 250 mL.
Contiene:
A. 1 x 250 mL. Reactivo Nº 1
B. 1 x 250 mL. Reactivo Nº 2
C. 1 x 250 mL. Reactivo Nº 3
Ref. 99 25 05
Extender la muestra con un asa en un portaobjetos para conseguir un frotis uniforme y
delgado. Secar al aire y fijar con calor pasando el portaobjetos por una pequeña llama entre
2 y 3 veces. Dejar enfriar antes de realizar la tinción.
Ref. 99 25 55
Ref. 99 20 84
Ref. 99 56 68
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente infecciosa.
Fucsina Fenicada Kinyoun
Decolorante BK
Verde Brillante
PROCEDIMIENTO
Fucsina Fenicada Kinyoun
Composición
Fucsina básica
Fenol
Isopropanol
1,5%
5%
20%
Verde Brillante
Composición
Verde Brillante
0,2%
1. Cubrir con Fucsina Fenicada Kinyoun. Dejar unos 5 minutos. NO CALENTAR
2. Lavar suavemente con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
3. Cubrir con el Decolorante BK, balancear suavemente y a continuación lavar con
agua. Si sigue apareciendo coloración rojiza en la muestra repetir la decoloración.
4. Lavar suavemente con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
5. Cubrir la preparación con Verde Brillante o Azul de Metileno durante 1 minutos.
6. Lavar con agua corriente y secar al aire.
7. Examinar al microscopio con objetivo de inmersión.
Disponible asimismo:
Decolorante BK
Composición
Etanol
HCl
Azul Metileno Kühne
Composición
Azul de metileno
Fenol
Etanol
1 x 1000 mL
6 x 250 mL
Ref. 99 71 15
Ref. 99 20 90
RESULTADOS
Bacilos ácido-alcohol resistentes: rojo oscuro a rosa
Bacilos no ácido-alcohol resistentes: verde pálido o azul, según el colorante utilizado
97%
3%
1 x 500 mL
1 x 1000 mL
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda seguir las prácticas de control de calidad marcadas por el CLSI (antes
NCCLS). Realizar los controles con microorganismos ATCC para este fin o cultivos de
microorganismos ácido-alcohol resistentes y no resistentes conocidos.
Ref. 99 37 40
Ref. 99 89 77
0,5%
1%
30%
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los reactivos almacenados a 15-30ºC y protegidos de la luz, son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta. Los envases deben mantenerse siempre bien
cerrados.
Con el tiempo, puede aparecer un ligero precipitado en algún reactivo, que no afecta a la
funcionalidad del producto.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
Material de uso general de laboratorio.
Portaobjetos y cubreobjetos, mechero Bunsen, asa de siembra, soporte de tinción,
microscopio con lente de inmersión.
PRECAUCIONES
Los productos son para uso profesional. Todos los reactivos deben manipularse con
precaución por personal técnico formado. Se aconseja consultar antes de su uso la ficha
de datos de seguridad.
La Fucsina Fenicada Tensoactiva así como el Azul Metileno Kühne pueden resultar nocivos
por ingestión y en contacto con la piel. La Fucsina fenicada Tensoactiva es corrosiva. El
Decolorante BK y el Azul de Metileno Kühne son inflamables.
NOTAS
El resultado de la tinción es orientativo. Una tinción positiva ofrece evidencia presuntiva de
la presencia de micobacterias en la muestra y debe confirmarse con pruevas adicionales
(cultivo, pruebas moleculares,etc.). Una tinción negativa no indica necesariamente que la
muestra sea negativa en cultivo para micobacterias.
La técnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con las preferencias del
técnico para lograr variaciones en la intensidad de coloración, lo cual implica modificaciones
en los tiempos de tinción, decoloración, lavado,etc. Si se usa agua corriente para el
lavado, tener presente que aguas intensamente cloradas pueden debilitar la coloración
de contraste. Un lavado excesivo después de la Fucsina puede producir falsos negativos.
Un exceso de lavado después de utilizar el colorante de contraste puede disminuir la
coloración de los microorganismos no ácido-alcohol resistentes.
BIBLIOGRAFÍA
Gurr,E. (1965). “The rational use of dyes in Biology”. Leonard Hill, London.
Clark, G. (1981) “Staining Procedures”, pp.380-382,4th ed. Williams & Willkins
CLSI Guidelines and Standards, CLSI, Wayne, P.A
Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC Press (2000).
Somoskövi, A., Hotaling, J.E., Fitzgerald, M., O’Donnell, D., Parsons, L.M., Salfinger, M.
(2001), Chest, 120, 250-257.
Good, R.C., Silcox, V, Kilborn, C., ch.40, 679-686 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic
procedures for bacterial, mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed. Washington D.C.
Ederer, G.M., Lund, M.E., ch.46, 806-811 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic procedures
for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed. Washington D.C.
Lennette, Spaulding & Truant. Manual of Clinical Microbiology. 3rd ed., 1974, ASM.
La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
Distribuidor: http://www.cromakit.es
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
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Revisión: Octubre 2016
PRO4_REG9_BKKIN_4

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