POISSY Julien - Ecole Doctorale BIOLOGIE SANTE

Transcription

Les Journées André Verbert entrent dans leur douzième édition. Ces JAV constituent un moment privilégié pour les doctorants, situé à mi‐
parcours de la préparation de la thèse, et font partie intégrante des missions de l'Ecole Doctorale qui est celui de l'apprentissage du métier de chercheur ou d'enseignant‐chercheur. Pour les doctorants de deuxième année, il s'agit d'abord d'apprendre à présenter et à valoriser son travail devant un public diversifié, mais aussi d'écouter d'autres démarches, d'autres sujets, d'autres logiques. Les JAV sont aussi placées sous le signe de la convivialité et de l'échange et doivent contribuer à créer un sentiment d'appartenance à une «Grande Ecole Biologie‐Santé» régionale. Ces JAV sont aussi pour tous ceux qui participent à la vie de notre ED l'occasion d'apprécier la qualité et la diversité des recherches menées au sein de nos différents établissements coordonnés au sein du PRES Lille‐Nord de France : Universités Lille 1, Lille 2, du Littoral, d'Artois, Institut Pasteur, CHRU de Lille. A ce titre nous invitons les enseignants‐chercheurs et chercheurs à venir soutenir et encourager leurs jeunes poulains, leur présence est importante. Ces JAV sont aussi un moment clef pour l’évaluation de la progression et de la qualité des travaux réalisés en cours de thèse et s’inscrivent logiquement dans la continuation des comités de suivi de thèse, désormais institués au sein de l’ED et qui démontrent toute leur efficacité. Cette douzième édition coïncide aussi avec un évènement majeur pour la vie de l’ED avec le changement au niveau de la Direction. C’est avec beaucoup d’émotion que nous voyons partir celui qui a été le véritable «Papa» et « concepteur » de notre école doctorale dans sa forme actuelle, le Professeur Jean‐Paul Dessaint. Jean‐Paul a assuré la direction de l’ED pendant 10 ans et il a su hisser cette dernière au meilleur rang des ED françaises en veillant sans cesse à améliorer son système de fonctionnement, mettant en place les différents comités de direction, les différents jurys, le règlement intérieur de l’ED, la dotant d’un nouveau secrétariat … Je dois dire que j’ai toujours eu beaucoup de plaisir à travailler en binôme avec lui et j’ai pu apprécier son calme légendaire, son ouverture d’esprit, sa disponibilité et son souci de résoudre les problèmes quotidiens (et Jean‐Jacques nous dira qu’ils sont nombreux !) avec impartialité et sollicitude. Jean‐Paul a toujours su se rendre disponible et s’investir pour la collectivité malgré des charges hospitalières importantes et ses responsabilités de Direction de l’EA2686. Un Enorme Merci pour tout Jean‐Paul et nous savons que tu continueras encore à nos côtés et que tes conseils nous seront précieux ! Une page se tourne, une autre s’ouvre, nous souhaitons la bienvenue à Bernard Sablonnière qui après avoir assuré la responsabilité du Master 2 Biologie Santé assurera dorénavant la direction de l’Ecole Doctorale. L'organisation de ces Journées André Verbert nécessite une longue préparation, Jean‐Paul Dessaint et Bernard Sablonnière se joignent à moi pour remercier, au nom de tous, les doctorants du comité d'organisation de ces douzièmes JAV, ainsi que Jean‐Jacques Hauser dont nous connaissons tous l'engagement exemplaire au sein de l'ED, et bien sûr Malika Hamdane, qui avec le dynamisme, la bonne humeur et le sourire qui la caractérisent, ont tout mis en œuvre pour que ces 12ieme JAV soient une réussite. Comme à l’accoutumé ces journées se termineront par une conférence plénière, sur le thème du « Don » par le Professeur Jean‐Pierre Jouet, spécialiste des maladies du sang et responsable du pôle « Spécialité Médicale et Gérontologie « au CHRU de Lille. Et maintenant place à l'échange, place à la convivialité, place à la science. Jean‐Claude MICHALSKI Co‐Directeur de l'EDBSL -1-
PROGRAMME DU COLLOQUE 2012
8h30 : Accueil par le Directeur de l'ED
9h00 - 10h40 : Session orale
"Mécanismes des infections et des dérégulations pathologiques"
modérateurs : Sébastien BONTEMPS, Céline CARPENTIER, Pierre MARTINEZ, Rémi MONTAGNE
 BONTEMPS-GALLO Sébastien
(UMR 8576 éq. 06 - directeur de thèse : Jean-Marie LACROIX)
Concentration of Osmoregulated Periplasmic Glucans (OPGs) modulates the activation level
of the RcsCD-RcsB phosphorelay in the phytopathogen bacteria Dickeya dadantii
 LIGEON Laure-Anne (U 1019 - UMR 8204 éq. 05 - directeur de thèse : Frank LAFONT)
Les v-SNARE, VAMP3 et VAMP7, son t impliquées dans l’usurpation de la voie autophagique
par Yersinia pseudotuberculosis
 SAINT-POL Julien (EA 2465 - directeur de thèse : Laurence TILLOY-FENART)
Influence des oxystérols sur les échanges de peptides ß-amyloïdes au niveau de la ba rrière
hémato-encéphalique in vitro
 BOUILLEZ Audrey (U 837 éq. 05 - directeur de thèse : Michaël PERRAIS)
La mucine membranaire MUC1 : actrice de la progression tumorale rénale
 NUGUES Anne-Lucie (U 837 éq. 03 - directeur de thèse : Bruno QUESNEL)
Altération du Ripoptosome dans les précurseurs de leucémie aigue myéloblastique
10h40 - 11h10 : Pause café
"Métabolisme : aspects biochimiques et physiologiques"
modérateurs : Alaa AL SAABI, François AUBERT, Sami TRABELSI, Marine WARNIER
 AL SAABI Alaa (EA 4483 - directeur de thèse : Delphine ALLORGE)
Etude in vitro de la glucuronoconjugaison de l’éthanol: implication de deux enzymes
génétiquement polymorphes (les UGT1A9 et 2B7) et interactions avec d’autres drogues
 HANNOU Sarah (U 1011 - directeur de thèse : Réjane PAUMELLE)
Rôle d’un gène suppresseur de tumeurs (CDKN2A/p16 INK4a )
métabolisme hépatique du glucose
dans le contrôle du
 WATTEZ Jean-Sébastien (EA 4489 - directeur de thèse : Didier VIEAU)
L'adoption prévient les alt érations métaboliques chez le rat mâl e présentant un reta rd de
croissance intra-utérin résultant d’une dénutrition maternelle
 MAKKI Kassem (UMR 8199 - directeur de thèse : Isabelle WOLOWCZUK)
Les effets de la rapamycine sur l’homéostasie énergétique et la réponse inflammatoire chez
la souris
12ème Journée André VERBERT
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Faculté de Médecine
12h30 - 13h30 : Pause déjeuner
13h30 - 15h00 : Session "Posters"
" Diagnostique et thérapeutiques"
modérateurs : Solène GATAULT, Cyril LAURENT, Nicolas PORET, Gurvan QUENIAT
 FOUGERON Delphine (U 1019 - UMR 8204 éq. 08 - directeur de thèse : Jean-Claude SIRARD)
Mechanisms of action of flagellin as a mucosal adjuvant
 MAUREL Blandine (U 1008 - directeur de thèse : Stéphan HAULON)
Nouvelles cibles thérapeutiques pour lutter contre la resténose intra-stent et validation d’ un
modèle d’étude in vitro hémodynamique
 POISSY Julien (U 995 éq. 02 - directeur de thèse : Daniel POULAIN)
Glycannes fongiques circulant dans le sérum des patients de réanimation. Analyse de
l’intérêt clinique et dév eloppement de méthodes physico-chimiques de détectioncaractérisation
 ENDOUGOU EFFA Anne Marie (U 995 éq. 01 - directeur de thèse : Pierre DESREUMAUX)
Etude de l’in nocuité et des p ropriétés antiinflammatoires hépatiques des extraits d’une
plante médicinale camerounaise
16h30 - 17h30 : Conférence plénière
"Le Don"
Pr Jean-Pierre JOUET
PU-PH à l'université Lille 2 et au CHRU de Lille
Spécialiste des Maladies du Sang
Chef du Pôle Spécialités médicales et gérontologie
à partir de 17h45 : Attribution des Prix et Cocktail de clôture
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NOM Prénom
session
page
ABEDINI Amin
Poster - n°01
23
AL SAABI Alaa
Session "Métabolisme : aspects biochimiques et physiologiques" - n°01
13
ALLISSE Maxime
Poster - n°02
23
AMELLER Aurely
Poster - n°03
23
AWAD Ali
Poster - n°04
24
BAELEN Stéphanie
Poster - n°05
24
BELGHOUL-CHOUFI Bachra
Poster - n°11
27
BONTEMPS-GALLO Sébastien
Session "Mécanismes des infections et des dérégulations pathologiques"- n°01
7
BOUILLEZ Audrey
10
BUTRUILLE Laura
Poster - n°06
25
CALAIS F-Gauthier
Poster - n°07
25
CANIVET Ludivine
Poster - n°08
26
CARPENTIER Céline
Poster - n°09
27
CENCI Ugo Pierre
Poster - n°10
27
CHOUFI-BELGHOUL Bachra
Poster - n°11
27
COURJOL Flavie
Poster - n°12
28
DA COSTA DE MATOS Anaelle
Poster - n°13
28
DELMONT Anne
Poster - n°14
29
DESANLIS-MAUREL Blandine
Session "Diagnostique et thérapeutiques" - n°02
19
DESURMONT Thibault
Poster - n°15
29
DO Minh Phuong
Poster - n°16
30
DONNIER-MARECHAL Marion
Poster - n°17
31
EL HAGE Zaher
Poster - n°18
31
ENDOUGOU EFFA Anne Marie
21
ESCOBAR Adelma
Poster - n°19
32
FAN Ying
Poster - n°20
32
FOUGERON Delphine
18
GARGANI Sofia
Poster - n°21
33
GENAY Stéphanie
Poster - n°22
33
GENIN Michael
Poster - n°23
34
GNEMMI Viviane
Poster - n°24
34
GRONNIER Caroline
Poster - n°25
35
GUE Emilie
Poster - n°26
35
GUERRESCHI Pierre
Poster - n°27
36
HADDADI Ahmed
Poster - n°28
36
HANNOU Sarah
14
HULO Sébastien
Poster - n°29
37
JUMEAU Fanny
Poster - n°30
38
KUNTZ Mélanie
Poster - n°31
38
KWIATKOWSKI Arnaud
Poster - n°32
39
LAHDAOUI-OUADDI Fatima
Poster - n°33
39
LANCELOT Julien
Poster - n°34
40
LANGLET Fanny
Poster - n°35
40
LAURENT Cyril
Poster - n°36
41
LEBLOND Pierre
Poster - n°37
41
-4-
NOM Prénom
session
page
LETRONNE Florent
Poster - n°38
42
LIGEON Laure-Anne
8
LORENZI Rodrigo
Poster - n°39
43
MAKKI Kassem
16
MAUREL-DESANLIS Blandine
19
MEAR Jean-Baptiste
Poster - n°40
43
MENDELEK Fady
Poster - n°41
44
MOCHE Hélène
Poster - n°42
44
MOURAD Abbas
Poster - n°43
45
NUGUES Anne-Lucie
11
OLEJNIK Cécile
Poster - n°44
46
OUADDI-LAHDAOUI Fatima
Poster - n°33
39
OUSSAIDENE Kahina
Poster - n°45
47
PETIT Florence
Poster - n°46
48
PINETON DE CHAMBRUN Guillaume
Poster - n°47
49
PLOMHAUSE Lucie
Poster - n°48
50
POISSY Julien
20
PONTANA François
Poster - n°49
50
POREZ Geoffrey
Poster - n°50
51
POTEY Camille
Poster - n°51
52
PREAU Sébastien
Poster - n°52
53
RAIBAUT Laurent
Poster - n°53
53
REBOUL Angéline
Poster - n°54
54
REYNAERT Marie-Line
Poster - n°55
54
SAINT-POL Julien
9
SIPIETER Francois
Poster - n°56
54
SOBOCINSKI Jonathan
Poster - n°57
55
STEENACKERS Agata
Poster - n°58
56
TONOLI Cajsa
Poster - n°59
56
TOURTEAU Aurélien
Poster - n°60
57
TUNCAY Hande
Poster - n°61
57
VANBESELAERE Jorick
Poster - n°62
58
VANDERSTRAETE Mathieu
Poster - n°63
58
VANDOMME Audrey
Poster - n°64
59
VANDOMME Jérôme
Poster - n°65
59
VAUSSELIN Thibaut
Poster - n°66
60
VELGHE Carine
Poster - n°67
60
VERHAEGHE Romain
Poster - n°68
61
VIOLET Marie
Poster - n°69
62
WARNIER Marine
Poster - n°70
63
WATTEZ Jean-Sébastien
15
ZGHEIB Sara
Poster - n°71
64
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SESSION
MECANISMES DES INFECTIONS ET
DES DEREGULATIONS PATHOLOGIQUES
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BONTEMPS-GALLO Sébastien
Jean-Marie LACROIX (UMR 8576 éq. 06 - LACROIX Jean-Marie)
Session orale 1 "Mécanismes des infections et des dérégulations pathologiques" (9h00 - 10h40) - n°01
Concentration of Osmoregulated Periplasmic Glucans (OPGs) modulates the activation level of the RcsCD-RcsB
phosphorelay in the phytopathogen bacteria Dickeya dadantii
Sébastien Bontemps-Gallo, Edwige Madec, Jacqueline Dondeyne, Olivier Vidal, Jean-Marie Lacroix
Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle, UMR CNRS 8576, Université des Sciences et Technologies de Lille
Osmoregulated periplasmic glucans (OPGs) are a family of periplasmic oligosaccharides found in the envelope of most Proteobacteria. Their
two common features are that glucose is the sole constitutive sugar and that their abundance in the periplasm increases as the osmolarity of the
medium decreases. These glucans belong to the common virulence factors of many Proteobacteria zoo- and phyto- pathogens, such as
Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa or Dickeya dadantii.
Dickeya dadantii is a phytopathogen Enterobacteria that causes soft rot disease in a wide range of plant species. This opportunistic pathogen
devastates economically important crops in storage facilities or in growing plants. In D. dadantii, OPG glucose backbone is synthesized by the
products of the opgGH operon. opgG or opgH mutant strains are completely devoid of OPGs and show a pleiotropic phenotype including loss of
motility, induction of a general stress response and complete loss of virulence on potato tubers and on chicory leaves (Page, 2001; Bouchart,
2007).
Recently, we showed that mutations in the RcsCDB phosphorelay system restored virulence and motility in strains of D. dadantii devoid of
OPGs, indicating a relationship between the Rcs phosphorelay and OPGs (Bouchart, 2010).
Phosphorelays (also called two component systems) are the main systems used by bacteria to sense and respond to variations of their
environment. Under various stimuli, including increased medium osmolarity, the transmembrane sensor histidine kinase RcsC is activated,
autophosphorylates and transfers its phosphate group to its cognate cytoplasmic response regulator, RcsB, via the intermediate transmembrane
protein RcsD. In turn, RcsB regulates the expression of different target genes. Activation of the RcsCD RcsB system decreases motility by
repression of the flhDC operon, decreases virulence and activates the ftsAZ operon, required for cell division. Recently, the RcsCD RcsB
phosphorelay was shown to regulate more than 150 genes in S. enterica (Mariscotti and Garcia-del Portillo, 2009).
The objective of this work was to decipher with the relationship between the OPGs and the RcsCD-RcsB system. OPGs are connected to the
phosphorylation state of the RcsB regulator. Thus, either this relationship is regulated as a binary system (phosphorelay on/off : presence/lack of
OPG) or the activity level of the RcsCD-RcsB system is finely controlled by fluctuation of OPGs concentration.
Data presented in this study indicate that OPGs concentration modulates the activity of the RcsCD-RcsB phosphorelay. In addition, OPGs are
present in bacteria throughout the virulence process in planta and are required at a minimal concentration for full virulence. It is now well known
that proteins may regulate phosphorelays at the activity level but to our knowledge, this is the first study showing modulation of such a system by
an oligosaccharide.
Références :
Bouchart, F., A. Delangle, J. Lemoine, J.-P. Bohin, and J.-M. Lacroix (2007) Proteomic analysis of a non virulent mutant of the phytopathogenic bacterium
Erwinia chrysanthemi deficient in osmoregulated periplasmic glucans: change in protein expression is not restricted to the envelope, but affects general
metabolism. Microbiology 153: 760-767.
Bouchart, F., Boussemart G., Prouvost AF., Cogez V., Madec E., Vidal O., Delrue B., Bohin JP., Lacroix J.M (2010) The virulence of a Dickeya dadantii 3937
mutant devoid of osmoregulated periplasmic glucans (OPGs) is restored by inactivation of the RcsCD RcsB phosphorelay. J Bacteriol 192: 3484–3490.
Mariscotti, J.F., and Garcia-del Portillo, F. (2009) Genome expression analyses revealing the modulation of the Salmonella Rcs regulon by the attenuator IgaA.
Journal of bacteriology 191: 1855-1867.
Page, F., Altabe S., Hugouvieux-Cotte-Pattat N., Lacroix J. M., Robert-Baudouy J., and J.P. Bohin (2001) Osmoregulated periplasmic glucan synthesis is
required for Erwinia chrysanthemi pathogenicity. J Bacteriol 183: 3134-31.
-7-
LIGEON Laure-Anne
Frank LAFONT (U 1019 - UMR 8204 éq. 05 - LAFONT Frank)
Les v-SNARE, VAMP3 et VAMP7, sont impliquées dans l’usurpation de la voie autophagique par Yersinia
pseudotuberculosis
Laure-Anne Ligeon1, Kevin Moreau1*, Elisabeth Werkmeister2, Antonino Bangovani2, Frank Lafont1,2
1 Microbiologie cellulaire des pathogènes infectieux - Centre d’infection et d’immunité de Lille, CNRS UMR8204, INSERM U1019, Institut
Pasteur de Lille, Univ. Lille Nord de France
2 BioImaging Center Lille Nord de France-campus Pasteur IFR142
L’autophagie est un processus de dégradation cellulaire conservé dans les cellules eucaryotes. Ce mécanisme, est à l’origine de la
séquestration de composants cytoplasmiques, d’organites et également de pathogènes dans une vésicule à double membranes appelée
autophagosome. Le contenu des autophagosomes est ensuite dégradé par fusion avec les lysosomes. La formation des autophagosomes est
sous le contrôle d’une trentaine de gènes Atg (Autophagy genes) codant pour des protéines pouvant interagir avec de multiples autres
impliquées dans le trafic intracellulaire telles que les SNARE (Nair et al 2011). Par exemple, la fusion de la protéine ATG16L1 et de la v-SNARE
VAMP7 intervient dans les stades précoces de la formation de l’autophagosome (Moreau et al, 2011).
Notre étude consiste à caractériser le mécanisme d’usurpation de l’autophagie par l’entérobactérie Yersinia pseudotuberculosis. La réplication
de Y. pseudotuberculosis, dans les macrophages, in vitro, peut être associée à sa capacité de se répliquer au sein d’un autophagosome en
bloquent sa maturation (Pujol and Bliscka, 2003 ; Moreau et al, 2010).
Pour caractériser ce mécanisme, nous étudions l’implication et le rôle de deux protéines SNARE, VAMP3 et VAMP7, dans le trafic intracellulaire
et l’usurpation de l’autophagie par Y. pseudotuberculosis dans les macrophages.
Nos résultats montrent que la protéine VAMP3 est recrutée dans les stades très précoces de l’infection au niveau de la vacuole contenant Y.
pseudotuberculosis (YCV) puis est en suite relayée par la protéine VAMP7. De plus, nous avons montré par immunofluorescence que la
protéine VAMP7 est co-distribuée avec le marqueur de l’autophagie, LC3, autour des YCV. Nos analyses biochimiques ont non seulement
confirmées que l’inhibition de l’expression de VAMP7 diminue l’autophagie induite par des inducteurs d’autophagie mais également nous avons
étendu l’importance de cette implication à celle liée à Y. pseudotuberculosis. Ainsi, VAMP7 joue-t-elle un rôle important dans la régulation du
trafic intracellulaire de ce pathogène.
Références :
Moreau, K., Lacas-Gervais, S., Fujita, N., Sebbane, F., Yoshimori, T., Simonet, M., & Lafont, F. (2010). Autophagosomes can support Yersinia
pseudotuberculosis replication in macrophages. Cellular Microbiology, 12(8), 1108–1123.
Moreau, K., Ravikumar, B., Renna, M., Puri, C., & Rubinsztein, D. C. (2011). Autophagosome precursor maturation requires homotypic fusion. Cell, 146(2), 303–
317.
Nair, U., Jotwani, A., Geng, J., Gammoh, N., Richerson, D., Yen, W.-L., Griffith, J., et al. (2011). SNARE Proteins Are Required for Macroautophagy. Cell,
146(2), 290–302.
Pujol, C. and Bliska, J.B (2003). The ability to replicate in macrophages is conserved between Yersinia pestis and Yersinia pseudotuberculosis. Infect Immun,
71(10) 5892–5899.
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SAINT-POL Julien
Laurence TILLOY-FENART (EA 2465 - CECCHELLI Roméo)
Influence des oxystérols sur les échanges de peptides ß-amyloïdes au niveau de la barrière hémato-encéphalique in
vitro
Julien SAINT-POL, Pietra CANDELA, Marie-Christine BOUCAU, Roméo CECCHELLI, Laurence TILLOY-FENART & Fabien GOSSELET
Laboratoire de Physiopathologie de la Barrière Hémato-Encéphalique (LBHE), EA 2465 - IMPRT - IFR 144 - Université d'Artois LENS
La maladie d’Alzheimer (MA) est une maladie neurodégénérative caractérisée en partie par le dépôt et un défaut d’élimination des peptides βamyloïdes (Aβ). Au cours de la MA, les taux d’oxystérols (métabolites du cholestérol) tels que le 24S-hydroxycholestérol (24S-OH-chol) et de
27-hydroxycholestérol (27-OH-chol) sont dérégulés et semblent étroitement liés au métabolisme amyloïde. Ces deux oxystérols sont des
agonistes naturels des récepteurs nucléaires Liver X Receptors (LXRs), récepteurs nucléaires impliqués dans le métabolisme lipidique
cellulaire. Le 24S-OH-chol est exclusivement synthétisé par une population sélecte de neurones, tandis que le 27-OH-chol est majoritairement
issu du métabolisme hépatique. Leurs influences sur les gènes cibles des LXRs ont été bien caractérisés au niveau neuronal et glial, mais peu
d’informations existent au niveau de la BHE, plus précisément au niveau de deux types cellulaires qui la constituent : les cellules endothéliales
des capillaires cérébraux (CECs) et les péricytes cérébraux. Ces deux types cellulaires sont exposés à des flux constants de 24S-OH-chol et de
27-OH-chol et sont impliqués dans les échanges de peptides Aβ. Les oxystérols, les LXRs, le transporteur ABCA1 (cible des LXRs) et l’ApoE
(apolipoprotéine majoritaire du cerveau) sont à l’heure actuelle reconnus comme facteurs clés pour le dépôt et/ou l’accumulation des peptides
Aβ au niveau cérébral et périvasculaire. Fort de ce constat, en utilisant un modèle in vitro de BHE, cette étude a pour objectif de caractériser
l’influence de ces deux oxystérols sur les CECs et les péricytes, en se focalisant sur leur impact sur les cibles des LXRs et sur le transport/la
prise en charges des peptides Aβ.
Les résultats obtenus démontrent que le 24S-OH-chol et le 27-OH-chol exercent leur rôle d’agonistes des LXRs en augmentant l’expression de
deux de leurs cibles, les transporteurs ABCA1 et ABCG1, de manière dose-dépendante et type cellulaire-dépendant. Cette induction
d’expression corrèle avec l’augmentation de l’efflux de cholestérol vers les apolipoprotéines ApoA-I, ApoEs et HDL.
Concernant les échanges de peptides Aß (Aß40 et Aß42), notre étude montre que ni le 24S-OH-chol, ni par le 27-OH-chol ne modifie
l’accumulation de ces peptides au niveau des péricytes. Toutefois, ils modulent le transport des peptides Aß40 et Aß42 à travers les CECs de la
BHE.
Des travaux complémentaires étayeront ce dernier point, avec pour objectif de mieux comprendre l’incidence des oxystérols sur les CECs en
terme d’échanges de peptides Aß, ceci du point de vue moléculaire et fonctionnel. A terme, ces travaux permettront d’approfondir nos
connaissances sur les relations existant entre métabolisme du cholestérol et métabolisme amyloïde.
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BOUILLEZ Audrey
Michaël PERRAIS (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
La mucine membranaire MUC1 : actrice de la progression tumorale rénale.
Audrey Bouillez1, Caroline Butruille2, Bélinda Ringot1, Brigitte Hémon1, Viviane Gnemmi1,2, Isabelle Van Seuningen1, Laurent Zini2, Xavier
Leroy2, Sébastien Aubert1,2, Michaël Perrais1.
1 : INSERM U837-JPArc, Lille cedex, France , 2 : CHRU de Lille
Le cancer du rein représente 3% des cancers de l’adulte. Il n’existe à ce jour, aucun traitement efficace, ce carcinome étant un des plus chimio
et radiorésistant. Il est donc nécessaire d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques.
Nos travaux s’intéressent à la surexpression de la mucine membranaire MUC1, volumineuse O-glycoprotéine, qui se trouve corrélée à un
mauvais pronostique dans le carcinome rénal à cellules claires (cRCC), le sous-type histologique majeur des cancers du rein.
Pour mieux comprendre les rôles de MUC1 dans les cRCC, nous avons utilisé deux lignées cellulaires rénales n’exprimant pas MUC1 (ACHN)
ou l’exprimant constitutivement (786.O). Les cellules ACHN ont été stablement transfectées avec un vecteur d’expression contenant l’ADNc de
MUC1, induisant ainsi une surexpression de MUC1 et les cellules 786.O, avec des shARN ciblant MUC1.
Nos études in vitro ont montré l’implication de MUC1 dans l’acquisition d’un phénotype agressif avec une augmentation des propriétés invasives
et migratoires des cellules, une perte des interactions cellule-cellule ainsi que l’apparition d’une résistance à l’anoïkis, programme de mort
cellulaire déclenché en conditions défavorables. Les transfections de différentes constructions de MUC1 (délétée de son domaine extracellulaire
ou de sa queue cytoplasmique ou pleine longueur mais mutée sur les 7 tyrosines de la queue cytoplasmique) dans les cellules ACHN nous ont
permis de montrer un rôle synergique des domaines extra- et intra-cellulaire dans les phénomènes d’invasion, de migration et d’agrégation
cellulaire.
Des xénogreffes hétérotopiques et orthotopiques des différents clones cellulaires chez la souris SCID sont en cours de réalisation.
Nos travaux montrent aussi que la surexpression de MUC1 induit la voie NF-κB et la surexpression de la sous-unité p50 suggérant un rôle dans
la résistance à l’apoptose.
De plus, une étude transcriptomique nous a permis de montrer que la surexpression de MUC1 est associée à une augmentation de l’expression
de gènes de chimiorésistance et à une résistance des cellules à certaines classes d’agents chimiothérapeutiques.
Enfin, nous montrons que la gamma-secrétase est responsable du clivage protéolytique au niveau de la queue cytoplasmique de MUC1,
permettant ainsi sa translocation au noyau où elle agit comme co-activateur transcriptionnel de gènes impliqués dans l’acquisition d’un
phénotype invasif et chimiorésistant.
En conclusion, nous montrons que MUC1 est une actrice majeure de la carcinogenèse rénale. Une meilleure connaissance des mécanismes
moléculaires mis en jeu lors de la progression tumorale rénale nous a permis également de proposer la gamma-secrétase comme potentielle
cible thérapeutique. Des expériences in vivo chez la souris SCID nous permettront de valider ces résultats.
- 10 -
NUGUES Anne-Lucie
Bruno QUESNEL (U 837 éq. 03 - QUESNEL Bruno)
Altération du Ripoptosome dans les précurseurs de leucémie aigue myéloblastique
AL Nugues 1, H Bouafia 1, C Berthon 1,2, D Hetuin 1, C Preudhomme 1, N Jouy 3, T Idziorek 1, B Quesnel 1,2
1 Inserm U837 E3 IRCL, 2 Service des Maladies du Sang CHU Lille, 3 Plateforme de cytométrie et de Tri Cellulaire,IFR 114,Université de Lille 2
INTRODUCTION : La décision pour une cellule d'entrer en nécroptose ou apoptose est régulée par un complexe dénommé ripoptosome
constitué des protéines kinases RIP1 et RIP3 (Receptor Interacting Protein), ainsi que Cylindromatosis D (CYLD), une desubiquitinase capable
d'interagir avec RIP1. Ces protéines sont étroitement impliquées dans la signalisation des récepteurs de mort comme le TNF-R1 ou Fas, et
induisent apoptose, nécroptose, ou survie cellulaire. Nous avons observé que l’expression de la protéine RIP3 était éteinte dans des cellules
leucémiques myéloïdes murines DA1-3b (Bcr-Abl positive), suggérant une modification du ripoptosome au cours des leucémies aigues
myéloblastiques (LAM). Nous avons donc décidé d'évaluer les composants de ce complexe dans les blastes d'une cohorte de patients atteints
de LAM et les conséquences fonctionnelles d'une éventuelle altération ainsi que l'étude fonctionnelle de la protéine RIP3 dans les cellules DA13b.
PATIENTS ET METHODES : Le profil d'expression de RIP1, RIP3 et CYLD a été étudié par RQ-PCR dans la population de précurseurs
cellulaires CD34+ triés sur colonne magnétique à partir de prélèvements médullaires, provenant de patients atteints de LAM inclus dans les
essais cliniques ALFA 07-01 et 07-02, ou de donneurs sains. Parallèlement, le rôle fonctionnel de la protéine RIP3 a été étudié au moyen d'un
système d'expression inductible dans la lignée leucémique DA1-3b. Différentes protéines RIP3 ont été utilisées, la protéine native (WT), une
protéine mutée dans le domaine kinase (KD) et une protéine mutée dans le domaine d'interaction spécifique avec RIP1 (RHIM). L'analyse de la
survie et de la mort cellulaire ont été étudiées par cytométrie en flux et par fragmentation de l'ADN.
RESULTATS : L'analyse des blastes CD34+ de quinze patients atteints de LAM montre que l'expression de l'ARN messager de RIP3 est
significativement diminuée par rapport à celle des cellules CD34+ issue de donneurs sains (p = 0,001). Aucune corrélation avec une methylation
du promoteur n'a été observée en Q-MSP. Une diminution parallèle de l'expression est observée pour CYLD (p = 0,0001). Le profil d'expression
de l'ARNm RIP1 montre une relation inverse d'expression avec celui de RIP3. En effet, dans les blastes CD34+ de LAM l'expression de RIP1
est supérieure à celle des cellules CD34+ de donneurs sains où elle est difficile à détecter (p = 0,0015). Il est important de noter que ces
modifications de profil du ripoptosome n'étaient pas détectables dans la population de blastes non triés. Il existe donc un switch d'expression
RIP1/RIP3 entre cellules souches hématopoïétiques normales et blastes de LAM CD34+, et donc probablement une fonction différente du
ripoptosome acquise au cours de la leucémogénèse. L'analyse fonctionnelle des protéines RIP3 natives et mutantes dans les cellules DA1-3b,
montre que RIP3 induit essentiellement une apoptose et non une nécroptose. Cette apoptose est dépendante du domaine RHIM, puisque
qu'une mutation dans ce domaine ne permet plus à la protéine d'induire l'apoptose dans ces mêmes cellules. L'inactivation du domaine kinase
de RIP3 induit une activité proapoptotique plus importante que la protéine native, suggérant un rôle régulateur. L'utilisation de z-VAD-FMK, un
pan-inhibiteur des caspases, montre, qu'en absence d'activité caspases, l'expression de la protéine WT n'induit plus d'apoptose mais de la
nécroptose indiquant ainsi une mort caspases indépendante. L'étude en modèle murin confirme ces résultats, indiquant que les souris ayant
reçu des cellules pour lesquelles l'expression de RIP3-KD a été déclenchée in vivo survivent plus longtemps que les souris contrôles.
CONCLUSION : Ces données indiquent une atteinte du ripoptosome dans les précurseurs de LAM, aboutissant à un déficit d'apoptose, et
suggèrent un rôle possible des récepteurs de mort dans la régulation des cellules souches hématopoïétiques et une perte de cette régulation
dans les cellules souches leucémiques
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SESSION
METABOLISME :
ASPECTS BIOCHIMIQUES ET PHYSIOLOGIQUES
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AL SAABI Alaa
Delphine ALLORGE (EA 4483 - BROLY Franck)
Session orale 2 "Métabolisme : aspects biochimiques et physiologiques" (11h10- 12h30) - n°01
Etude in vitro de la glucuronoconjugaison de l’éthanol: implication de deux enzymes génétiquement polymorphes (les
UGT1A9 et 2B7) et interactions avec d’autres drogues
A. AL SAABI, N. PICARD, G. TOURNEL, J-M. GAULIER, D. ALLORGE
EA4483, Faculté de Médecine, Univ. Lille-Nord de France; INSERM, UMR-S850, Univ. Limoges; Labo. de Toxicologie, CHRU de Lille;
Département de Pharmacologie et Toxicologie, CHU de Limoges.
Etude in vitro de la glucuronoconjugaison de l’éthanol: implication de deux enzymes génétiquement polymorphes (les UGT1A9 et 2B7) et
interactions avec d’autres drogues
Introduction : Le dosage de l’éthylglucuronide (EtG) est de plus en plus utilisé en toxicologie clinique et médico-légale afin d’évaluer la
consommation d'éthanol. Les enzymes impliquées dans la production de ce métabolite mineur de l’éthanol, ainsi que les interactions
potentielles avec des médicaments ou drogues fréquemment co-consommées avec l’éthanol ont été peu ou pas étudiées jusqu’à présent.
Méthodes : La glucuronoconjugaison de l’éthanol (50 et 250 mM) a été étudiée in vitro à l’aide de pools de microsomes humains hépatiques
(MFH), rénaux (MRH) et intestinaux (MIH), ainsi que des principales UDP-glucuronosyltransférases (UGT) humaines recombinantes. Le dosage
de l’EtG a été réalisé par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC/MS-MS). Les paramètres cinétiques
(Vmax, Km, Clint) ont été déterminés à partir des différents microsomes et des UGT recombinantes. Les contributions individuelles des UGT
recombinantes ont été extrapolées par l’approche dite des facteurs d’activité relative (« RAF »). L’effet des composés suivants : morphine,
codéine, lorazépam, oxazépam, nicotine, cotinine, cannabinol et cannabidiol (à 5, 10 et 15 mg/L) sur la glucuronoconjugaison de l'éthanol (à 25,
100 et 250 mM) a été évalué à l'aide du pool de MFH.
Résultats: La comparaison des clairances intrinsèques (Clint) de formation de l’EtG démontre que le foie est l’organe le plus actif dans la
glucuronoconjugaison de l’éthanol (foie > rein > intestin). Toutes les isoformes testées, sauf les UGT1A1, 1A6 et 1A10, sont capables de
produire de l’EtG en quantités détectables (> 5 ng/mL ?). Les UGT1A9 et 2B7, qui contribuent respectivement à 17,2 % et 67,7 % de la Clint des
MFH, sont les deux isoformes principales pour la formation d’EtG. Seuls le cannabinol et le cannabidiol affectaient significativement la
glucuronoconjugaison de l’éthanol. Le cannabinol augmentait cette glucuronoconjugaison de manière concentration-dépendante, alors que le
cannabidiol l’inhibait significativement par un mécanisme non-compétitif (CI50 = 1,17 mg/L; Ki = 3,1 mg/L).
Conclusion: Les UGT1A9 et 2B7 ont été clairement identifiées comme les principales UGT humaines impliquées dans la glucuronoconjugaison
de l’éthanol. Les polymorphismes génétiques de ces deux enzymes pourraient ainsi contribuer à la variabilité interindividuelle de production
d’EtG. En outre, ces résultats in vitro suggèrent que le cannabinol et le cannabidiol pourraient modifier la glucuronoconjugaison hépatique de
l’éthanol. Des études supplémentaires sont nécessaires pour étudier l'impact in vivo de la consommation de cannabis sur la
glucuronoconjugaison de l’éthanol et, par conséquent, sur l’interprétation des concentrations d’EtG par rapport aux valeurs-seuils actuellement
proposées, dans le cas d’une consommation associée d’éthanol et de cannabis.
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HANNOU Sarah
Réjane PAUMELLE (U 1011 - STAELS Bart)
Rôle d’un gène suppresseur de tumeurs (CDKN2A/p16 INK4a ) dans le contrôle du métabolisme hépatique du glucose
Hannou S.A.,Bantubungi K.,Vallez E.,Caron-Houde S.,Baron M.,Wouters K.,Bouchaert E.,Staels B.,Tailleux A,Paumelle R.
U1011, Récepteurs Nucléaires, Maladies Cardiovasculaires etDiabète. Laboratoire J&K, Boulevard du Pr Jules Leclerc.59045 LILLE Cedex
Introduction: p16INK4a est un gène suppresseur de tumeur dont le rôle de régulateur du cycle cellulaire est aujourd’hui bien décrit. p16INK4a
inhibe la formation des complexes « cyclin-dependent kinase » (CDK) 4 ou 6/Cycline D empêchant ainsi la progression en phase S du cycle
cellulaire. De nombreuses études ont également montré que p16INK4a, dont l’expression augmente avec l’âge, favorisait la sénescence de
nombreuses cellules dont les cellules b pancréatiques, productrices d’insuline. Plus récemment, des études d’association de gènes ou GWAS
(Genome-wide association studies) ont associés le locus CDKN2A/2B qui code en partie pour la protéine p16INK4a au développement de
maladies métaboliques, telles que le diabète de type 2. Dans ce contexte, nous nous sommes intéressés au rôle de p16INK4a dans le
métabolisme hépatique du glucose par des approches in vivo en utilisant des souris sauvages (p16+/+) ou déficientes pour l’expression de p16
(p16-/-) et in vitro en utilisant des hépatocytes primaires de souris ou une lignée cellulaire d’hépatocytes.
Méthodes : Le rôle de p16INK4a dans la voie de la néoglucogenèse a été analysé in vivo en utilisant le test au pyruvate, qui consiste à mesurer
la cinétique de glycémie en réponse à une injection de pyruvate (substrat de la néoglucogenèse) aux souris p16+/+ et p16-/-. Ensuite afin
d’étudier le rôle de p16INK4a dans le métabolisme hépatique du glucose, l’effet de la déficience de p16INK4a sur l’expression des gènes de la
néoglucogenèse induite par le glucagon a été analysée in vitro dans des hépatocytes primaires de souris p16+/+ et p16-/- , ou dans une lignée
cellulaire hépatique (AML12) transfectées par un siRNAp16 en utilisant les techniques de PCR quantitative et de western-blot. Afin de mettre en
évidence le mécanisme moléculaire d’action de p16INK4a in vitro, la déficience de p16INK4a sur la régulation de la voie AMPc-PKA-CREBPGC1a a été étudiée en utilisant un modèle de lignée hépatique AML12 transfectées par un siRNA p16.
Résultats : In vitro, la déficience en p16INK4a dans des hépatocytes primaires de souris p16-/- ou dans des AML12 transfectées par un
siRNAp16 augmente l’expression de gènes de la néoglucogenèse tels que PECPK, F1,6 biPase et G6Pase à l’état basal ou après une
stimulation par le glucagon. De plus, le test au pyruvate montre que les souris p16-/- présentent une augmentation plus forte de la glycémie que
les souris p16+ /+, suggérant que p16INK4a module la voie de la néoglucogenèse in vivo. L’analyse du mécanisme moléculaire d’action de
p16INK4a dans les AML12 montre que la diminution de l’expression de p16INK4a augmente l’expression de PGC1a, un cofacteur clé de
nombreux facteurs de transcription impliqués dans la régulation du métabolisme énergétique. Cet effet est corrélé avec une augmentation de
l’activité PKA, de la concentration en AMPc, et de la phosphorylation de CREB.
Conclusion : L’ensemble de ces résultats montrent que p16INK4a module le métabolisme énergétique des hépatocytes in vitro et in vivo en
augmentant la néoglucogenèse via la voie AMPc-PKA-CREB-PGC1a. Le mécanisme moléculaire par lequel p16INK4a module la voie AMPcPKA-CREB-PGC1a reste à déterminer.
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WATTEZ Jean-Sébastien
Didier VIEAU (EA 4489 - STORME Laurent)
L'adoption prévient les altérations métaboliques chez le rat mâle présentant un retard de croissance intra-utérin
résultant d’une dénutrition maternelle
Jean-Sébastien Wattez, Fabien Delahaye, Ouma Cissé, Christine Laborie, Isabelle Dutriez, Sylvie Deloof, Jean Lesage, Christophe Breton,
Benoit Foligné et Didier Vieau
EA4489 Université Lille 1 Cité Scientifique, 59655 Villeneuve d'Ascq
Des données épidémiologiques et expérimentales montrent qu’un retard de croissance intra-utérin (RCIU) sensibilise au développement de
maladies chroniques de l’adulte comme l’obésité, le diabète et/ou l’hypertension. Il a été également rapporté que des altérations de croissance
durant la période postnatale précoce, via la lactation, peuvent exercer des effets à long terme sur la programmation/déprogrammation de
maladies métaboliques.
A l’aide d’un modèle de dénutrition maternelle périnatale de 50% (modèle FR50) chez le rat qui induit un retard de croissance intra- et extrautérin chez la descendance, nous avons montré que les rats mâles FR50 présentent un déficit de masse pondérale, des altérations du
métabolisme glucidique et une légère hypertension à l’âge de 6 mois. L’adoption des nouveau-nés RCIU par des mères nourries ad libitum
pendant la période de lactation permet une restauration de leur masse pondérale comparable à celle des nouveau-nés normotrophes dès le
10ème jour de vie postnatale (PND10) et une normalisation de leur taux de leptine plasmatique à PND 10 et 21 ; cette dernière exerçant des
actions sur le neurodéveloppement du rongeur-nouveau-né. Les adoptions préviennent le développement de l’hypertension et les altérations de
la régulation de la glycémie observées en réponse à un test de tolérance orale au glucose. En outre, le lait des mères dénutries pendant la
lactation présente des concentrations en leptine amoindries en regard des rates nourries ad libitum.
Dans notre modèle expérimental, l’adoption permet un rattrapage précoce de la croissance et une restauration des taux plasmatiques de leptine
pendant la lactation, et est associée à une prévention à long terme des altérations métaboliques programmées pendant la période périnatale
chez le rat mâle adulte. Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives pour identifier les composés du lait qui pourraient entrer dans la
composition de laits artificiels pour tenter de « déprogrammer » précocement les pathologies de l’adulte.
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MAKKI Kassem
Isabelle WOLOWCZUK (UMR 8199 - FROGUEL Philippe)
Les effets de la rapamycine sur l’homéostasie énergétique et la réponse inflammatoire chez la souris
Kassem MAKKI
CNRS UMR 8199, Institut de Biologie de Lille à l'Institut Pasteur de Lille
Introduction : L'inflammation chronique « à bas bruit » est une caractéristique de l'obésité et serait associée à l’installation progressive de la
résistance à l'insuline. Dans le tissu adipeux blanc, l’inflammation est initiée par le recrutement séquentiel de cellules immunes, en particulier les
macrophages. En effet, une accumulation de macrophages est observée dans le tissu adipeux blanc d’individu obèse (souris ou humain),
comparativement au tissu d’individu mince. Contrairement aux macrophages résidents de type M2, anti-inflammatoires, les macrophages
nouvellement recrutés dans le tissu adipeux blanc obèse sont de type M1, pro-inflammatoires, et sont responsables de la sécrétion de cytokines
pro-inflammatoires telles que le TNF-alpha et l’interleukine-6 (IL-6).
mTOR (mechanistic ou mammalian Target Of Rapamycin) est une protéine kinase activée par les nutriments tels que les acides aminés et le
glucose et les hormones telles que l’insuline. Par ailleurs, mTOR joue un rôle central dans la régulation de nombreux processus biologiques
comme la prolifération, la différenciation et la survie de nombreux types cellulaires, notamment les cellules de l’immunité acquise ou innée. De
ce fait, la perturbation de la voie de signalisation mTOR est souvent délétère et est à l’origine de nombreuses pathologies telles que cancers,
maladies auto-immunes ou maladies métaboliques. La rapamycine, inhibiteur spécifique de mTOR, est un composé immunosuppresseur
employé contre les rejets de greffe chez l’Homme. Cependant, des études rapportent que certains patients traités par la rapamycine présentent
des altérations de leur poids corporel et de leur sensibilité à l’insuline. De plus, certains de ces patients sont plus susceptibles de développer
des pathologies inflammatoires.
L’objectif est de déterminer si les perturbations métaboliques induites par la rapamycine sont associées à des modifications immunes,
notamment au sein du tissu adipeux blanc.
Matériels et méthodes : La rapamycine est injectée (2 mg/kg) par voie intra-péritonéale une fois par semaine à des souris C57BL6/J mises sous
régime hyper-lipidique (60% de lipides). L'évolution du poids corporel ainsi que la sensibilité au glucose et à l’insuline sont déterminées
régulièrement au cours de la cinétique (pesées et tests in vivo de tolérance au glucose et de sensibilité à l’insuline, respectivement). Les taux
d’hormones (leptine et insuline) et de cytokines sériques sont mesurés (ELISA et Protein Arrays). L’analyse comparative de l’expression des
gènes du tissu adipeux blanc est réalisée (microarrays). Enfin, le recrutement cellulaire dans le tissu adipeux est étudié (histologie et immunohistochimie).
Résultats : Nous montrons que la rapamycine limite le gain de poids corporel et altère le métabolisme glucidique et insulinémique en rendant les
souris intolérantes au glucose et hypo-insulinémiques. De plus, la rapamycine favorise le développement d'un état pro-inflammatoire via
l’augmentation du recrutement cellulaire (essentiellement les macrophages) et l’expression des facteurs inflammatoires tels que l’IL-6 et le MCP1 (monocyte chimioattractant protein-1) au niveau du tissu adipeux blanc viscéral. En parallèle, la rapamycine provoque une augmentation de
l’expression des cytokines inflammatoires circulantes.
Conclusion : La voie mTOR est sur-activée lors de l’obésité et nous montrons que son inhibition, par la rapamycine, exacerbe l’inflammation en
augmentant le recrutement des macrophages au sein du tissu adipeux blanc. Ainsi, la voie mTOR pourrait représenter une cible thérapeutique
de choix dans le traitement des maladies métaboliques telles que la résistance à l’insuline ou l'obésité.
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SESSION
DIAGNOSTIQUE ET THERAPEUTIQUES
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FOUGERON Delphine
Jean-Claude SIRARD (U 1019 - UMR 8204 éq. 08 - TROTTEIN François)
Session orale 3 "Diagnostique et thérapeutiques" (15h00 - 16h30) - n°01
Mechanisms of action of flagellin as a mucosal adjuvant
Delphine Fougeron , Laurye Van Maele , Julien Tabareau and Jean-Claude Sirard
Institut Pasteur de Lille, Centre d’Infection et d’Immunité de Lille, U1019, UMR8204
Background: Vaccination is the most potent mean to prevent and/or eradicate infectious diseases. This strategy is however limited by the lack of
safe and potent adjuvant. Understanding the mode of actions of adjuvants could help to find new candidates but also new routes of
administration. Flagellin that is the agonist for Toll-Like Receptor 5 (TLR5) and NLRC4 inflammasome is currently developed as a candidate
adjuvant for vaccines. Our working hypothesis is that flagellin effect is initiated by TLR5 signaling in structural cells (like epithelial cells) that in
turn promote the production of immune mediators involved in the recruitment of antigen presenting cells and the stimulation of adaptive
immunity.
Material and Method: The adjuvant effect of flagellin was analyzed upon nasal immunization. To this aim, mice were administered with vaccines
containing various recombinant flagellins and various antigens such as ovalbumin or diphtheria toxoid. Thereafter, antibody responses were
analyzed by ELISA in the serum and the broncho-alveolar lavages. Wild type, Myd88-/-, Tlr5-/- and Nlrc4-/- animals as well as native, TLR5deficient and NLRC4-deficient flagellins were used to define the contribution of innate receptors. To characterize the tissue compartment
responding to adjuvant, flagellin-specific neutralizing antibodies were injected by systemic or nasal route prior to nasal vaccination. Fluorescent
ovalbumin and specific antibodies were used to track by flow cytometry the antigen presenting cells recruited in the lungs and draining lymph
nodes upon flagellin vaccination. Sequential administration of antigen and flagellin, immunoblot and microarray analysis were also used to
investigate the dynamic of immune processes associated to the adjuvant effect. Finally, OT-II mice (harboring ovalbumin-specific CD4 T cells)
were used to monitor the T cell response induced by flagellin.
Results: Our data showed that the adjuvant effect of flagellin by nasal route requires MyD88 and TLR5 but not in NLRC4. We hypothesized that
the mucosal adjuvant effect is related to the epithelium activation rather than a direct effect on hematopoietic cells. In fact, circulating flagellinspecific neutralizing antibodies blocked the adjuvant activity of flagellin by systemic route, but not by intranasal route. On the other hand, the
delivery of antibodies in the respiratory tract before nasal immunization abrogates adjuvant effect. In agreement, total lung microarray analysis
showed that flagellin rapidly promotes responses specific for epithelial signaling. Altogether, these experiments argue that adjuvant effect of
flagellin relies on early stimulation of respiratory epithelium. Interestingly, flagellin degradation was initiated in lungs as soon as 1 hour after
nasal vaccination. Moreover, antigen could be administered up to 6-12 hours after delivery of adjuvant, supporting that flagellin stimulation
induces a sequence of event leading to adjuvancy. In fact, flagellin stimulated the recruitment of neutrophils and monocytes into the lungs as
well as the local activation of dendritic cells. The CD11b+ subset of dendritic cells was found to carry the antigen (fluorescent ovalbumin) into the
draining lymph nodes, a process that was associated later on to proliferation of CFSE-labeled OT-II CD4.
Conclusion: Flagellin is a TLR5-dependent and NLRC4-independent mucosal adjuvant. Adjuvant activity is mediated by a rapid signaling at the
site of administration and is independent of the presence of an antigen. It is likely that flagellin acts indirectly on immune cells via the early local
TLR5 signaling in epithelial cells. We propose that the recruitment and/or the activation of monocytes and dendritic cells by epithelial mediators
is the driving force of adjuvant activity.
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MAUREL Blandine
Stéphan HAULON (U 1008 - SIEPMANN Juergen)
NOUVELLES CIBLES THERAPEUTIQUES POUR LUTTER CONTRE LA RESTENOSE INTRA-STENT ET
VALIDATION D’UN MODELE D’ETUDE IN VITRO HEMODYNAMIQUE
Blandine MAUREL, Feng CHAI, Stephan HAULON
Groupe Recherche Biomatériaux, INSERM U1008, Faculté de Médecine "H. Warembourg", 1 place de Verdun, 59045 LILLE cedex
La resténose intra-stent (RIS) est une complication majeure du traitement endovasculaire, liée à une cicatrisation excessive de la paroi
vasculaire après implantation du stent. Les stents actifs actuels permettent une réduction de la RIS, mais entrainent un risque thrombose aigue
tardive par leurs effets cytotoxiques. C’est pourquoi plusieurs équipes travaillent à l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques afin
d’élaborer un stent actif permettant la cicatrisation artérielle.
Les mécanismes précoces impliqués dans la RIS sont une agrégation plaquettaire et une réaction inflammatoire, entrainant une prolifération et
une migration des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) de la média vers la néointima.
Si le modèle animal est actuellement obligatoire, il est parfois très éloigné de l’humain. Il ne permet pas une étude satisfaisante des stents actifs
en raison de l’impossibilité d’effectuer des prélèvements réguliers et pose des problèmes éthiques. Aucun modèle hémodynamique de RIS in
vitro n’est décrit.
Le but de ce travail est d’une part l’exploration de deux nouvelles cibles thérapeutiques, l’hémine et EP224283 et d’autre part la mise au point
d’un bioréacteur pour l’étude in vitro hémodynamique de la RIS.
I. VALIDATION DU MODELE ANIMAL
Les modèles de RIS par stenting d’aorte de rat et par stenting des artères iliaques de lapins hypercholestérolémiques durant 28 jours sont
couramment décrits dans la littérature. Un travail préliminaire a consisté à maitriser ces modèles afin de pouvoir les exploiter.
II. ANALYSE DE NOUVELLES CIBLES THERAPEUTIQUES
a.UN INDUCTEUR DE L’HEME-OXYGENASE 1 : L’HEMINE
L’hème oxygénase-1 (HO-1) est une enzyme libératrice de monoxyde de carbone. Elle régule de nombreuses fonctions cellulaires antiinflammatoires et anti-prolifératives. L’hémine est un inducteur et un substrat de l’HO-1. Nous avons analysé l’effet de l’hémine, administrée par
voie intrapéritonéale, dans les modèles de RIS chez le rat et le lapin.
L’analyse histomorphométrique montre une réduction significative de formation de néointima de 30% chez le rat et de 48% chez le lapin.
L’analyse en microscopie électronique montre des cellules endothéliales sur les mailles du stent. L’analyse protéique montre une réduction des
cytokines inflammatoires et de l’activation des protéines impliquées dans la prolifération des CMLV, une augmentation des facteurs régulateurs
de la prolifération et une réduction de l’apoptose chez les rats traités par hémine[1,2].
b.UN ANTIAGREGANT : EP224283
La nouvelle molécule EP224283 possède une double activité anti-agrégante plaquettaire (anti GPIIbIIIa) et anticoagulante (antiXA). Nous avons
analysé l’effet de EP224283 administré par voie sous cutanée dans le modèle de RIS chez le rat.
L’analyse histomorphométrique montre une réduction significative de formation de néointima de 20% lors du traitement par EP224283.
L’analyse par western blot des mécanismes protéiques impliqués est en cours.
III.MODELE D’ETUDE IN-VITRO HEMODYNAMIQUE DE LA RIS
Un modèle in vitro statique de mise en culture d’artères stentées est décrit dans la littérature. Nous avons testé ce modèle, mais il est très
éloigné de la réalité et ses résultats ne sont pas exploitables.
En partenariat avec l’ENSAM Paritech, nous travaillons à la confection d’un bioréacteur[3] pour l’étude in vitro de la RIS en conditions
hémodynamiques et biologiques semblables au vivant. Il permettra de nombreux prélèvements, d’étudier plusieurs stents en même temps,
d’analyser les écoulements, de travailler avec des artères humaines (prélevées lors de dons d’organes) et donc de s’affranchir en partie du
modèle animal.
IV.PERSPECTIVES
Nos travaux futurs comprendront la mise au point de nouveaux stents actifs à l’hémine et à EP224283, ainsi que la validation du modèle de RIS
hémodynamique in vitro.
1 J Vasc Surg 2010 Feb 51(2):417-28
2 Prix de l’Académie Nationale de Médecine
3 Brevet d’invention 1G-535 cas 55 JPR
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POISSY Julien
Daniel POULAIN (U 995 éq. 02 - JOUAULT Thierry)
Glycannes fongiques circulant dans le sérum des patients de réanimation. Analyse de l’intérêt clinique et
développement de méthodes physico-chimiques de détection/caractérisation.
J.Poissy1-2, B.Sendid1-3, S.Damiens1, R.Favory1, N.François3, S.Jawhara1, N.Ghalem4, T.Jouault1, D.Mathieu2, Y.Guérardel4, D.Poulain1
1- Inserm U995-2, Lille 2, 2- CHRU, pôle de réanimation, 3- CHRU, pôle de microbiologie, 4- UGSF UMR, Lille 1
Introduction : Les levures du genre Candida sont impliquées dans 15% des infections nosocomiales en réanimation. La mortalité attribuable aux
candidémies est de plus de 40%, essentiellement en raison des difficultés diagnostiques engendrant un traitement antifongique trop tardif. Les
hémocultures ne sont positives que dans 50% des cas et de nombreux tests biologiques de détection de substances fongiques circulantes ou
d’anticorps ont été proposés pour améliorer la sensibilité et la précocité du diagnostic biologique. Le plus récent consiste en la détection
biochimique de B-glucanes (B-Glu), polysaccharides complexes constituant l’armature de la paroi chez la plupart des champignons
microscopiques.
Les premiers objectifs de notre travail sont doubles : a) déterminer l’intérêt clinique de la détection des B-Glu b) développer des méthodes
physico-chimiques de détection/caractérisation des B-glu.
Patients et méthodes : a) L’étude clinique fut de type cas-contrôle. 39 patients candidémiques ont été analysés pour la cinétique de détection
des B-glu en relation avec l’épisode candidémique. Deux groupes témoin ont été constitués : 1) 71 patients ayant bénéficié de la détermination
de leur colonisation fongique devant un épisode fébrile 2) 61 patients « à risque » pour lesquels un dosage de B-Glu a été prescrit mais pour
lesquels la candidose n’a pu être confirmée. Le dosage de B-Glu a été effectué selon une méthode biochimique (kit Fungitell®). L’antigène
mannane, autre sucre de Candida, et les anticorps anti-mannanes ont été dosés en utilisant les kits Elisa Platelia® correspondants. L’analyse
statistique a été réalisée avec les logiciels EpiInfo V3.5.3 et MedCalc (seuil de significativité pour p<0,05)
b) Nous avons exploré l’application d’une méthode physico-chimique d’extraction/purification des sucres des sérums de patients candidémiques
en vue d’une caractérisation en spectrométrie de masse (clause de confidentialité). Parallèlement nous analysons l’adéquation des signaux
avec ceux issus de traitements chimiques et enzymatiques de parois fongiques.
Résultats : a) le dosage de B-glu a une bonne sensibilité (93%) mais une faible spécificité (45%) pour le diagnostic de candidémie. Pour les
patients n’ayant pas présenté de candidémie, nous ne retrouvons pas de corrélation entre l’intensité de la colonisation et la glucanémie. Le test
est positif en moyenne 10 jours avant la candidémie. L’Ag mannane a une bonne spécificité (95%) mais une faible sensibilité (20%). L'aire sous
la courbe ROC de la glucanémie pour le diagnostic de candidémie est de 0,8. La spécificité du test devient supérieure à 90% pour une
glucanémie supérieure à 520 pg/mL. Le couplage glucanémie/mannanémie permet d'accroître la spécificité du diagnostic (98%) mais la
sensibilité (20%) est pénalisée par la mannanémie. Cette dernière décroît rapidement alors que la glucanémie peut rester élevée jusqu’à 6
semaines après la date de prélèvement de l’hémoculture positive, rendant le dosage peu utile pour le suivi du traitement antifongique.
b) Nous avons pu mettre en évidence un signal d’intérêt en spectrométrie chez les patients présentant un test Fungitell significatif. Une
demande de brevet est en cours concernant cette méthode dont nous avons montré qu’elle révèle au moins un produit de dégradation de la
paroi des Candida.
Conclusion : a) Le dosage biochimique de B-glu est un test sensible mais peu spécifique pour le diagnostic précoce des candidémies. Son
utilisation couplée avec la mannanémie pourrait permettre de rationaliser l’utilisation des antifongiques.
b) L’application de méthodes physico-chimiques de détection/caractérisation des espèces moléculaires de glycannes dérivés de la paroi
fongique et circulant chez les patients parait intéressante.
Perspectives : Nous envisageons de confirmer et d’étendre les résultats acquis dans les domaines cliniques et structuraux, puis de les
compléter d’études physiopathologiques notamment sur modèle animal.
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ENDOUGOU EFFA Anne Marie
Pierre DESREUMAUX (U 995 éq. 01 - DESREUMAUX Pierre)
ETUDE DE L’INNOCUITE ET DES PROPRIETES ANTIINFLAMMATOIRES HEPATIQUES DES EXTRAITS D’UNE
PLANTE MEDICINALE CAMEROUNAISE
A.M.ENDOUGOU EFFA1,2, E.GANTIER2, L.DUBUQUOY2, T.DIMO1, P.KAMTCHOUING1, P.DESREUMAUX2
1 Laboratoire de Physiologie Animale, Faculté des Sciences, Université de Yaoundé I, BP :812 Yaoundé-Cameroun, 2 IU 995, Faculté de
Médecine, Pôle Recherche
INTRODUCTION Au Cameroun, les hépatites sont assez fréquentes avec un taux de prévalence qui varie entre 5 et 13% environ. Le coût élevé
des médicaments manufacturés ne permet pas une prise en charge efficace des malades démunis, qui ont généralement comme seul rempart
la médecine traditionnelle. Plusieurs plantes sont ainsi utilisées en médecine traditionnelle pour traiter diverses affections du foie. Seulement,
très peu d’entre elles ont fait, l’objet d’étude scientifique pour infirmer ou confirmer leur usage traditionnel, ou pour fixer les limites d’utilisation.
Le but de notre travail est d’étudier l’efficacité de Neoboutonia velutina une plante camerounaise utilisée en médecine traditionnelle pour traiter
les hépatites.
MATERIEL ET METHODES La présente étude a été réalisée sur les cellules HepG2 et les souris C57BL / 6, pour étudier l’innocuité et les
propriétés anti-inflammatoires hépatiques des extraits (aqueux et éthanolique) de Neoboutonia velutina. Les cellules HepG2 ont été stimulées
avec du TNF / IFN puis, traitées à différentes concentrations des extraits de plante. 2, 6 et 24h après le traitement, les surnageants ont été
récupérés pour le test de cytotoxicité à la LDH. Les cellules ont été conservées dans le RA1 pour l’étude de l'expression du TNFa. L’effet des
extraits de plante sur la prolifération et l’apoptose des cellules HepG2 a également été étudié. L'hépatite aiguë a été induite chez les C57BL / 6
par injection intrapéritonéale de CCl4 (100 µl / kg). L'administration orale de l’extrait aqueux à différentes doses, a suivi immédiatement après
injection de CCl4, puis 24h après soit 4h avant le sacrifice des souris. Le sang a été prélevé pour le dosage des transaminases sériques. Le foie
a été prélevé pour l’analyse histologique et l’étude de l'expression de différentes cytokines.
RESULTATS Il ressort de cette étude, une cytotoxicité relativement faible des extraits de N. velutina et une prolifération cellulaire dans les puits
traités aux différents extraits de plante. Après 24 h, une diminution (d’environ 60%) de l'expression de TNFa, a été observée dans les puits
traités à l’extrait aqueux. Chez les C57BL / 6, l'administration orale de l'extrait a protégé les animaux de l’élévation des transaminases, IL1beta,
TNFa, IL6 provoquée par le CCl4. Enfin, aucun changement histologique n'a été observé.
CONCLUSION Ces résultats suggèrent une certaine activité antiinflammatoire hépatique de l'extrait aqueux de Neoboutonia velutina. Des
études complémentaires sont en cours.
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SESSION
POSTERS
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ABEDINI Amin
Thierry HENNEBELLE (EA 4481 - BONTE Jean-Paul)
Session Posters (13h30 - 15h00) - n°01
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF THE METHANOLIC EXTRACT OF HYPTIS ATRORUBENS (LAMIACEAE)
Amin Abedini, Laboratoire de Pharmacognosie, EA 4481, Université de Lille, 59006 Lille, France, 2Laboratoire de Bactériologi
The leaves and stems of Hyptis atrorubens Poit. (Lamiaceae) were collected in Guadeloupe. The methanol extract was tested at six
concentrations (10 mg/mL, 5 mg/mL, 2.5 mg/mL, 1.2mg/mL, 0.6 mg/mL and 0.3 mg/mL) against a panel of pathogenic Gram-positive and Gramnegative bacteria in vitro. This methanolic extract demonstrated antibacterial activity against two Gram-positive bacteria (Staphylococcus
epidermidis and Enterococcus faecalis), and two Gram-negative bacteria (Burkholderia cepacia and Stenotrophomonas maltophilia) at all of the
concentrations. Bioautography enabled the obtention and identification of two antibacterial compounds from this plant: rosmarinic acid and
methyl rosmarinate. This work supports the recognition of H. atrorubens, a traditional remedy in French West Indies, as a medicinal plant in
France
ALLISSE Maxime
Denis THEUNYNCK (EA 4110 éq. RELACS - THEUNYNCK Denis)
PAS DE RÉSUMÉ FOURNI
AMELLER Aurely
Delphine PINS (EA 4559 - BOUCART Muriel)
Covert recognition of familiar, famous and unfamiliar faces in schizophrenia.
Aurely Ameller (LNFP, Université Lille nord de France, Lille) ; Laetitia Delbos (Hôpital St Vincent, Lille) ; Anne-Laure Côte (Hôpital général,
Douai) ; Pierre Thomas (LNFP& CHRU Lille) ; Delphine Pins (LNFP).
BACKGROUND : Identify someone is a key process in social interactions. Misidentification disorders (MD) could provide a failure in social
interactions in schizophrenia. A study on MD in schizophrenia (Ellis & Young, 1997) has shed light on an affective problem (as Capras described
the syndrom in 1923) using Skin Conductance Response (SCR) to famous and unknown faces. Hence, these results suggest that the affective
response to familiar faces in front of the subject could not be match to the faces linked in memory. But this study used famous faces as familiar
one. However, in MD, patients have trouble with close familiar persons. Our aim was to design study using faces familiar to each subject in order
to better understand the physiopathology of this disorder. We postulate that patients with MD will have lower SCR as if all faces were unknown.
METHODS :We used SCR to measure affective response to neutral faces within 3 conditions: unknown, familiar (relatives to each subject) and
famous faces. Faces were presented in random order on a computer screen. The task was to indicate the gender of the face seen by pressing a
key. After the test, we presented the same pictures asking subjects to identify the faces. The identification was up to 90% for all groups. All
patients were screen with a standardised interview for MD (in absence of a valid scale) with a score (on 40) measuring the intensity of the
disorder. We run ANOVA and Spearman correlations as statistical analysis.
RESULTS : We compared results of 16 controls to 16 schizophrenia patients without MD (MD-) and 16 patients with MD (MD+). Control subjects
had higher SCR for familiar than for famous than for unknown faces as already known (Ellis & Young, 1997 ; Tranel & Damasio, 1985).
Schizophrenia patients MD- had the same profile but with lower SCR than controls (p<.05). In contrast there was a group x condition interaction
between patients MD- and MD+ (F(3)=3.929, p=0.05). Indeed, simply effects analyses showed that patients MD+ have lower SCR in familiar and
famous conditions (p<.05) as if all faces were unknown.
DISCUSSION : First, our results fit well with Ellis & Young's results on 5 schizophrenia patients with MD. Moreover, our study permits to go
further by testing bigger samples and, overall, by the add of close familiar materials. Patients MD+ have a lower SCR independently of the
polarity of the MD as it has been suggested by papers on co-occurence of hyper and hypo familiarity in the same patients (Christodoulou, 1997 ;
Lykouras et al., 2002 : Walther et al., 2010). Thus patients MD+ have low affective responses to their well known faces despite they could
consciously recognise the face presented (they have intact memory of faces). Hence all these results suggest a continuum from control subjects
to schizophrenia patients MD+, passing by schizophrenia patients MD-. These results could be understand using the two-factor hypothesis
(Hirstein, 2010): patients have an emotional trouble (i.e. the lack of affective response to faces measured by the flat SCR) that could happen to
normal subjects (daily-life false-recognitions) but schizophrenia patients have an inability to give a plausible explanation of this affective defect,
then delusion appears.
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AWAD Ali
Catherine DUEZ (U 1019 - UMR 8204 éq. 11 - TSICOPOULOS Anne)
Rôle des cellules Natural Killer dans l’asthme allergique : interaction avec les éosinophiles.
A AWAD1, M BARRIER1, P MARQUILLIES1, A TSICOPOULOS1, 2, C DUEZ1.
1CIIL, Eq Immunité Pulmonaire (INSERM U1019-CNRS UMR 8204- Univ Lille Nord de France-Institut Pasteur de Lille). 2 Clinique des maladies
respiratoires, Hôpital Calmette de Lille.
Introduction : L’asthme allergique est associé au recrutement des cellules de l’immunité innée, en particulier des éosinophiles, qui participent à
l’entretien de l’inflammation, aux dommages tissulaire et au remodelage bronchique. Les cellules Natural Killer (NK), cellules de l’immunité innée
connues pour leurs fonctions antimicrobiennes et anti-tumorales sont présentes en grand nombre dans les poumons, et leur rôle dans l’asthme
allergique est suggéré par quelques travaux.
Notre hypothèse était qu’il pourrait exister un dialogue entre les cellules NK et les éosinophiles qui modifierait leur fonctions respectives. Le but
était d’évaluer in vitro les fonctions des cellules NK sur les éosinophiles et inversement, en comparant les cellules de sujets allergiques et non
allergiques.
Méthodes : Des cellules NK et des éosinophiles provenant de donneurs allergiques ou non allergiques ont été isolés par sélection sur billes
magnétiques puis cultivés en présence d’IL-5, cytokine indispensable à la survie des éosinophiles in vitro.
Résultats : Nous avons montré que les cellules NK en présence des éosinophiles sont davantage activées (diminution de l’expression du CD62L
à la surface des cellules NK CD56low). Les cellules NK induisent l’apoptose et la mortalité des éosinophiles en coculture. L’apoptose et la
mortalité des cellules NK ne sont pas modifiées par la coculture avec les éosinophiles. Aucune différence entre les donneurs allergiques et non
allergiques n’a été mise en évidence. Un contact cellulaire est nécessaire à l’apoptose et la mortalité des éosinophiles en induisant leur
apoptose mais les mécanismes précis restent à déterminer. Les cellules NK pourraient également activer les éosinophiles (augmentation du
CD69 et diminution du CD62L sur les éosinophiles en coculture).
Conclusion : Ces résultats suggèrent que les cellules NK pourraient réguler l’inflammation à éosinophiles en induisant leur apoptose.
BAELEN Stéphanie
Vincent VILLERET (USR 3078 - VILLERET Vincent)
Système de sécrétion de type Vb : Etude structurale d’un second système de sécrétion à deux partenaires (TPS) :
HxuA/HxuB de Haemophilus influenzae
BAELEN Stéphanie, CLANTIN Bernard, DEWITTE Frédérique & VILLERET Vincent
Laboratoire de biologie structurale intégrée, Institut de Recherche Interdisciplinaire (IRI) - USR3078 CNRS, Villeneuve D'Ascq, France
Les bactéries à Gram négative ont développé divers systèmes permettant la sécrétion à travers la membrane externe. Le système de sécrétion
à deux composantes ou système TPS, un système de sécrétion de type V, est dévolu à la translocation au travers de la membrane externe de
grandes protéines (1500 à 5000 acides aminés).
Le système TPS est composé de deux protéines distinctes d’une part la protéine TpsA qui est exportée hors de la bactérie et d’autre part la
protéine membranaire TpsB qui agit en tant que transporteur spécifique.
Ces protéines sont réparties en deux sous-familles : la sous-famille de type FHA/FhaC et la sous-famille de type HMW1A/HMW1B. Trois des
quatre structures tridimensionnelles connues concernent la sous-famille de type FHA/FhaC. Il s’agit de domaines de sécrétion des TpsA, FHA30
de Bordetella pertussis et HmpA265 de Proteus mirabilis, ainsi que de l’unique structure d’un TpsB, FhaC de Bordetella pertussis. Pour la sousfamille de type HMW1A/HMW1B, la structure du domaine de sécrétion HMW1A-PP a été déterminé.
Au cours de la communication, l’étude structurale du système TPS HxuA/HxuB de Haemophilus influenzae sera présentée. Cette bactérie est
impliquée dans diverses infections humaines telles que l’otite moyenne et la méningite pour ne citer qu’elles. Un vaccin existe pour la forme
encapsulée de cette bactérie mais pas pour sa forme non encapsulée aussi appelée « non-typeable Haemophilus influenzae ». L’étude des
facteurs de virulence de ce pathogène est donc essentielle au développement des stratégies de défense ou de prévention. Le système
HxuA/HxuB est un système de virulence permettant la capture de l’hème exogène nécessaire à la croissance en aérobie de H. influenzae. La
structure du domaine de sécrétion TPS de HxuA à 1,5 Å de résolution, l’analyse comparative avec les autres structures connues ainsi que
l’obtention des premiers cristaux et du premier jeu de données de la protéine membranaire HxuB seront décrites.
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BUTRUILLE Laura
Philippe DERUELLE (EA 4489 - STORME Laurent)
Effets de l’inhibition des Rho kinases in utero sur la régulation de l’appétit.
Butruille Laura, Deruelle Philippe, Moitrot Emmanuelle, Storme Laurent, Lesage Jean.
EA 4489, Environnement Périnatal et Croissance, Faculté de médecine Pôle Recherche 5ème Est, 1 place de Verdun, 59045 Lille Cedex.
Objectif : Les molécules qui inhibent les Rho kinases (ROCK), comme le Fasudil, pourraient constituer de nouvelles thérapies pour les
pathologies cardiovasculaires et métaboliques. Les conséquences de l’exposition au Fasudil pendant la gestation demeurent inconnues. Des
études préliminaires au sein de notre équipe ont révélé qu’une inhibition des Rho kinases en fin de gestation entraînait un surpoids, une
hyperphagie et des troubles de la tolérance glucidique chez la descendance mâle. C’est pourquoi nous souhaitons étudier l’expression génique
de facteurs hypothalamiques impliqués dans la régulation de l’appétit chez des rats exposés in utero au Fasudil, un inhibiteur des Rho kinases.
Matériel et Méthodes : Les rates gestantes recevaient du sérum physiologique (groupe contrôle) ou du Fasudil (10 mg/jour) du 17ème au 21ème
jour de gestation à l’aide de pompes osmotiques insérées en sous-cutané. La masse corporelle, la prise alimentaire, le taux de leptine
plasmatique ainsi que l’expression génique de peptides hypothalamiques de la descendance mâle ont été étudiés.
Résultats : Les ratons Fasudil présentaient un surpoids (90,4 ± 1,7 g vs 97,2 ± 6,7 g, P<0,05), un trouble de la prise alimentaire diurne (4,78 ±
0,12 g/100 g d’animal vs 4,05 ± 0,10 g/100g d’animal pour le groupe Fasudil, P<0,001) et une quantité de tissu adipeux brun réduite (322 ± 18
mg vs 269 ± 20 mg, P<0,05) à l’âge de 30 jours.
Conclusion : L’exposition a un traitement maternel par Fasudil entraîne chez la descendance des altérations métaboliques pouvant supposer
une implication de la voie des Rho kinases dans la mise en place de système de régulation de l’homéostasie énergétique au cours de fenêtres
critiques de développement tels que la croissance in utero.
CALAIS F-Gauthier
Florence PASQUIER (EA 1046 - BORDET Régis)
Évolution de la prévalence et de l'impact des facteurs de risque vasculaire sur l'évolution de la maladie d'Alzheimer à 8
ans d'intervalle
Gauthier Calais, Vincent Deramecourt, Florence Pasquier
Introduction : Les facteurs de risque vasculaire sont également des facteurs de risque de maladie d'Alzheimer. La question de l'importance du
dépistage en vue d’un traitement optimum de ces facteurs de risque pourrait se poser chez les patients souffrant de démence. Nous nous
sommes intéressés ici à l'évolution de leur prévalence chez les patients atteints de la maladie d'Alzheimer suivis au Centre Mémoire de
Ressources et de Recherche de Lille.
Patients et méthode : Nous avons étudié, à partir des données collectées prospectivement et selon les mêmes critères, la prévalence des
facteurs de risque vasculaire (HTA, diabète, hypercholestérolémie), chez les patients présentant une maladie d'Alzheimer probable ou certaine,
avec ou sans lésions cérébro-vasculaires discrètes en imagerie, en comparant les patients consultant la première fois entre 1995 et 2001, et
ceux consultant la première fois entre 2003 et 2009. Nous avons comparé également la pente de déclin du MMSE dans ces 2 groupes.
Résultats : Ont été inclus 861 patients sur la période 1995-2001 et 837 sur la période 2003-2009. Le MMS moyen à l'inclusion était de 20,6 (5,7)
sur la première période et de 21,9 (4,3) sur la 2ème période (p<0,001). Les facteurs de risque vasculaire étaient plus fréquents chez les patients
consultant dans la période la plus récente : 36,4 % vs 65,1 % pour l'HTA (p<0,001), 11 % versus 16 % pour le diabète (p<0,01), 11,3 versus
43,4 % pour l'hypercholestérolémie (p<0,001). Au cours du suivi (en moyenne de 3 années), la pente annuelle de déclin du MMSE était de 1,90
point dans la cohorte la plus ancienne versus 1,97 point dans la cohorte la plus récente, la différence n'étant pas statistiquement significative.
Discussion : Cette étude montre un meilleur score du MMSE moyen au moment de la première consultation dans la cohorte la plus récente, et
un pourcentage de facteur de risque vasculaire plus important. En première analyse, le déclin annuel n’est pas significativement différent au
cours du temps.
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CANIVET Ludivine
Régis COURTECUISSE (EA 4483 - BROLY Franck)
Caractérisation de l’écotoxicité des particules ultra-fines métalliques et de leur réactivité biologique chez les bryophytes
et au niveau de cellules pulmonaires humaines
Ludivine CANIVET2, Franck-Olivier DENAYER2, Jean-Marc LO-GUIDICE2, Régis COURTECUISSE1
1 EA 4481 – Groupe de Recherche Interdisciplinaire Innovation et Optimisation Thérapeutique ; 2 EA 4483 – Impacts de l’Environnement
Chimique sur la Santé Humaine
Dans l’ensemble des pays industrialisés, nous assistons à un essor considérable des nanosciences et nanotechnologies. Une des questions
régulièrement posée est : « Quels sont les effets des nanoparticules sur les écosystèmes et la santé humaine ? ». La « nanotoxicité » est un
concept émergent (Nel et al., 2006; Nowack & Bucheli, 2007), tout comme la « Plant nanotoxicology » est une discipline récente qui étudie les
effets de toxicité des nanoparticules chez les plantes (Dietz & Herth, 2011). L’objectif principal de nos recherches est d’étudier les effets
cytotoxiques, génotoxiques et la modulation de l’expression de gènes induits par une exposition atmosphérique de Physcomitrella patens
(bryophyte) et de cellules pulmonaires humaines aux nanoparticules de fer. Avant d’étudier les effets des nanoparticules sur nos modèles, la
caractérisation physico-chimique et surfacique de nos nanoparticules a été indispensable. Nous avons réalisé une caractérisation précise (8
paramètres) en suivant les recommandations de Card et Magnuson (2010). Parallèlement, la culture de Physcomitrella patens a été
développée. En collaboration avec le Dr Lo-Guidice, nous avons développé une méthode de culture primaire de cellules épithéliales
bronchiques humaines (HBEC) en interface air-liquide, permettant une différentiation des cellules basales en cellules ciliées et caliciformes.
Puis, une étude sur la pénétration des nanoparticules au sein des cellules de nos modèles s’est révélée être indispensable. Pour Physcomitrella
patens, nous avons développé une méthode d’observation en microscopie confocale à fluorescence. Pour cela, nous avons nous utilisé
l’autofluorescence des plantes, la technique de Nomarski (González-Melendi et al., 2008) et le phénomène d’agglomération des nanoparticules.
Cette étude au niveau des HBEC a nécessité l’utilisation de la microscopie électronique à transmission (MET). Une exposition de Physcomitrella
patens aux nanoparticules de fer en conditions contrôlées, à des doses croissantes (5ng/plant à 50μg/plant), nous a permis de confirmer leur
pénétration cellulaire après 3 jours d’exposition. Cette pénétration reste observable après 7, 14 et 21 jours d’exposition. Suite à une exposition
par la voie apicale des HBEC, nous avons également pu vérifier la pénétration cellulaire de nos nanoparticules. Cette technique a aussi été
développée pour confirmer leur pénétration au sein des cellules de Physcomitrella patens. Cependant, une validation doit être apportée par
l’utilisation d’un MET/EDX pour certifier la nature chimique des nanoparticules au niveau cellulaire. Enfin, nous nous intéressons aux effets
cytotoxiques, génotoxiques, et à la modulation de l’expression de certains gènes impliquées dans le stress oxydant, la réparation de l’ADN, la
détoxification des xénobiotiques que pourraient induire une exposition environnementale aux nanoparticules. Nous avons donc dû développer
des méthodes de dosages de biomarqueurs (espèces réactives de l’oxygène, glutathion,…) et la méthode de PCR en temps réel pour l’étude de
la modulation de l’expression génique.
Références :
CARD J.W. & MAGNUSON B.A., 2010. A Method to assess the quality of studies that examine the toxicity of engineered nanomaterials. International Journal of
Toxicology, 29(4), 402-410
DIETZ K.J. & HERTH S., 2011. Plant nanotoxicology. Trends in Plant Science, 16(11), 582-589
GONZALES-MELENDI P., FERNANDEZ-PACHECO R., CORO- NADO M. J, CORREDOR E., TESTILLANO P.S., RISUENO M. C., MARQUINA C., IBARRA M.
R., RUBIALES D. & PEREZDE-LUQUE A., 2008. Nanoparticles as smart treatment-delivery systems in plants: assessment of different techniques of microscopy
for their visualization in plant tissues. Annals of Botany, 101, 187-195
NEL A., XIA T., MADLER L. & LI N., 2006, Toxic potential of materials at the nanolevel. Science, 311, 622–627
NOWACK B., BUCHELI T. D., 2007. Occurrence, behavior and effects of nanoparticles in the environment. Environmental. Pollution, 150, 5–22
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CARPENTIER Céline
Marie-Laure CAILLET (U 837 éq. 01 - BUEE Luc)
Rôle des facteurs trans régulateurs des familles CELF, MBNL et SR sur l’épissage alternatif de Tau normal ou dans le
contexte de la dystrophie myotonique de type 1.
Carpentier C. 1,2,3, Dhaenens C-M.1,2,3, Labudeck A.1,2,3, Buée L.1,2, Sergeant N.1,2,3, Caillet-Boudin M-L.1,2,3
1.Inserm, U837-1, Alzheimer & Tauopathies, Lille, France; 2. Univ. Lille Nord de France, Lille, France; 3. Univ. Lille 2, IMPRT, JPARC.
Introduction :
Tau est une protéine de liaison aux microtubules exprimée dans le cerveau humain sous 6 isoformes résultant de l’épissage alternatif des exons
2, 3 et 10. Un changement d’épissage de Tau direct ou indirect est associé à la dégénerescence neurofibrillaire dans la FTDP-17 et la
Dystrophie Myotonique de type 1 (DM1) respectivement. La DM1 est une maladie héréditaire multisystémique caractérisée par une répétition de
triplets CTG instable menant aux défauts d’épissages de plusieurs transcrits. En effet, dans la DM1, l’inclusion des exons 2,3 et 10 de Tau est
réprimée favorisant l’expression de l’isoforme la plus courte, observée dans le cerveau humain fœtal. Cependant, les mécanismes menant à ce
défaut d’épissage de Tau restent inconnus. Notre objectif était donc d’identifier les facteurs trans régulateurs impliqués dans l’épissage normal
de Tau ainsi que ceux impliqués dans le défaut d’épissage de Tau dans la DM1. Ainsi, trois familles de facteurs d’épissage ont été étudiées.
Tout d’abord, le rôle de deux familles d’épissage ayant un rôlé important dans le muscle et le cœur DM1 : familles CELF et MBNL a été analysé.
Enfin, les protéines de la famille SR, connues pour être impliquées dans l’épissage normal de Tau ont été étudiées.
Matériel et Méthodes : Les facteurs d'épissage et la mutation DM1 (plasmide exprimant 960 répétitions CTG) ont été sur-exprimés dans des
cellules T98 (glioblastome humain) par transfection transitoire. L'épissage de l'exon 2 de Tau endogène a été analysé par RT-PCR.
Résultats : Parmi les familles CELF et MBNL, 4 CELF (CELF2,3,4,6) et 2 MBNL (MBNL2 et 3) favorisent l’exclusion de l’exon 2. Ces données
suggèrent leur implication possible dans le défaut d’épissage de Tau dans la DM1. Parmi les facteurs testés, CELF4 était le seul à accentuer
l'effet de la mutation DM1 sur l’ épissage de Tau. De façon intéressante, CELF5, MBNL2 et 3 ainsi que plusieurs protéines SR restaurent un
épissage normal de Tau en présence des CTG960, comparable à celui de la condition contrôle.
Conlusions : Cette étude nous a permis d'identifier des facteurs agissant comme des répresseurs sur l’exon 2 et d’autres capables de moduler
voire d’inhiber l'effet de la mutation DM1 sur l'épissage de Tau. L’étape suivante de notre étude servira à préciser les mécanismes d'action de
ces facteurs en utilisant des minigènes de Tau en identifiant les séquences cis régulatrices ciblées par ces facteurs
CENCI Ugo Pierre
Steven BALL (UMR 8576 éq. 03 - BALL Steven)
Toward an understanding of starch biosynthesis in cyanobacteria
Ugo Cenci1, Malika Chabi1, Amandine Durand-Terrasson2, Catherine Tirtiaux1, Xavier Roussel1, Emmanuel Maes1, Anne Sophie VercoutterEdouart1, Colleoni Christophe1 et Steven Ball1
1 UMR8576, 59655 Villeneuve d’Ascq, 2 CERMAV-CNRS Grenoble
Starch and glycogen define the most widespread forms of storage polysaccharides found in living cells. Although they both consist of a-1,4
linked and a-1,6 branched polysaccharides they display widely different physico-chemical properties that result from the way the a-1,6 branches
distribute. Indeed the asymmetric distribution of branches in amylopectin results in a clustered structure where the densely packed chains
intertwine to form semi-crystalline structures. Starch is mainly found in Plantae and seemingly appears in eukaryotes following plastid
endosymbiosis which occurred only once 1.5 billions years ago, when a heterotrophic eukaryotic cell engulfed a cyanobacterial ancestor.
Indeed, a particular subgroup of unicellular marine diazotrophic cyanbobacteria has been recently reported to produce semi-crystalline starchlike polysaccharides instead of glycogen (Nakamura et al. 2005). One such cyanobacterial strain (Clg1) synthesizes a semi-crystalline
polysacccharide composed of plant-like amylopectin and amylose fractions (Deschamps et al 2008). At first, this discovery seems to suggest
that the whole starch metabolism network of the cyanobiont was transferred to the host during primary endosymbiosis. However, only two
enzymes, GBSS and ADP-glucose pyrophosphorylase, out of total of over 30, display a clear-cut cyanobacterial phylogeny. GBSS and ADPglucose pyrophosphorylase catalyse the formation of amylose and ADP-glucose respectively. Surprisingly, the isoamylase type debranching
responsible for generating the asymmetric distribution of branches leading to amylopectin crystallization (Mouille et al. 1996) was not transferred
to the host cell. In order to understand the origin of crystallinity in the bacterial polysaccharides, we carried out a large scale UV mutagenesis on
the clg1 cyanobacterial strain. Several phenotype classes (A to E) of mutants could be distinguished by their amounts of soluble and insoluble
storage material. Among them, class A mutants substitute starch biosynthesis by that of glycogen like polysaccharides. Interestingly, this
phenotype could be correlated with a missing debranching enzyme activity. Further investigations are in progress to understand the function of
this activity in the amylopectin crystallization
CHOUFI Bachra
Ibrahim YAKOUB-AGHA (EA 2686 - PRIN Lionel)
PAS DE RÉSUMÉ FOURNI
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COURJOL Flavie
Daniel POULAIN (U 995 éq. 02 - JOUAULT Thierry)
Role of the different cell wall β-1,2 mannosylated glycoconjugates in Candida albicans virulence
Flavie Courjol, Samir Jawhara, Rebecca Hall, Annick Masset, Thierry Jouault, Neil Gow, Daniel Poulain, Chantal Fradin
Equipe "Régulation de l'interface glycannique Candida-hôte" Université Lille2-Faculté de Médecine, Pôle recherche 59045 Lille
β-1,2 oligomannosides (β-1,2 Mans) belong to the vast oligomannose repertoire of Candida albicans cell wall phosphopeptidomannan (PPM),
phospholipomannan (PLM) and mannoproteins (MPs). β-1,2 Mans contribute to C. albicans virulence by acting as adhesins and
immunomodulators. Different studies have shown that β-1,2 Mans expression is heterogeneous at the cell surface and biological activities of
these oligomannosides depend on their polymerization degrees and on the conjugate they are associated to. C. albicans has 9 β-1,2
mannosyltransferases (Bmts) responsible of substrate and step of β-1,2 mannosylation specificity. The main goal of my PhD thesis is to analyze
how β-1,2 Mans expression on the different glycoconjugates is regulated and how it is important for C. albicans virulence.
We analyzed the expression of the Bmts encoding genes (Northern blot and real time RT-PCR analyses) and the detection of β-1,2 Mans
epitopes on C. albicans glycoconjugates (Western blot analyses). We focused first on Bmts responsible for adding the first β-Man on PPM acid
stable (Bmt1) and labile (Bmt2) fractions and PLM (Bmt5). We started to generate bmtsΔ mutants by the yeast URA blaster method to further
analyze Bmts specificity and to determine the respective role of β-1,2 mannosylated glycoconjugates in C. albicans virulence.
Results have first evidenced the existence of a transcriptional regulation process controlling the amount of β-1,2 Mans in the cell wall. β-1,2
Mans expression seems very complex and under the control of different regulation mechanisms. PLM and PPM β-1,2 mannosylation and their
regulation are distinct but differences are also observed between the 2 fractions (labile vs stable) of PPM. We have obtained a set of strains
expressing β-1,2 Mans only on specific glycoconjugates. Phenotype analysis of these mutants could already highlight compensatory activities
between two Bmts. We evidenced a very weak β-1,2 mannosylation of PLM when bmt5Δ mutant was grown at 37 C, suggesting that another
Bmt may partially fulfill the defect of BMT5 deletion. This was more evident when cells were grown at 28 C as bmt5Δ PLM was almost equally β1,2 mannosylated as wild type PLM. This last observation led us to study possible compensatory mechanisms between Bmt2 and Bmt5 that
have the same acceptor, a phosphomannose, on two different substrates (PPM and PLM) and that share sequence homologies. Analyses of
bmt2bmt5Δ PLM β-1,2 mannosylation confirms that Bmt2 takes over Bmt5 activity in bmt5Δ.
Up to now, this study places emphasis on the complex regulation of β-1,2 Mans expression in C. albicans cell wall. It also shows that
transcriptional analysis of genes coding for Bmts gives insight into the respective contribution of glycoconjugates and their glycan moieties into
the global expression of β-1,2 Mans in the cell wall. Furthermore, we could highlight compensatory activities between two Bmts. We are currently
disrupting 3 BMTs to generate a strain without β-1,2 Mans. Virulence attributes of these mutants will be evaluated in different murine infection
models.
DA COSTA DE MATOS Anaelle
Roméo CECCHELLI (EA 2465 - CECCHELLI Roméo)
Drug induced neurotoxicity assessment using an in vitro blood-brain barrier model
da Costa A., Aijjou, R., Hachani J., Landry C., Cecchelli R. and Culot M.
Univ Lille Nord de France, F59000 Lille, France, UArtois, BBB laboratory, EA 2465, F62300 Lens, France
Neurotoxicity assessment of drugs and chemicals is required by many regulatory programs. Since neurotoxicity is related to the concentration of
compounds reaching CNS cells, the properties of the blood-brain barrier (BBB), which is the main entry route for molecules into the CNS, have
to be considered. Indeed, the BBB possesses both structural and enzymatic components at the level of the cerebral capillaries that have to be
taken into account to predict CNS exposure.
Our in vitro BBB model, consisting in a coculture of bovine brain capillary endothelial cells cultivated with rat glial cells, could be used to predict
CNS exposure. In addition, assessing BBB toxicity of drugs is equally important as a dysfunctional BBB may cause unwanted effect on brain
cells either by affecting brain entry of an agent or by generating unwanted effects on neurons.
By culturing our brain endothelial cells in presence of glia, it has been possible to maintain their BBB phenotype for at least 2 weeks which
enable to assess the effect of repeated dose treatment at the BBB level. Studies undertaken within the framework of the European program
Predict IV indicate that repeated dose exposure of the BBB to drugs at concentration which were not toxic following acute exposure (1h) could
affect the integrity of the BBB. For instance, the concentration of colchicine, a potent anti-inflammatory agent, found toxic at the BBB following
repeated dose treatment is one thousand fold lower than the one for acute toxicity. These results highlight the importance of BBB toxicity
evaluation in repeated dose neurotoxicity testing in vitro.
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DELMONT Anne
Jean-Claude MICHALSKI (UMR 8576 éq. 01 - GUERARDEL Yann)
Inhibiteurs du catabolisme de la paroi mycobactérienne
Anne DELMONT, Jean-Claude MICHALSKI
Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle, UMR 8576 CNRS, IFR 147, USTL, Villeneuve d’Ascq, France.
La tuberculose, causée par Mycobacterium tuberculosis, est une des plus sérieuses maladies infectieuses dans le monde, provoquant près de
deux millions de décès chaque année et affectant environ 14 millions d’individus. De nos jours, elle touche principalement les pays en voie de
développement et l’Organisation Mondiale de la Santé estime au niveau mondial à près de 9,4 millions le nombre de nouveaux cas de
tuberculose par an. L’émergence de souches multi-résistantes (MDR-TB) et ultrarésistantes (XDR-TB) nécessite le développement de nouveaux
antituberculeux.
Notre laboratoire s’intéresse depuis plusieurs années aux effets de la thiacétazone (TAC), drogue antituberculeuse de seconde ligne, sur la
paroi des mycobactéries. En raison de son faible coût de production, la TAC a été largement utilisée dans les pays en voie de développement.
Néanmoins, cette drogue provoque de nombreux effets secondaires qui peuvent conduire au décès du patient traité. Son utilisation est donc
prohibée dans certains pays et fortement déconseillée par la communauté scientifique. Aujourd’hui, la TAC est administrée en combinaison
avec un autre antituberculeux, l’isoniazide, pour soigner les patients atteints par des formes de tuberculose multi-résistantes (MDR).
Le but de nos travaux est de comprendre la principale cible mycobactérienne de la TAC et de ses métabolites de manière à pouvoir, à terme,
développer des analogues plus efficaces contre les mycobactéries et surtout moins toxiques pour l’Homme.
Nous avons d’ores et déjà démontré que la TAC est une prodrogue bioactivée par la flavine monooxygénase EthA et par la méthyltransférase
des acides mycoliques MmaA4. Une fois activée par EthA, la TAC inhibe la cyclopropanation des acides mycoliques chez Mycobacterium spp.
Néanmoins, la protéine MmaA4 semble requise pour activer la TAC en un composé bactéricide dont la cible moléculaire est inconnue.
Récemment, il a été démontré chez M. bovis BCG que la TAC inhibait également la biosynthèse des glycolipides extractibles apolaires, en
particulier le di-arabino di-mycolyl glycérol (DADM).
La volonté d’élucider le mécanisme d’action des antituberculeux de type thiosemicarbazone (TSC) telle que la TAC, nous a amenés à
développer un vaste panel d’analogues de la TAC qui permettront le suivi de cette drogue in vivo et in vitro. De plus, l’effet des différents
analogues sur Mycobacterium bovis BCG est étudié et les métabolites in vitro sont en cours d'identification et de caractérisation par RMN,
HPLC/UV et MS.
Ce travail devrait permettre une meilleure compréhension du mécanisme d'action de la TAC et par la suite le développement de nouveaux
médicaments antituberculeux.
DESURMONT Thibault
Stéphanie TRUANT (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
Expression des chimiokines et de leurs récepteurs en réponse aux chimiothérapies et au Bevacizumab: rôle dans la
résistance du cancer colo-rectal métastatique.
Desurmont Thibault
INSERM U837, eq-5 « Mucines, différenciation épithéliale et carcinogénèse » et Faculté de Médecine, Jean-Pierre Aubert Research Center,
Université Lille 2, Lille, France.
Introduction: La chimiorésistance en cas de cancer colo-rectal (CCR) métastatique est un problème thérapeutique majeur. Ici nous étudions le
rôle des récepteurs de chimiokines CXCR2 et CXCR4 ainsi que de leurs ligands (CXCL1, CXCL7, CXCL8) en ce qui concerne la résistance aux
chimiothérapies et à la thérapie ciblée bevacizumab (anticorps monoclonal dirigé contre Vascular Endothelial Growth Factor) des CCR
métastatiques.
Méthodes: L’expression des chimiokines et de leurs récepteurs CXCR2 et CXCR4, au sein de prélèvements de métastases hépatiques de CCR
de patients a été analysée par quantification du niveau d’ARNm en RT-QPCR. Cinquante-huit patients ont été inclus dans l’étude. Parmi eux 34
ont bénéficiés d’une chimiothérapie néoadjuvante à l’hépatectomie (Folfox, Capecitabine, Folfiri ou Folfiri-Bevacizumab). Une analyse
comparative du niveau d’expression des chimiokines et des récepteurs de chimiokines a été réalisée en fonction du protocole de chimiothérapie.
La corrélation entre résultats de RT-QPCR et survie a été analysée. Ces résultats ont été complétés par une analyse en immuno-histochimie de
CXCR2, et des ligands CXCL7 et CXCL8, réalisés sur 10 prélèvements de métastases hépatiques de patients soumis ou non à une
chimiothérapie néoadjuvante.
Résultats: La chimiothérapie néoadjuvante (Folfiri ou Folfiri-Bevacizumab) est associée avec une augmentation d’expression de CXCR2 et
CXCL7 en comparaison aux patients non traités (p=0.034 et p=0.048). En cas de chimiothérapie néoadjuvante, le Bevacizumab augmente
l’expression de CXCR2 (p=0.029). Une expression majeure de CXCR2 est corrélée avec une plus faible survie sans récidive et une plus faible
survie globale (p=0.015 et p=0.025). Une hyperexpression de CXCL7 et de CXCL8 est associé avec de plus mauvaise survie sans récidive et
survie globale (p=0,018 et p=0,001; p=0,039 et p=0,001, respectivement). Les premiers résultats de l’analyse en immuno-histochimie montrent
une faible fixation de CXCR2 sur les cellules endothéliales.
Conclusion: Les premiers résultats sont compatibles avec une association entre administration de Bevacizumab et une élévation de l’expression
de CXCR2. L’expression de CXCR2 pourrait être impliquée dans la résistance des chimiothérapies et des thérapies ciblées anti-VEGF et
associée avec de moins bons pronostics de survie.
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DO Minh Phuong
Florence SIEPMANN (U 1008 - SIEPMANN Juergen)
CONTROLLED RELEASE PLGA BASED IN SITU-FORMING IMPLANT FOR THE TREATMENT OF PERIODONTITIS
WITH IMPROVED BIOADHESIVE PROPERTIES
M.P. Do,1 C. Neut,2 E. Machado-Ribeiro,1 F. Boschin,3 E. Delcourt-Debruyne,3 J. Siepmann,1F. Siepmann1;Univ. Lille Nord de France 1
College of Pharmacy, INSERM U1008,2 College of Pharmacy, INSERM U995, 3 School of Dentistry, INSERM U1008
INTRODUCTION : Periodontitis is a highly prevalent, chronic immuno-inflammatory disease of the periodontium, leading to progressive loss of
gingival tissue, periodontal ligament and adjacent alveolar bone. Its treatment is challenging, since drug partitioning into the pockets formed
between the teeth is generally not very pronounced. Thus, using conventional administration routes often high systemic drug levels result,
whereas the drug concentration at the target site remains low. These restrictions can be overcome by injecting liquid formulations (using
standard syringes and needles) into the pockets between the teeth. Upon contact with the aqueous environment, solvent exchange takes place,
resulting in the in-situ formation of implants in the dental pockets, customized to each patient’s anatomy [1,2]. The solidified implants can
effectively control drug release at the site of action during prolonged periods of time. However, the risk of implant expulsion from the pockets can
be considerable and yet little is known on how to easily adjust desired drug release kinetics.
PURPOSE :The major aim of this work was to develop new biodegradable, in situ-forming implants for the treatment of periodontitis: (i) with
improved bioadhesive and mechanical properties and (ii) allowing for controlled drug release within the periodontal pocket.
EXPERIMENTAL METHODS :Poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA, Resomer RG 502H or 504H), drug (doxycycline hyclate, minocycline
hydrochloride dihydrate or metronidazole) and optionally acetyltributyl citrate (ATBC), dibutyl sebacate (DBS) and/or hydroxypropyl
methylcellulose (HPMC - Methocel E5/E50) were dissolved in N-methyl pyrrolidone (NMP). The commercial product ParoclineÊ was studied for
reasons of comparison. Upon injection into Eppendorf vials filled with phosphate buffer pH 7.4 (37 C) the implants formed in-situ. Drug release
was monitored UV spectrophotometrically. Implant adhesion and elasticity were measured using a texture analyzer.
RESULTS :The adhesion force of PLGA-based situ forming implants was significantly higher than the marketed product Parocline, irrespective
of the HMPC content (0.50 versus 0.15N after 24 h in the case of implants containing initially 20% HPMC E50 versus Parocline). An increase in
HPMC content and molecular weight significantly enhanced the bioadhesive properties of the implants (0.35 versus 0.50N after 24 h in the case
of implants containing initially 0 versus 20 % HPMC E50). Interestingly, the resulting drug release kinetics could also be adjusted by simply
varying the bioadhesive polymer molecular weight and amount (10 to 30% w/w), irrespective of the type of drug. The release rate of doxycycline
from in-situ implant was higher in the case of formulations containing Methocel E50 (high MW) compared to Methocel E5 (low MW). This might
be attributed to a faster precipitation of the implants in contact with the release medium, resulting in more porous systems and thus higher
release rates. The lower swelling of the implants further confirmed this hypothesis. Furthermore, the use of PLGA of different molecular weight is
as well a very interesting tool to adjust the release kinetics but also the bioadhesion. Higher PLGA molecular weights resulted in lower release
rates and higher adhesion forces. For example 70.6% versus 50.4% metronidazole was released after 24h in the case of PLGA RG 502H versus
PLGA RG 504H (containing 20% HPMC E50). The monitoring of the change in implant mass during drug release clearly indicated that PLGA
RG504H-based implants absorbed less water and thus swelled less than PLGA RG502H (e.g. 104 versus 154% after 72h for implants
containing 20% HPMC E50). The negligible swelling of the investigated formulations compared to Parocline is very encouraging as device
swelling within the parodontal pocket is highly undesirable and might lead to premature implant expulsion.
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DONNIER-MARECHAL Marion
Patricia MELNYK (EA 4481 - BONTE Jean-Paul)
SYNTHÈSE ET ÉVALUATION PHARMACOLOGIQUE DE NOUVEAUX LIGANDS DE LA PROTÉINE SIGMA-1 POUR
LE TRAITEMENT DE LA SCLÉROSE EN PLAQUE
Marion Donnier-Maréchal1,2, Pascal Carato1,2, Bénédicte Vanteghem-Oxombre1,3, Patrick Vermersch 1,3, Patricia Melnyk 1,2
1 Université Lille Nord de France, Lille, France, 2 EA 4481, UFR Pharmacie, Lille, France, 3 EA 2686, UFR Médecine, Lille, France
La sclérose en plaque (SEP) est une des maladies les plus courantes du système nerveux central et touche plus de 2,5 millions de personnes à
travers le monde. Cette maladie auto-immune complexe et hétérogène est caractérisée par l’existence de lésions multiples démyélinisantes
disséminées dans le cerveau et la moelle épinière. Diagnostiquée essentiellement entre 20 et 40 ans, la SEP est la première cause de handicap
non traumatique chez les jeunes. C’est dans ce contexte que notre intérêt s’est porté sur la validation de nouveaux ligands de la protéine σ1
pour le traitement de la SEP.
Les récepteurs σ1 correspondent à une classe unique de récepteurs transmembranaires du réticulum endoplasmique. Exprimés dans le
système nerveux central et plus particulièrement dans les neurones et les oligodendrocytes, ces récepteurs sont connus pour être impliqués
dans la régulation de nombreux neurotransmetteurs.
Les dérivés substitués d’hydantoïnes ont largement été utilisés dans des criblages biologiques et les dérivés Tic-hydantoïnes conçus au
laboratoire ont montré des affinités intéressantes envers la protéine σ1. En effet, lors d’un criblage, le composé 1 s’est révélé être un ligand du
récepteur σ1 de cochon d’Inde avec une IC50 de 16 nM. L’affinité de ce composé peut s’expliquer par la présence d’éléments
pharmacophoriques σ1 reconnus tel que l’association d’un atome d’azote et d’une partie aromatique.[1] Dans cette famille, de nombreux
composés ont été synthétisés. Actuellement, nos meilleurs ligands ont montré une bonne sélectivité vis-à-vis de σ2, une faible cytotoxicité et
des propriétés ADME compatibles avec un développement thérapeutique.[2] Évalués dans un modèle EAE, ils ont conduit au développement
d’une pathologie moins sévère. Ces résultats prometteurs pourraient s’expliquer par une activité anti-inflammatoire associée à une action
neuroprotectrice de nos ligands. La synthèse des ligands ainsi que les résultats biologiques seront présentés.
Bibliographie:
[1] Ablordeppey, S. Y. et al. Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2105.
[2] Charton, J. et al Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 4833. Cazenave Gassiot, A.et al Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 4828.
EL HAGE Zaher
Denis THEUNYNCK (EA 4110 éq. RELACS - THEUNYNCK Denis)
Différence inter-sexe au niveau de la relation entre l’indice de masse grasse et la densité minérale osseuse de la
hanche chez un groupe d’adolescents et de jeunes adultes Libanais
Zaher El Hage 1, 2, Rania Elias 1, Denis Theunynck 2, Rawad El Hage 1, 2
1 Laboratoire de physiologie et de biomécanique de la performance motrice, Université de Balamand, Al Koura, Liban. 2 EA 4110, Laboratoire
RELACS, Département STAPS, ULCO, FR.
OBJECTIF : Le but de cette étude était de voir si le sexe influence la relation entre l’indice de masse grasse et la densité minérale osseuse
(DMO) de la hanche chez un groupe d’adolescents et de jeunes adultes Libanais.
METHODES ET RESULTATS : 91 sujets de sexe féminin et 111 sujets de sexe masculin (âgés de 13 à 30 ans) ont participé à cette étude. La
composition corporelle (la masse maigre, la masse grasse et le contenu minéral osseux) et la DMO au niveau du corps entier, de la hanche
totale et du col fémoral ont été ont été évaluées par absorptiométrie biphotonique à rayons-X (DXA). Le poids et la taille ont été mesurés et
l’indice de masse corporelle (IMC), l’indice de masse maigre (IMM) et l’indice de masse grasse (IMG) ont été calculés. Le poids corporel, l’IMC,
la masse maigre et l’IMM étaient positivement corrélés à la DMO de la hanche totale et à la DMO du col fémoral dans les deux sexes. La masse
grasse et l’IMG étaient positivement corrélés à la DMO de la hanche totale et à la DMO du col fémoral chez les sujets de sexe féminin mais pas
chez les sujets de sexe masculin.
CONCLUSION : Cette étude suggère que l’indice de masse grasse est un déterminant positif de la DMO de la hanche totale et de la DMO du
col fémoral chez les adolescentes et les jeunes femmes mais pas chez les adolescents de sexe masculin et les jeunes hommes alors que
l’indice de masse maigre est un déterminant positif de la DMO de la hanche totale et de la DMO du col fémoral dans les deux sexes.
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ESCOBAR Adelma
Annick PIERCE (UMR 8576 éq. 09 - MICHALSKI Jean-Claude)
A crosstalk between O-GlcNAcylation, phosphorylation, ubiquitination and SUMOylation controls the transcriptional
activity of delta-lactoferrin
Adelma Escobar, Isabelle Huvent, Esthelle Hoedt, Christophe Mariller and Annick Pierce
Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle, UMR 8576 CNRS-Université des Sciences et Technologies de Lille, IFR 148, 59655
Villeneuve d'Ascq, France
Deltalactoferrin (ΔLf) is a transcription factor the expression of which is downregulated in cancer. It is a healthy tissue marker and a high
expression level of its transcripts was correlated with a good prognosis in breast cancer. ΔLf results from alternative promoter usage. Alternative
lactoferrin gene promoter usage leads to the production of two isoforms with alternative N-termini: lactoferrin, which is secreted, and ΔLf, its
nucleocytoplasmic counterpart. ΔLf possesses anti-proliferative effects and induces cell cycle arrest. It is an efficient transcription factor
interacting in vivo via a ΔLf response element found in the Skp1, Bax, DcpS and SelH promoters. Since ΔLf possesses different target genes,
modifications in its activity or concentration may have crucial incidences on cell homeostasis. Posttranslational modifications efficiently modulate
transcription factor activity. Our earlier investigations showed that O-GlcNAcylation negatively regulates ΔLf transcriptional activity while it
inhibits its ubiquitination and increases its half-live. On the other hand, phosphorylation activates ΔLf transcriptional activity.
Recently we showed that ΔLf is also modified by SUMOylation. SUMO stands for “Small Ubiquitin-like MOdifier” is an Ub family member.
SUMOylation is a widespread mechanism for rapid and reversible changes in protein function. SUMOylation targets mainly nuclear factors and
regulates numerous cellular processes such as nuclear transport, transcriptional activity and DNA repair. In most cases SUMOylation triggers
transcriptional repression. We screened ΔLf primary structure for the presence of SUMO sites and four putative SUMO consensus sequences
(SCIK13RDSP, NLRK308SEE, LVLK361GEA, ENYK391SQQ) were found. We are currently mapping the SUMO sites and studying the role of
SUMOylation on ΔLf transcriptional activity and stability. Our preliminary results showed that the four sites are SUMOylated and invalidation of
the four SUMO sites leads to an increased transcriptional activity suggesting that SUMOylation represses ΔLf activity.
Transcription factors are often regulated by combinations of different PTMs which might act as a molecular barcode. We are currently
investigating the crosstalk between them in order to decrypt the «ΔLf code» responsible for the control of its activity. SUMO usually competes
with ubiquitination and phosphorylation. Ub/SUMO are mutually exclusive whereas SUMO/phosphorylation can be agonistic or antagonistic
modification depending of substrates. Interestingly, among the four SUMO sites, two are located in areas which are targeted by other
modifications. At the N-terminus the O-GlcNAcylation/phosphorylation site is adjacent to the SUMO-1 site. Therefore the two regulatory sites are
in close proximity. The crosstalk between these sites could constitute the «ΔLf code » responsible of the control of the transactivation of ΔLf
target genes. Now, at the C-terminus SUMO-4 site is in the heart of the PEST sequence. SUMO is known to compete with ubiquitination
therefore K391 is either ubiquitinated or sumoylated. So, in that way SUMOylation would positively regulate stability. Therefore at the PEST
motif a crosstalk between phosphorylation/SUMOylation/ ubiquitination could constitute the « ΔLf code » responsible of the control of ΔLf
stability.
These agonistic and/or antagonistic modifications may contribute to the establishment of finely regulated mechanisms of ΔLf transcriptional
activity and stability depending on the type of target genes and cellular homeostasis.
FAN Ying
Anne TSICOPOULOS (U 1019 - UMR 8204 éq. 11 - TSICOPOULOS Anne)
Regulation of the Th-22 axis in the pulmonary immune response in allergic asthma
Y.Fan1, C.Plé1, H.Vorng1, I.Azzaoui1, S.Ait Yahia1, L.Everaere1, B.Wallaert1,2, A.Tsicopoulos1,2
(1)Pulmonary Immunity, Center for Infection and Immunity of Lille, INSERM U1019, (2)Centre Hospitalier Régional et Universitaire de Lille
Th17 and Th22 are 2 groups of newly defined subtype T helper cells showed to be involved in allergic asthma as well as their special cytokines:
IL-17A and IL-22. Meanwhile, respiratory infections have been suggested to be involved in exacerbation, chronicity and the development of
allergic asthma. There are studies showed dendritic cells can take up microbes and also allergens through PRRs. So that we hypothesized that
the severe asthmatic reaction and the polarization of the immune response might be modulated through co-stimulation by PAMPs and allergens.
In order to find out if some particular PRR in association with some allergens can promote a preferential Th22 profile through DC stimulation,
and to evaluate the beneficial or pro-inflammatory role of Th-22 as compared to Th-17 polarization in relevant animal models of asthma, the
allergen of dog; NOD2 ligand MDP; TLR3 ligand PolyIC, and TLR9 ligand CPG were chosen to stimulate the immature DCs from non-allergic
subjects or patients allergic to dog because they favor the Th22 profile rather than Th17. After 48h, the Th17/ Th22 polarization cytokines
production and cell surface markers were tested. A co-culture was performed with the stimulated DCs and CD4+ naïve T cells from non-allergic
subjects. After 5 day’s co-culture, the cytokines production was tested and T cells were collected to evaluate the Th17/Th22 cell surface makers
as well as the intra cell expression of IL-17 and IL-22.
NOD2 and TLR3 but not TLR9 activation enhances DC B7 family and HLA-DR expression, whereas the addition of dog allergen has a synergic
effect only with TLR9 activation. The production of IL-6 and TGF-b was increased in response to PRR ligands alone but not IL-1b or IL-23, which
suggested that IL-6 and TGF-b rather than IL-1b and IL-23 were involved in Th22 polarization.
Th-22 polarization was induced in response to dog, TLR3 and NOD2 stimulation but not TLR9. There was an additive effect of allergen and PRR
stimulation for NOD2 and TLR3, and a synergic effect for TLR9, which suggested that Th22 polarization induced in response to bacteria only in
the presence of allergen.
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GARGANI Sofia
Julie KERR-CONTE / PATTOU (U 859 - PATTOU François)
Adaptive changes of human islets to an obesogenic environment in the mouse
Gargani Sofia, Thévenet Julien, Lefebvre Bruno, Violeta Raverdy, Gmyr Valéry, Hubert Thomas, Pattou Francois, Kerr-Conte Julie
U859 Biotherapies of Diabetes, 1 Place de Verdun, F59045 Lille, France
Aims/hypothesis : No direct evidence exits proving human islet mass adapts to obesity in vivo. The aim of this study was to explore the
adaptation of human islets to an obesogenic environment in vivo in the mouse.
Methods : Nondiabetic RAG 2-/- mice (n=61) were transplanted with 400 human islets (from 4 control and 2 Type 2 diabetic organ donors).
Animals, fed with Control or High fat diet (HFD) were followed up for weight, triglycerides, glycemia, human c-peptide (function) and Homeostatic
model assessment 2 (islet quality) over 12 weeks. Human grafts and the endogenous pancreas and were analyzed for endocrine and beta cell
mass, proliferation upon sacrifice.
Results : HFD mice gained significant weight after 2-12 weeks compared to controls which corresponded to higher BMI (g/cm2) (hifat vs control
diet p<0.001) and higher serum triglycerides. A functional adaptation was observed (doubling of fasting human cpeptide in mouse serum).
Human c-peptide was higher in HFD mice at 12wks, [human c-peptide (ng/ml)/glycemia (mg/dl): HFD 0.0325±0.0087 vs controls 0.0150±0.0049
human; p=0.04]. Furthermore, histology confirmed the doubling of human endocrine graft volume in HFD animals (HFD 0.094±0.017 mm3 vs
controls 0.042±0.008, p=0.01) and human beta cells made up a greater proportion of endocrine cells in grafts on HFD (HFD 75%± 1.86 vs
18.08%±1.49; p=0.01). Finally, insulin sensitivity (estimated with Homa2) decreased (70%) in HFD animals.
Conclusions/Interpretation : Human islets adapt both endocrine and beta cell mass, function, and gene expression to a murine obesogenic
environment in vivo. This model will allow longitudinal studies of human islet compensation to an obese murine environment and may be
instrumental in deciphering pathways involved in human beta cell expansion.
GENAY Stéphanie
Pascal ODOU (EA 4481 - BONTE Jean-Paul)
Impact des modes de perfusion de la noradrénaline sur la pression artérielle moyenne: résultats d’une étude
préliminaire in vitro – in vivo
Stéphanie GENAY
Faculté de pharmacie - Université Lille 2, Laboratoire de Biopharmacie, Pharmacie Galénique et Hospitalière
Introduction : Il n’existe pas de recommandations concernant la méthode optimale de perfusion de la noradrénaline (NA). L’objet de cette étude
était de comparer quatre montages de perfusion sur le débit massique de NA et sur la pression artérielle moyenne (PAM) durant l’administration
de NA chez des patients en soins intensifs péri-opératoires.
Matériels et méthodes : On a utilisé des seringues de 50mL de tartrate de NA dilué dans du sérum salé isotonique (SSI) à 0,5mg/mL. Quatre
montages de perfusion ont été comparés :
- N 1 était composé d’une seringue auto-pulsée (SAP) de NA (2mL/h) et d’une SAP de SSI (8mL/h) connectées en Y à un prolongateur purgé
par la solution de NA (V = 1,5mL)
- N 2 utilisait une SAP de NA directement connectée à la voie veineuse centrale (VVC)
- N 3 et N 4 utilisaient la même de SAP de NA à 2mL/h connectée à des SAP de SSI aux vitesses respectives de 8 et 5 mL/h via un
prolongateur à très faible volume résiduel muni d’une valve anti-retour (V=0,046mL).
Des essais in vitro ont été réalisés par la mesure de l’absorbance UV de la NA. Les patients ayant présenté une défaillance circulatoire
(PAM<60mmHg) malgré un remplissage vasculaire ont été mis sous NA selon les pratiques de l’anesthésiste prescripteur. Les résultats
cliniques ont été obtenus par analyse des enregistrements en continu de la PAM pendant toute la durée de la perfusion de NA. Les temps
d’obtention de l’état d’équilibre (PAM > 70mmHg) ont été comparés par une méthode ANOVA sur les rangs selon Conover et Iman. Les
résultats sont présentés en médiane (min :sec) [min – max].
Résultats : Tous les patients ont atteint l’état d’équilibre. Les temps pour atteindre les plateaux de débit massique de NA et de PAM étaient
significativement différents entre les quatre montages. Le montage N 1 a systématiquement engendré un bolus de NA (in vitro comme in vivo),
retardant l’obtention de l’état d’équilibre (40:00 [19:57 - 49:22] vs 24:30 [24:00 - 29:30]). Le montage N 2 a présenté des temps d’obtention de
l’état d’équilibre significativement différents (26:35 [8:20 - 33:10] vs 34:10 [23:10 - 62:30]) des montages N 3 (12:34 [6:34 - 17:33] vs 14:00 [9:20
- 26:10]) et N 4 (15:05 [10:01 - 22:29] vs 15:15 [12:20 - 25:10]).
Discussion : Les résultats soulignent l’importance du volume mort des prolongateurs, du protocole de purge et du système double chariot sur les
débits massiques de NA et leurs conséquences cliniques. Cette étude a permis d’uniformiser les pratiques de perfusion de la NA au sein du
service clinique en mettant en place un seul et unique montage:le montage N 4 qui représente les caractéristiques les plus intéressantes en
termes de réactivité et de facilité d’utilisation.
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GENIN Michael
Alain DUHAMEL (EA 2694 - DUHAMEL Alain)
Statistiques de scan : théorie et application à la Maladie de Crohn dans le Nord de la France.
Michaël Genin
La mise en évidence d’agrégats spatiaux et spatiaux-temporels de cas de maladie s’avère être une problématique importante en épidémiologie.
Elle permet d’objectiver la réalité de zones géographiques atypiques de sur ou sous-incidence de cas et d’émettre des hypothèses sur les
causes de la maladie.
La détection de clusters spatiaux et spatio-temporels basée sur la méthode des statistiques de scan s’est récemment imposée comme une
méthode robuste et efficace en épidémiologie. Cette méthode permet d’identifier les clusters atypiques et de tester leur signification. Cependant,
le test de signification repose sur la loi d’un paramètre statistique, la « statistique de scan » qui ne peut en général être identifiée
analytiquement. La démarche actuelle consiste à approcher cette loi par des simulations de Monte Carlo. Cependant, cette technique s’avère
extrêmement consommatrice de temps de calcul lorsque les bases de données sont de taille importante. Notre travail de thèse se base sur
l’approximation de la loi de la statistique de scan par les suites de variables aléatoire stationnaires 1-dépendantes afin, dans un premier temps,
de réduire grandement les temps de calculs et dans un deuxième temps, d’associer une erreur d’approximation aux probabilités critiques
obtenues. Ces méthodes permettent, en outre, d’améliorer grandement la précision de l’approximation de la loi de la statistique de scan.
Nous avons appliqué les statistiques de scan à la maladie de Crohn (MC), dont les causes sont inconnues, au travers du registre Inserm-InVs
Epimad. Entre 1990 et 2006, ce dernier a recensé 6472 cas de MC au sein des 273 cantons des départements du Nord, Pas-De-Calais, Somme
et Seine Maritime, correspondant à une incidence annuelle de 6.5/105 habitants. La recherche de clusters spatiaux et spatio-temporels a été
réalisée par statistiques de scan et l'analyse a été ajustée sur le sexe et l'âge, facteurs de confusion connus. Une comparaison phénotypique a
été réalisée entre les clusters de sous et de sur-incidence.
L’analyse spatiale a mis en évidence 12 clusters de sur-incidence (Risque relatif (RR) : 1.35-9.79) et 12 clusters de sous-incidence (RR<0.76).
Quatre de ces clusters ont évolué dans le temps, 3 clusters de sur-incidence sont apparus en 1996 dans la Somme et un cluster de surincidence est apparu dans le boulonnais en 2000. L'analyse phénotypique de la MC dans les clusters de sur-incidence a mis en évidence des
histoires familiales de MC plus fréquentes (p=0.006), un âge plus jeune (p=0.02) et une atteinte digestive plus étendue (0.008).
L’application des statistiques de scan a démontré une hétérogénéité spatiale et spatio-temporelle de l’incidence de la MC et a permis de
localiser géographiquement des clusters de sur et sous-incidence. L’analyse temporelle entre 1990 et 2006 suggère, sans exclure une
participation génétique, une évolution des facteurs de risque de MC et incite à poursuivre nos travaux visant à les identifier dans la région.
GNEMMI Viviane
Laurent ZINI (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
MUC1 est induit au cours de la transition épithélium-mésenchyme rénale
Viviane Gnemmi, Belinda Ringot, Audrey Bouillez, Brigitte Hémon, Xavier Leroy, Michael Perrais, Sébastien Aubert, Laurent Zini
Inserm UMR837, F-59045 Lille, France
La mucine membranaire MUC1 est une glycoprotéine de haut poids moléculaire fortement O-glycosylée et exprimée au pôle apical des cellules
épithéliales tubulaires distales rénales. MUC1 est donc considéré comme un marqueur épithélial. Au cours de la transition épithéliummésenchyme (TEM), une perte d’expression des marqueurs épithéliaux au profit de l’induction des marqueurs mésenchymateux est décrite
(Thiery JP et al.2002). Ainsi, MUC1 est réprimé par SNAIL1 lors de la TEM dans un modèle cellulaire colique (Guaita et al 2002). Cependant,
les travaux initiaux de notre laboratoire ont mis en évidence une surexpression de MUC1 lors de la TEM rénale et nous ont incités à étudier le
rôle de MUC1 au cours de la TEM et à rechercher une relation entre MUC1 et un facteur de transcription clé de la TEM : SNAIL1.
L’acquisition d’un phénotype métastatique et la différenciation sarcomatoïde d’un carcinome constituent deux exemples de TEM en pathologie
cancéreuse humaine où nous avons observé une surexpression de MUC1 par immunohistochimie. Nous disposons d’un Tissue Micro Array
(TMA) échantillonnant 27 carcinomes rénaux à cellules claires (CRCC) de stade pT3 métastatiques et non métastatiques. MUC1 était
surexprimé et délocalisé dans les tumeurs les plus agressives. Cette surexpression était associée à l’induction du facteur de transcription
SNAIL1 (p<0,05). Sur un 2ème TMA échantillonnant 22 CRCC comportant une composante sarcomatoïde, SNAIL1 était significativement
surexprimé dans la composante sarcomatoïde comparativement au contingent conventionnel. MUC1 était systématiquement délocalisé au
cytoplasme dans la composante sarcomatoïde. Ceci s’accompagnait d’une diminution/perte d’expression de marqueurs épithéliaux au profit de
marqueurs mésenchymateux (p<0,05).
In vitro, MUC1 (ARN et protéines) est augmenté en présence de concentrations croissantes du vecteur d’expression de SNAIL1 dans des
lignées cellulaires rénales carcinomateuses. Deux éléments de réponse (E-boxes) de SNAIL1 sont présents sur la partie proximale (-84/-72) du
promoteur de MUC1. Par mutagenèse dirigée de l’une ou l’autre ou des deux E-boxes du promoteur de MUC1, nous démontrions leur caractère
fonctionnel. Par immunoprécipitation de la chromatine, nous montrions l’interaction directe de SNAIL1 sur le promoteur de MUC1 dans les
cellules rénales non mutées pour VHL, mais nous ne montrions pas de liaison directe de SNAIL1 sur le promoteur de MUC1 dans les cellules
mutées VHL, suggérant l’intervention de co-régulateur(s) transcriptionnel(s).
En conclusion, l’ensemble des données préliminaires montrent que MUC1, considéré comme un marqueur épithélial, est surexprimé au cours
de la TEM associée au cancer. Nos données montrent pour la première fois une régulation positive de MUC1 par SNAIL1. Ces résultats
s’intégrent à ceux que nous avons observé dans des modèles de physiopathologique rénale, c’est-à-dire régénération et fibrose rénale.
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GRONNIER Caroline
Christophe MARIETTE (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
Role of acid and biliary component in an animal model of oesophageal carcinogenesis induced by gastro-oesphageal
reflux in rat ?
Caroline Gronnier, , Guillaume Piessen, Emilie Bruyère, Nicolas Briez, David Buob, Jérome Bot, Emmanuelle Leteurtre, Isabelle Van
Seuningen, Christophe Mariette
Esophageal adenocarcinoma incidence has been increasing for the last 30 years. Its principal cause is the duodeno-gastro-esophageal reflux. A
relationship between acid and biliary components of reflux, Barrett’s esophagus and its degeneration into adenocarcinoma has been
established. Moreover we showed previously that bile acids activate mucins, PI3K and NFkB signalling pathways in human adenocarcinomatous
cells. Our aim was to determine whether the reflux induces esophageal carcinogenesis in an in vivo model, and to identify new tumor-associated
proteins. A rat model of chronic reflux induced by surgery was established. Expression of RNA and proteins was studied using RT-PCR, qRTPCR, micro-arrays and immunohistochemistry. Effects on cell proliferation and migration were carried out in vitro in OE33 esophageal
adenocarcinomatous cells. All rats with reflux showed inflammation and neoexpression of genes involved in tumor progression with alterations of
markers involved in differentiation, proliferation, adhesion and metastasis in which key pathways such as PI3K and NFkB were found activated.
More importantly, two new tumor-associate proteins, S100A4 and MCM6, were overexpressed in tumors and showed in vitro effects on
esophageal cancer cell proliferation and migration. Altogether, these data indicate that progression toward adenocarcinoma was effective
following induction of a chronic reflux in rat esophagus and that signalling pathways and new tumor-associated proteins were identified that may
be new biomarkers and new therapeutic targets in oesophageal adenocarcinoma
GUE Emilie
Elisabeth DELCOURT-DEBRUYNE (U 1008 - SIEPMANN Juergen)
THE ROLE OF PLASTICIZERS IN HOT MELT EXTRUDATES FOR POORLY SOLUBLE DRUGS
E. Gue,1 A. Mahieu,2 B. Claeys,3 S. Muschert,1 J-F. Willart,2 E Dudognon,2 M. Descamps,2 C. Vervaet,3 E. Delcourt-Debruyne,1 J.
Siepmann,1
1INSERM U 1008, 2USTL, UMET, 3Laboratory of Pharmaceutical Technology, University of Gent
Introduction : Poor aqueous drug solubility is a serious hurdle for the development of new therapeutic strategies. In order to increase the limited
bioavailability of poorly soluble compounds, particle size reduction, addition of surfactants, self-emulsifying systems, cyclodextrines and many
other approaches have been suggested. The preparation and stabilization of drugs in the amorphous state as well as dispersing the drug on the
molecular level within hydrophilic carriers (monolithic solutions) are particularly promising strategies [1]. Hot melt extrusion offers an interesting
possibility to prepare this type of advanced drug delivery systems [2]. However, so far the selection of the carrier material (often polymers are
used for this purpose), system composition and processing parameters is not well understood. Thus, time-consuming and costly series of trialand-error experiments are required. Furthermore, hot melt extrusion should generally be performed 20-40 C above the glass transition
temperature (Tg) of the matrix former. Thus, in case of polymers exhibiting very high Tgs, plasticizers might be added.
Purpose : The aim of this study was to better understand the role of plasticizers in polymeric hot melt extrudates. Poly(vinylpyrrolidone) (PVP
K30, BASF) and griseofulvin were studied as model polymer and drug, respectively. A variety of compounds was tested as plasticizers.
Materials and methods : Thin free films were prepared by casting from organic solutions (acetone/ethanol/water 50/35/15% V/V). Hot melt
extrudates were prepared on a conical twin-screw mini-extruder (Haake MiniLab II Micro Compounder). The systems were characterized using
DSC and XRPD analysis as well as drug release measurements in 0.1 N HCl (UV-detection).
Results : The optical observation of opacity of drug-free PVP films (25% plasticizer content) revealed that the possible plasticizers: sorbitol,
xylitol, PEG 400 & PEG 600 added to the polymer led to comparable aspects as the free polymeric film after 3 days storage. The possible
plasticizers PEG 1000 and 1500 resulted into partially transparent films and Eudragit E, DBS & TEC led to opaque films, indicating
incompatibility between polymer and plasticizer. Free polymeric films containing 20% griseofulvin showed recristallization of the drug in all
cases. Decreasing the drug loading to 10% (w/w), the films containing sorbitol stayed transparent even upon 2 months storage. Hot melt
extrudates consisting of PVP/griseofulvin 90/10 were clear and brittle whilst the combination PVP/griseofulvin/sorbitol 70/10/20 led to smooth but
opaque extrudates. The glass transition temperature of PVP could significantly be decreased by adding 20% sorbitol. Hot melt extrudates
without plasticizer showed superior in vitro release of griseofulvin than the physical mixture, whilst extrudates containing 20% sorbitol showed
slow drug release in the first 15 minutes exceeding the latter obtained from the physical mixture.
Conclusion : Interestingly, the addition of plasticizers can improve the processability of hot
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GUERRESCHI Pierre
Philippe MARCHETTI (U 837 éq. 04 - FORMSTECHER Pierre)
Etude in vivo de l’impact de la mitochondrie sur le métabolisme pour améliorer l’efficacité des pro-oxydants dans le
mélanome
Pierre GUERRESCHI
U837 inserm Equipe 4, Pole Recherche - Faculté de Médecine - Lille
Les chimiothérapies conventionnelles sont peu efficaces sur le mélanome métastatique. C’est pourquoi de nouvelles voies thérapeutiques sont
explorées. Une alternative aux thérapies ciblées anti KIT ou BRAF pourrait être l’exploitation des particularités biochimiques du mélanome.
Une de ces particularités biochimiques est la production excessive de ROS (Reactive Oxygen Species). Cette production excessive
constitutionnelle rend le mélanome vulnérabe à une attaque exogène par un agent pro-oxydant. L’elesclomol (le prototype d’une nouvelle classe
de molécules pro-oxydantes ciblant la mitochondrie) a été évalué dans des essais cliniques pour le mélanome. Il est indispensable de préciser
les mécanismes de régulation de la production de ROS pour essayer d’améliorer l’efficacité des pro-oxydants. Le facteur de transcription HIF 1α
(Hypoxia Inducible Factor 1 alpha), surexprimé dans le mélanome, a été identifié comme un modulateur du stress oxydatif dans plusieur
cancers. Les résultats de notre laboratoire démontrent que le blocage de HIF 1α augmente la respiration mitochondriale dans les lignées
cellulaires in vitro par inhibition de la PDK3 (pyruvate dehydrogenase kinase 3). Le blocage de HIF 1α augmente la mort cellulaire dépendante
des ROS.
Pour confirmer ces résultats in vitro chez l’animal, j’ai établi un modèle murin de xénogreffes de mélanome humain sur la souris CB17 SCID.
Comme chirurgien plasticien j’ai un accès facilité à des échantillons frais de métastases cutanées de mélanome. J’ai pu réaliser des xénogreffes
directement à partir d’échantillon frais provenant de patient traités chirurgicalement d’exérèse de métastases cutanées de mélanome. J’ai
également pu utiliser plusieurs lignées cellulaires (A375, LND, HBL) disponibles dans le laboratoire. Les souris xénogreffées ont été traitées
avec du DichloroAcétate (DCA), un agent pharmacologique inhibant la PDK3. Le DCA a été administré seul ou associé à l’elesclomol.
L’association thérapeutique synergique réduit la prolifération tumorale, augmente l’apoptose et le taux de protéines oxydées. Ces données
suggèrent que l’efficacité des pro-oxydants sur le mélanome peut être améliorée par le DCA. Ceci pourrait ouvrir la voie sur une nouvelle
association thérapeutique efficace.
HADDADI Ahmed
Mohamed LEMDANI (EA 2694 - DUHAMEL Alain)
Construction d'un score dynamique prédictif du risque SEPSIS pour des patients hospitalisés en unités de soins
intensifs/réanimation
Ahmed HADDADI, Mohamed Lemdani, Herve Hubert
Laboratoire de santé publique, épidémiologie et qualité de soin de l’université Lille Nord de France, EA2694, CHRU de Lille
Le diagnostic d'un état septique, quelle qu’en soit sa gravité, est défini par la présence d’une infection - documentée ou fortement suspectée - et
de signes caractérisant la "réponse inflammatoire" de l’organisme à celle-ci.
Différentes études menées sur ce sujet, ont permis de mieux cerner l'épidémiologie et la physiopathologie du SEPSIS (Syndrome de Réponse
Inflammatoire Systémique d'origine infectieuse) et d'établir une classification des différents niveaux de gravités le caractérisant.
Basée sur l’intensité de la réponse de l’organisme elle (la gravité) différencie les SEPSIS« non compliqués » des syndromes septiques graves et
des chocs septiques.
Ces trois syndromes sont considérés comme les phases d’aggravation successives de l’infection et de la réponse inflammatoire.
Ils se distinguent respectivement par l’apparition de dysfonction d’organes et une hypotension qui persiste malgré le remplissage vasculaire.
En France comme dans le reste du monde l'acquisition d'un SEPSIS en USI est un risque nosocomial notable, son évolution péjorative influe
grandement sur les chances de survie du patient et sur sa durée d'hospitalisation.
En terme de morbidité plusieurs études ont démontré l'implication du SEPSIS nosocomial et de la lourdeur de sa prise en charge dans les
services de réanimation et USI
Même si le pronostic -souvent préoccupant-, diffère nettement pour les 3 niveaux , la mortalité (à 28 jours) passe respectivement de 10-15% à
20-30% et 40-50%.
Il demeure ainsi la première cause de mortalité aux soins intensifs.
Le but de notre étude est la construction d'un outil discriminant face au risque du SEPSIS nosocomial pour des patients hospitalisés en USI.
Le scorage individuel de chaque patient permettrait d' anticiper sur des conduites à tenir et de réajuster au besoin des schémas thérapeutiques
déjà engagés.
Menée sur une population de patients d'USI multicentrique (service de réa CHURL, CHUD, CHU la timone), notre étude a considéré en plus de
certains facteurs de risque déjà fortement corrélés au SEPSIS nosocomial -par d'autres études- certains scores gravité et de la charge de
travail ainsi que leurs variation durant le séjour en USI.
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HULO Sébastien
Jean-Louis EDME (EA 4483 - BROLY Franck)
Évaluation des condensats d’air exhalé comme indicateurs d’exposition et d’inflammation pulmonaire chez des salariés
exposés
Hulo Sébastien (CCU-AH), Jean-Louis Edmé (MCU-PH), Annie Sobaszek (PU-PH)
Laboratoire Universitaire de Médecine du Travail – EA 4483 – Université Lille Nord de France
Le condensat d’air exhalé (EBC) est recueilli de manière non-invasive lors du refroidissement de l’air exhalé d’un sujet au repos. Quelques
études ont mis en évidence une corrélation entre le dosage de métaux dans l’EBC et les concentrations atmosphériques de métaux. De plus, la
concentration de certains biomarqueurs dosés dans l’EBC diminue lors du port d’équipements de protection individuels. Par conséquent,
l’analyse de l’EBC semble être un outil utilisable pour l’amélioration de la prévention individuelle des salariés exposés.
Le but de ce travail est d’évaluer la capacité de l’EBC à déterminer l’imprégnation pulmonaire de salariés exposés à des toxiques professionnels
à tropisme pulmonaire afin d’améliorer la prévention à mettre en place lors de leur suivi en médecine du travail. L’objectif principal est d’évaluer
la faisabilité des dosages simultanés des marqueurs d’imprégnation d’exposition professionnelle et de leurs effets sur le parenchyme
pulmonaire dans l’EBC de salariés exposés.
Il s’agit d’une étude exposé-non exposé concernant deux expositions professionnelles choisies pour leur intérêt en Médecine du Travail : le
béryllium et l’exposition aux fumées de soudages (EBCWF).
- l’étude Béryllium concerne 120 salariés (82 exposés et 38 non-exposés) recrutés sur 8 entreprises différentes exposant les salariés à
des alliages de Cuivre-béryllium ou Aluminium-béryllium. Il s’agit d’une étude transversale dans laquelle les salariés ont bénéficié d’un
questionnaire professionnel complet permettant de retracer l’exposition professionnelle ancienne et récente, d’un recueil d’EBC, d’un dosage de
la fraction exhalée du monoxyde d’azote, d’une courbe débit-volume, d’un prélèvement sanguin (polymorphisme génétique) et d’un recueil
urinaire.
- l’étude EBCWF concerne une entreprise de construction de véhicules ferroviaires. Dix-sept soudeurs, 6 dresseurs et 16 témoins
appariés sur l’âge, le sexe et la consommation tabagique ont été recrutés. Il s’agit d’une étude longitudinale dans laquelle les salariés ont
bénéficié des mêmes explorations (sans prélèvement sanguin) le lundi avant la prise de poste et le vendredi en fin de poste.
Une collaboration avec le laboratoire UT2A (Ultra Traces Analyses Aquitaine) nous a permis de définir une méthodologie de faisabilité de
dosages de métaux dans les EBC. Dans un 1er temps nous avons déterminé dans l’EBC par ICP-MS les limites de quantification des métaux
les plus pertinents pour chaque étude : 1) pour l’étude Béryllium : Be : 1 ng/L ; Al : 0,1 pg/L ; Cu : 0,05 pg/L , 2) pour l’étude EBCWF : Ni : 0,2
µg/L ; Cr : 0,5 µg/L ; Mn : 0,05 µg/L ; Fe : 1 µg/L. La validation finale du dosage de ces métaux dans l’EBC comprendra la détermination de sa
sélectivité, fidélité, justesse, répétabilité, stabilité, linéarité et robustesse.
Les 1ers résultats confirment cette faisabilité du dosage des métaux car sur l’ensemble des entreprises de l’étude béryllium, la quantification du
béryllium dans l’EBC a été possible pour 26% des salariés exposés et seulement 6% des salariés non-exposés. Ces résultats sont d’autant plus
visibles pour une des entreprises où cette proportion atteint 58% des salariés exposés. Les matrices emploi-exposition sont en cours de
réalisation. Elles permettront de conforter l’utilisation de l’EBC comme indicateur d’imprégnation et d’analyser les corrélations entre l’exposition
cumulée et l’inflammation pulmonaire de ces salariés.
L’étude du polymorphisme du gène HLA-DPβ1 montre que 41% de ces salariés sont à risque de développer un bérylliose chronique pulmonaire.
Cette proportion est comparable à celle de la population générale. L’étude de l’influence du polymorphisme sur les dosages effectués est en
cours.
Les 1ères analyses des métaux dans les EBC de l’étude EBCWF confirment les résultats de l’enquête Béryllium. Les données saisies feront
l’objet d’une analyse statistique lors du 2ème semestre 2012.
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JUMEAU Fanny
Valérie MITCHELL (U 837 éq. 01 - BUEE Luc)
Évaluation et caractérisation du protéome du spermatozoïde humain en relation avec les paramètres de Spermiologie
F. JUMEAU(1,2), M. BEN MAAMAR(1), L. KELLER(1), F. FERNANDEZ-GOMEZ(2), H. OBRIOT(2), S. EDDARKAOUI(2), S. DUBAN(3), J.
HACHANI(3), L. BUEE(2), N. SERGEANT(2), V. MITCHELL(1)
1.EA4308 Spermatogenèse et Qualité du gamète mâle, CHRU Lille, 59000 Lille, 2.Inserm U837-1 Alzheimer & Tauopathies, 59000 Lille,
3.Plateforme Proteomique de l'Artois, Université de l'Artois, 62300 Lens
Introduction : Les données récentes de la littérature suggèrent que la fertilité masculine est en déclin et de plus en plus de couples présentent
des difficultés à concevoir. Les techniques de Spermiologie actuelles renseignent sur la fonctionnalité du spermatozoïde mais ne donne aucune
explication sur l’origine de sa dysfonction. De plus, il n’existe à notre connaissance aucune approche biochimique permettant d’évaluer la qualité
protéique du spermatozoïde. La protéomique ouvre alors de nouvelles voies d’investigation. Dans cette étude, nous proposons une méthode
pour évaluer la qualité du protéome spermatique ainsi qu’une caractérisation protéomique du spermatozoïde humain par électrophorèse
bidimensionnelle.
Matériels & Méthodes : Le sperme éjaculé est collecté dans notre laboratoire dans les conditions standard de recueil (CHRU Lille, N=161).
Après liquéfaction, les paramètres spermatiques ont été évalués selon les normes OMS 2010. Les spermatozoïdes ont été isolés du plasma
séminal et des cellules rondes par gradient de densité monocouche. Les protéines spermatiques ont été extraites et analysées par
électrophorèses mono (1D SDS PAGE) et bidimensionnelles. Les gels ont été colorés au bleu de Coomassie. Les résultats obtenus des gels 1D
SDS PAGE ont été analysées avec le logiciel ImageJ (NIH) et un index de qualité a été défini. Les spots issus de l’électrophorèse
bidimensionnelle ont été identifiés par spectrométrie de masse (MALDI TOF) et la classification des protéines a été réalisée via gene ontology.
Résultats : L’électrophorèse monodimensionnelle nous permet d’apprécier la qualité du profil des protéines spermatiques extraites. Trois types
de profils ont pu être observés. Pour 50% des échantillons une répartition homogène des protéines extraites a pu être visualisée et semble
correspondre à un profil de qualité. Après analyse, un index de qualité a été déterminé et présente une corrélation avec les paramètres
spermatiques en particulier la mobilité du spermatozoïde. Pour l’autre moitié des échantillons peu de bandes et de faible intensité ont pu être
observées. Ces profils semblent suggérer une altération du profil protéique.
Les protéines extraites de spermatozoïdes normaux (pool de 5 éjaculats de patients normozoospermes) sont analysées en électrophorèse
bidimensionnelle (N=3). 200 protéines différentes ont été identifiées en spectrométrie de masse pour un point isoélectrique variant de 3 à 10 et
un poids moléculaire allant de 10 kDa à 120 kDa. Ces protéines appartiennent à tous les compartiments subcellulaires.
Conclusions : Dans cette étude, nous proposons une méthode non sélective pour extraire les protéines spermatiques et évaluer leur qualité.
Cette étape est nécessaire pour réaliser une étude du spermatozoïde via une approche protéomique. Enfin, nous avons réalisé une
caractérisation protéomique du spermatozoïde humain. Cette approche originale devrait permettre à terme l’identification de protéines
impliquées dans la dysfonction spermatique.
KUNTZ Mélanie
Vincent BEREZOWSKI (EA 2465 - CECCHELLI Roméo)
Glial cells’ status sensitizes blood-brain barrier endothelial cells to early reperfusion injury
Mélanie Kuntz; Caroline Mysiorek; Olivier Pétrault; Maud Pétrault; Rustem Uzbekov; Régis Bordet; Laurence Fenart; Roméo Cecchelli; Vincent
Bérézowski
UArtois, LBHE, EA 2465,IMPRT,IFR114, F-62300, Lens, France
The nature of early blood-brain barrier (BBB) leakage following reperfusion is debated in the stroke literature. We sought to clarify in vivo and in
vitro the kinetics of BBB dysfunction during early reperfusion, and the underlying crosstalk between endothelial cells (ECs) and glial cells (GCs).
After 60 min of middle cerebral artery occlusion followed by reperfusion up to 24 hours in mice, changes in brain water status were investigated
using magnetic resonance imaging, in an attempt to find a temporal link between lesion maturation/edema and BBB integrity. T2 relaxometry
determined brain water content, and an original sequence of diffusion-weighted imaging assessed water mobility in microvascular compartments
(D*) apart from parenchymal compartments (apparent diffusion coefficient (ADC)). Before disruption, a peak in D* at 4h post-reperfusion (with no
change in ADC) correlated with Evans Blue extravasation and in vitro BBB opening during R. Two in vitro BBB models (co-cultures of brain
microvascular ECs and GCs) enabled permeability studies using a small tracer molecule, under oxygen+glucose deprivation (OGD) and
reoxygenation (R), mimicking consequences of ischemia/reperfusion. The BBB opening at 4h of R was measured only in a model displaying GC
injury, whereas the absence of GC injury in another model allowed BBB recovery for up to 14 days. Ultrastructural analysis showed that earlyonset BBB leakage may involve subtle, dynamic regulation of the tight junctions’ permeability to proteins as well. Prior to BBB disruption, GC
status drives subtle endothelial opening in early reperfusion, highlighting the importance of GCs as potential targets for neurovascular unit
protection.
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KWIATKOWSKI Arnaud
Benoit DERVAUX (EA 2694 - DUHAMEL Alain)
Economic costs, utility and social participation of patients with multiple sclerosis treated by natalizumab.
Kwiatkowski A 1,2, Puyfaucon M 1, Marissal JP 3, Dervaux B 2,4, Vermersch P 4,5 Hautecoeur P 1
1. GHICL, Université Catholique de Lille, 2. EA2694, Université Lille 2, 3. LEM UMR CNRS 8179, 4. DRCI, CHRU Lille, 5 Clinique Neurologique,
CHRU Lille
Background : Economic costs related to treatment of multiple sclerosis (MS) must be justified by the improvement of health status, quality of life
(QOL) and social participation of patients and caregivers.
Objectives : First, this pilot study evaluates feasibility and acceptability of a medico-economic survey in an individual interview. Then we assess
economic costs (direct and indirect costs), the impact on QOL (utility) and social participation in MS patients receiving natalizumab.
Methods : By individual interviews of 40 consecutive patients treated by natalizumab in one centre, we reported clinical and medical data
including the Expanded Disability Status Scale score (EDSS). We measured resource consumption, productivity loss, QOL (utility) with a French
validated value set of EQ-5D, social participation with the Impact on Participation and Autonomy questionnaire (IPA). We performed descriptive
and correlation analyses.
Results : 39 patients (median age: 43 [23-72] years, mean disease duration: 11.8 years [2-40]) accepted to complete the questionnaire. Mean
annual global cost per patient was 58710 +/-19867 Euros. Resource consumption accounted for 55% of global cost, non-medical direct costs for
18% (including informal care by caregivers for 8%) and productivity loss for 26%. Mean EQ-5D value were 0.52 +/- 0.27. EDSS score correlated
with global cost (p=0.02, r=0.27), non-medical direct cost (p<0.01, r=0.47), utility values (p=0.01, r=-0.5) and social participation (p<0.01, r=0.47). Social participation and utility values were also correlated (p<0.01, r=-0.47). Productivity losses were not correlated to health status
(EDSS).
Discussion / Conclusion : Our descriptive study from a small but homogeneous MS patients sample provides consistent results with older French
data collected by postal questionnaires with lower response rates. Our overall costs of MS seem increased over those of earlier studies. But this
effect can be mainly explicated by treatment of every patient with natalizumab. Productivity losses could be limited by the medication.
Prospective studies with similar method could be useful to better understand the links between medico-economic data, QOL and social
participation.
LAHDAOUI Fatima
Marie-Pierre BUISINE (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
MiR-219-1-3p est un régulateur négatif de l’expression de MUC4 et un suppresseur de tumeur dans le cancer du
pancréas
Fatima Lahdaoui, Nicolas Jonckheere, Isabelle Van Seuningen
Inserm U837, Centre de Recherche Jean-Pierre Aubert, Equipe 5 « Mucines, différenciation et cancérogenèse épithéliales », 59045 Lille Cedex,
Introduction : Le cancer du pancréas représente la quatrième cause de décès par cancer dans les pays occidentaux avec une médiane de
survie de 6 mois et un taux de survie à 5 ans inférieur à 5% dus à un diagnostic tardif de la maladie et l’absence de traitement efficace. La
mucine transmembranaire MUC4, absente dans le pancréas sain, est néo-exprimée dès les stades précoces de la cancérogenèse
pancréatique. Des études menées au laboratoire ont permis de montrer que l’expression de MUC4 était régulée par méthylation de l’ADN et
modifications des histones. Néanmoins, la régulation de MUC4 par les petits ARN non codants, notamment par les microARN (miARN), est
totalement inconnue à l’heure actuelle.
Buts : (i) Identifier le rôle du miR-219-1-3p dans la régulation de l’expression MUC4 dans des lignées cellulaires cancéreuses pancréatiques
humaines (ii) Etudier les effets du miR-219-1-3p sur les propriétés biologiques des cellules (iii) Etablir le profil d’expression du miR-219-1-3p
dans un modèle murin de cancer pancréatique.
Matériel et méthodes : Des études in silico à l’aide des bases de données miRBase, TargetScan, Microcosm nous ont permis de sélectionner un
miARN ciblant potentiellement MUC4. L’expression de MUC4 a été étudiée par western-blotting après transfection transitoire du miARN d’intérêt
dans différents modèles cellulaires d’adénocarcinome pancréatiques humains (Capan-1, Capan-2 et BxPC-3). L’effet du miARN sur les
propriétés biologiques des cellules a ensuite été évalué in vitro (prolifération, migration et invasion).
Résultats : Grâce aux programmes de prédictions bioinformatiques, nous avons identifié deux sites de liaison putatifs pour le miR-219-1-3p
dans la région 3’-UTR de MUC4. Nous avons observé que l’expression de MUC4 est inhibée au niveau protéique après transfection des cellules
avec le précurseur du miR-219-1-3p. De plus, la sous-expression de MUC4 est associée à une diminution de l’activation des voies de
signalisation en aval de MUC4. La sur-expression du miR-219-1-3p entraîne également une inhibition de la prolifération et de la migration
cellulaires. Enfin, nos résultats montrent une diminution de l’expression du miR-219-1-3p dans des tissus tumoraux pancréatiques murins
associée à une expression aberrante de Muc4.
Conclusion : Ces travaux décrivent le miR-219-1-3p comme un régulateur négatif de l’expression de MUC4 et comme suppresseur de tumeur
dans le cancer du pancréas.
Recherche financée par la LNCC : Equipe labellisée LIGUE 2011-2013, bourse doctorale FL.
- 39 -
LANCELOT Julien
Raymond PIERCE (U 1019 - UMR 8204 éq. 02 - PIERCE Raymond)
Schistosoma mansoni sirtuins as drug targets
Julien Lancelot, Stéphanie Caby, Florence Dubois, Jacques Trolet, Martin Marek, Wolfgang Sippl, Christophe Romier, Manfred Jung &
Raymond J. Pierce
CIIL, Institut Pasteur de Lille; Inserm, U1019; Université Lille Nord de France, CNRS UMR 8204, Lille
Sirtuins are protein deacetylases that are involved in a wide variety of cellular processes including the regulation of transcription and apoptosis.
They are actively investigated as drug targets, particularly in cancer, and in the context of the SEtTReND project financed by the EC, we are
investigating the use of sirtuin inhibitors as candidate drugs against schistosomiasis. Five sirtuins, orthologues of mammalian sirtuins (Sirt) 1, 2,
5, 6 and 7, are encoded in the S. mansoni genome and we have cloned and characterized their coding sequences. Quantitative RT-PCR shows
that all five are expressed at all parasite life-cycle stages tested. Inhibitors of human Sirt1 and 2 induce apoptosis in schistosomula and the
separation of adult worm pairs maintained in culture. The production of recombinant S. mansoni (Sm) Sirt1, 2 and 6 has been initiated with the
aims of obtaining 3D crystal structures and their use in high-throughput inhibitor screening. In order to determine the biological roles of SmSirt1
we are screening for potential protein partners using a yeast two-hybrid library.
LANGLET Fanny
Bénédicte DEHOUCKE (U 837 éq. 02 - PREVOT Vincent)
Fasting-induced hypoglycemia modulates blood-brain interface in the metabolic brain and increases the access of
peripheral feeding signals to the arcuate nucleus
Fanny LANGLET1,2
1JPARC Development and plasticity of the postnatal brain, U837 INSERM, Lille, France, 2Univ Lille Nord de France, School of Medicine, Lille,
France
Although blood glucose level is known to participate to the regulation of food intake, no precise mechanisms are known to explain this
phenomenon. In this study, we test the hypothesis whether glycemia impacts on the access of blood metabolic information to the arcuate
nucleus (ARH) -known to play a key role in the regulation of energy balance. For that purpose, we focus our study on the regulation of bloodbrain interfaces and specially the median eminence (ME), a circumventricular organ located next to the ARH after fasting-induced hypoglycemia.
Indeed, the ME is characterized by numerous fenestrated vessels making it a direct target for blood-borne molecules. However, in order to
maintain hypothalamus homeostasis, blood-brain-barrier properties are shifted to specialized ependymal cells called tanycytes: ME tanycytes
that link the fenestrated vessels to the ventricle express well-organized tight junctions (TJ), the hallmark of CNS barriers.
24h fasting-induced hypoglycemia in adult male mice led to a significant increase in the number of permeable capillary loops within the
ME compared to fed mice. Remarkably, some of ME loops reached the ARH directly. This effect was accompanied by a reorganization of TJs in
ARH tanycytes. Well-organized TJs extended beyond ME tanycytes to ARH tanycytes at the same time as the appearance of fenestrated
vessels into the ARH. Importantly, fasted mice recovered a fed phenotype after refeeding. In addition, ME plasticity is inhibited by intravenous
infusion of glucose in fasted mice. Conversely, systemic administration of 2-deoxyglucose in fed mice mimicked fasting effects on ME plasticity.
Finally, neutralization of receptors of vascular endothelial growth factor (VEGF) -factor known to induce vascular permeability and which levels
increased during hypoglycemia- blocked ME plasticity in fasted mice.
Interestingly, (1) permeability studies using intravenous injections of Evans blue dye, (2) studies of leptin-induced pSTAT3 activation,
(3) microdialysis analyses of ARH fluid and (4) food intake behavior analyses showed that ME plasticity improved the access of blood-borne
molecules to the ARH.
Taken together, our data suggest that blood/brain exchanges in the “metabolic brain” may be regulated by nutritional challenges and
raise the possibility that fasting-induced hypoglycemia promotes structural changes in the ME via VEGF signaling pathway to allow circulating
factors to gain direct access to neurons within the ARH.
Supported by Gliodiabisity ANR and Ministry of Higher Education and Research of France
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LAURENT Cyril
David BLUM (U 837 éq. 01 - BUEE Luc)
Tau pathology is associated with neuro-inflammatory processes, reduced by A2A receptors blockade, in the THY-Tau22
transgenic model
Cyril Laurent1, Antoine Leboucher1, Laetitia Troquier1, Yann Monnet2, Sylvie Burnouf1, Martin Figeac3, Catherine Ledent, Nathalie Jouy3,
Pierre Fayoux4 , Raphaëlle Caillierez1, Nadège Zommer1, Dominique Demeyer1, Malika Hamdane1, Suzanna Schraen-Masche1,
Alzheimer’s disease (AD) is characterized by extracellular amyloid deposits and intraneuronal neurofibrillary tangles, made of aggregated hyperand abnormally phosphorylated Tau proteins. Neuroinflammation is considered as an important hallmark of AD. While its relationship with the
amyloid side starts to be elucidated, its interaction with Tau pathology remains ill-defined so far. In the present study, we investigated how Tau
pathology impacts on the development of inflammatory processes in a transgenic AD-like Tau pathology mouse model, the THY-Tau22 strain.
THY-Tau22 mice have been shown to exhibit progressive hippocampal Tau pathology paralleling memory deficits. Memory impairments have
been associated with synaptic defects in absence of striking neuronal death and synaptic shrinkage.
Microarray experiments and additional studies revealed hippocampal overexpression of several pro-inflammatory markers. We especially
observed significant increased expression of markers related to complement (C3), CMH-II (H2-Ab1, CD74) as well as cytokines/chemokines
(TNFα, CCL3, CCL4, CCL5). Additional experiments indicated the development of astrogliosis (GFAP), microglial activation (CD68, CD11b) and
lymphocyte infiltration (CD4+ and CD8+ T cells).
A2A receptors inhibition is known to reduce amyloid pathology and neuro-inflammation in Alzheimer’s disease patients’ brain. Interestingly, we
observed that blocking the A2A receptors with caffeine uptake or genetically, led to reduced spatial memory deficits in THY-Tau22 mice together
with decreased hippocampal inflammatory markers overexpression.
Overall, these data indicate 1) that the development of Tau pathology is associated with significant neuro-inflammatory events in THY-Tau22
mice and 2) that reducing this neuro-inflammation is associated with a decrease of behavioral alteration, and could also mitigate Tau pathology.
LEBLOND Pierre
Amélie LANSIAUX (U 837 éq. 04 - FORMSTECHER Pierre)
Cilengitide targets pediatric glioma and neuroblastoma cells through cell detachment and anoikis induction
Leblond P, Meignan S, Dewitte A, Wattez N, Lartigau E, Lansiaux A.
Unité d’oncologie pédiatrique, département de radiothérapie, et laboratoire de pharmacologie , Centre Oscar Lambret, Inserm U837, Université
Nord de France, IMPRT et IRCL, Lille.
Despite numerous clinical trials, the prognosis of children with high grade glioma (HGG), rhabdoid tumors and metastatic neuroblastoma
remains poor, indicating a crucial need for new treatments. Cilengitide (EMD 121974, Merck Kga, Darmstadt, Germany) is a selective antagonist
of αvβ3 and αvβ5 integrins, known to be involved in tumor growth, angiogenesis and metastasis development. This compound is currently
clinically evaluated in adult patients with glioblastoma multiforme, and in pediatric diffuse intrinsic pontine glioma in combination with radiation
therapy. There are very few data about integrins expression and cilengitide efficiency on pediatric tumor cells. The aim was to investigate the
effects of cilengitide in specific pediatric glioma commercial cell lines and in primary cultures of brain tumor cells from patients.
Methods : We have a wide tumor cell panel including three high grade (SF188, KNS42, UW479) and two low grade (Res259, Res186) pediatric
glioma cell lines compared with adult HGG cell line (U87MG), and four neuroblastoma cell lines (Kelly, SH-SY5Y, SK-N-AS, SK-N-DZ). Two
primary cultures of human HGG and cerebral rhabdoid tumor were initiated thanks to collaboration with the pediatric neurosurgery department of
the Lille university hospital.
Results : Flow cytometry analysis revealed various αvβ3 expression levels but no correlation with tumor grade. We noted a lack of αvβ3
expression in HGG UW479 cell line. Cell detachment assay showed that cilengitide have no effect on UW479 cells and on cells adhered on
collagen I, a non specific matrix, demonstrating its specificity. Moreover, cilengitide presents a rapid and dose dependent action on cell
detachment. Surprisingly, despite the strong detachment on U87MG cells, cilengitide presents a moderate toxicity for these cells compared to
pediatric HGG ones. Growth kinetics in non adherent conditions revealed that U87MG cells, forming floating cell clusters, are resistant to anoïkis
and thus can grow in spite of cilengitide-induced detachment, contrary to pediatric glioma cells. This result was confirmed by the inability to
determine an IC50 value for U87MG and UW479 cells. Cilengitide action on glioma cells appears dependent of αvβ3 expression and sensibility
to anoïkis, two properties found in the majority of pediatric cell lines. Thus cilengitide is able to target directly and efficiently the pediatric glioma
cells. Cilengitide was effective in at least three neuroblastoma cell lines as well. Integrin αvβ3 expression levels will be determined using flow
cytometry analysis in our neuroblastoma and rhabdoid cells and a possible correlation with cilengitide-induced cell detachment will be assessed.
Conclusion : Considering the antiangiogenic effect of cilengitide published in vivo using U87MG cells, and its better toxicity observed on pediatric
glioma cells, we can hope a strong effect on pediatric glioma in orthotopic model. Our preliminary results with neuroblastoma cells have to be
confirmed and correlated with integrin expression levels, but show for the first time that cilengitide could be effective in this disease.
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LETRONNE Florent
Jean-Charles LAMBERT (U 744 éq. 03 - LAMBERT Jean-Charles)
ADAM30, nouveau régulateur du métabolisme de l’APP
Florent Letronne, Geoffroy Laumet, Florie Demiautte, Anne-Marie Ayral, Julien Chapuis, Anaïs Mounier-Herbaut, Philippe Amouyel, JeanCharles Lambert.
INSERM U744, Institut Pasteur de Lille et Université Lille-Nord de France, Lille, France
La maladie d’Alzheimer est une pathologie neurodégénérative caractérisée par la présence d’agrégats intraneuronaux et la formation de
plaques séniles. Ces dernières résultent d’une accumulation de peptides amyloïdes (Aβx-40, Aβx-42-43) issus de la protéolyse du précurseur
du peptide amyloïde (APP) par les sécrétases (α, β, and γ). Ce métabolisme n’étant pas encore totalement caractérisé, notamment le passage
de l’APP d’un compartiment cellulaire à un autre, nous avons décidé d’étudier les ADAMs, protéines impliquées dans de nombreux processus
biologiques (développement cérébral, plasticité, réparation) ainsi que dans le métabolisme de l’APP (α-sécrétases, dégradation des Aβ).
Au laboratoire, une nouvelle métalloprotéase appartenant à la famille des ADAMs a été sélectionnée lors d’une approche transcriptomique
systématique : ADAM30 présente une diminution de son expression de près de 50% dans le tissu cérébral des malades comparé à celui des
témoins. De plus, la quantité de dépôts de peptides Aβ1-42 mesurés dans le parenchyme des patients était inversement proportionnelle à
l’expression d’ADAM30 dans leur cerveau. ADAM30 aurait un rôle dans le métabolisme de l’APP.
Nous avons confirmé cette dernière observation en constatant que la sur-expression d’ADAM30 dans les lignées SKNSH-SY5Y et HEK293
exprimant de façon stable l’APP695wt induit une diminution importante de la production de tous les métabolites de l’APP, en particulier la
sécrétion de peptides Aβ, alors que sa sous-expression (shRNA) entraîne une augmentation de leur production. Enfin, l’inactivation du site
catalytique d’ADAM30 par mutagenèse dirigée (ADAM30mut) ne permet plus d’observer son impact sur le métabolisme de l’APP.
Nous avions alors supposé que l’APP pouvait être un substrat d’ADAM30. Mais n’ayant pas pu confirmer une telle intéraction, nous avons
adopté une approche plus systématique pour rechercher les substrats d’ADAM30. Deux peptides appartenant à des protéines d’intérêt ont été
mis en évidence : l’insulin receptor subtrate 4 (IRS4) et la cathepsine D (CTSD). La cathepsine D pouvant métaboliser l’APP, nous avons donc
choisi de concentrer nos recherches sur cette protéine.
La CTSD possède une séquence protéique nécessaire pour son endoprotéolyse permettant son activation optimale. Or l’approche précédente a
montré que le site de coupure potentiel d’ADAM30 sur la CTSD correspondait à cette séquence. ADAM30 pourrait donc activer la CTSD. Pour
vérifier cette hypothèse, nous avons incubé une pro-CTSD humaine recombinante avec une ADAM30wt recombinante. Une forte augmentation
de l’activité de la CTSD est observée, ce que l’on ne retrouve pas avec ADAM30mut. Ces résultats ont été confirmés en surexprimant ADAM30
dans les HEK293-APP695wt et SKNSH-SY5Y-APP695wt. Enfin, Pour savoir si cet effet était spécifique à la CTSD, nous avons testé plusieurs
inhibiteurs de cathepsines dont un spécifique à la CTSD, la pepstatine A. L’effet d’ADAM30wt sur le métabolisme de l’APP est perdu
uniquement en présence de pepstatine A.
L’extrémité C-terminale de l’APP comporte plusieurs séquences consensus contrôlant potentiellement le trafic de l’APP vers le lysosome. Afin
d’évaluer leur rôle sur l’impact d’ADAM30 sur le métabolisme de l’APP, nous avons délété les 8 derniers aa de l’APP695wt, permettant
d’éliminer ces séquences d’adressage. La sur-expression d’ADAM30wt n’avait alors plus d’impact sur le métabolisme de l’APP. Nous avons
également réalisé une mutagenèse dirigée de la séquence consensus principale d’adressage de l’APP au lysosome. Nous avons obtenu les
mêmes résultats qu’avec la délétion précédente. Ainsi, la dégradation de l’APP dépendante d’ADAM30 semble nécessiter la séquence
d’adressage au lysosome de la partie C-ter de l’APP.
Par l’intermédiaire d’une activation de la CTSD, ADAM30 pourrait donc faciliter la dégradation de l’APP par la voie endosome/lysosome. Enfin,
l’étude du rôle d’IRS4 sur l’impact d’ADAM30wt dans le métabolisme de l’APP est en cours.
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LORENZI Rodrigo
Eric BOULANGER (EA 2693 - JUDE Brigitte)
Do RAGE ligands impair sRAGE quantification?
Rodrigo LORENZI, Nicolas GROSSIN, Christophe FLAHAUT, Sylvain DUBUCQUOI, Eric BOULANGER
Biologie du Vieillissement, EA2693, Université Lille2. Laboratoire de Physiopathologie de la BHE, Université d'Artois. UF d'Immunologie
Humorale, CHR de Lille
Introduction : The Receptor for Advance Glycation End-products (RAGE) is a membrane protein that can be activated by several ligands,
leading to pro-aging and pro-inflammatory responses. In addition to AGEs, other RAGE ligands have been described and are also associated to
inflammation. The most studied ligands are AGEs, S100 proteins, amphoterin (HMGB1) and beta amyloid peptide. Soluble RAGE (sRAGE) is
the circulating form of RAGE and acts as a decoy receptor, preventing RAGE activation. Levels of sRAGE have been widely measured in human
diseases and are found associated to them and/or their severity, thus considered many times as a biomarker. However, both positive and
negative associations are observed. We hypothesized that RAGE ligands or RAGE dimerization might impair sRAGE quantification by the
commonly used ELISA kit, by masking the epitopes recognized in the assay. We also investigated the existence of autoantibodies against
sRAGE.
Methods : To demonstrate the presence of sRAGE/ligands complexes or dimerization, we used the surface plasmon resonance (SPR). An antisRAGE is immobilized on a golden chip and serum (1:200 in running buffer) passes through the flow cell.
To evaluate the direct effect of RAGE ligands in sRAGE quantification, recombinant sRAGE (625, 1250 or 2500 pg/ml) and sera from healthy
subjects were incubated, in duplicate, with different concentrations of RAGE ligands (108µl of sample + 12µl of ligand solution) : glycated
albumin (10, 100 and 1000 μg/ml) , S100A12 (10, 100 and 1000ng/ml), S100A6 (10, 100 and 1000ng/ml), S100B (10, 100 and 1000ng/ml),
HMGB1 (1, 10 and 100ng/ml) or beta amyloid peptide (1, 10 and 100ng/ml). The incubation with all these ligands together was also performed.
sRAGE concentration was measured with Quantikine Human RAGE ELISA kit (R&D Systems).
Autoantibodies against sRAGE were quantified by a home-made ELISA protocol.
Results : We didn’t show any dimerization of sRAGE by SPR but due to the high complexity of serum we observed high levels of non-specific
binding and very low intra-assay repeatability.
Concerning the sRAGE assay, none of the tested RAGE ligands, at any tested concentration, impaired recombinant sRAGE quantification. Coincubation of all ligands was also ineffective. Optical densities varied from ±1 to ±6% in relation to control. In addition, when incubated in a
physiologic milieu, serum sRAGE quantification remains reliable. For serum sRAGE levels, the variation ranged from ±1 to ±10%, but no
statistical difference was found. We were able to quantify higher levels of auto anti-sRAGE IgG in the serum from diabetics, when compared to
healthy subjects (p<0.01). We have then to analyse the effect of auto anti-sRAGE IgG on sRAGE quantification by ELISA.
Conclusion : The RAGE ligands do not impair sRAGE quantification, even at supra-physiological concentrations. Although they might not be
involved in epitope-masking, further studies are necessary to the participation of RAGE ligands in sRAGE production and clearance. We are
currently working on hypothesis that autoantibodies against sRAGE might affect its levels.
MEAR Jean-Baptiste
Benoit GUERY (U 1019 - UMR 8204 éq. 07 - CHAMAILLARD Mathias)
Etude de la modulation de la virulence de Pseudomonas aeruginosa par Candida albicans dans un modèle de
pneumonie
Jean-Baptiste Méar
CIIL-Inserm U1019, Faculté de médecine, pôle recherche, 59045 LIlle CEDEX
Objectif : Pseudomonas aeruginosa est la première cause de pneumonies graves en réanimation. Dans un modèle murin, coloniser les voies
aériennes par Candida albicans diminue la sévérité de ces pneumonies, probablement par sensibilisation de l’immunité innée.
Matériel et méthodes : Des souris C57/Bl6 sont colonisées par C . albicans et infectées par P. aeruginosa 48h plus tard par voie intra-nasale.
La lésion pulmonaire est explorée par la perméabilité de la barrière alvéolo-capillaire à l’albumine-FITC. La réponse immunitaire est explorée
par l’analyse de la cellularité et de la réponse cytokinique des LBA. Des souris inactivées pour TLR 2, 4 et TIRAP, ou traitées par des
antagonistes du récepteur à l’IL-1ß permettent de vérifier l’implication des voies de réponse identifiées.
Résultats : La colonisation des voies aériennes par C. albicans n’entraîne aucune lésion pulmonaire et est clairée au bout de 72h. Elle
s’accompagne d’un recrutement alvéolaire et d’une activation des macrophages et des cellules NK alvéolaires significativement plus important
que dans les contrôles. Cette colonisation permet également une sécrétion d'IL-17 plus précoce et significativement plus intense lors de la
pneumonie à P. aeruginosa. En revanche, l’inactivation de la voie finale des inflammasomes par l’antagoniste du récepteur à l’IL-1ß et
l’inactivation de TLR 2, 4 et de TIRAP augmentent la sensibilité à P. aeruginosa, sans abolir l’effet protecteur.
Conclusion : L’activation précoce d'une réponse méfiée par l'IL-17 pulmonaire et le recrutement de macrophages et de cellules NK protègent
contre les pneumonies à P. aeruginosa. Les récepteurs impliqués semblent redondants. Il serait intéressant de développer des moyens
d’induction de cette réponse pour prévenir les pneumonies nosocomiales.
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MENDELEK Fady
Patrick PELAYO (EA 4488 - BERTHOIN Serge)
Relation quantitative entre les facteurs de risque individuels/professionnels et la fréquence de la douleur lombaire aiguë
Fady Mendelek
Objectifs : Étudier la relation quantitative entre la fréquence de la douleur lombaire aiguë (DLA) et les différents facteurs de risque individuels et
professionnels, et détecter les plus importants, susceptibles d'être utiliséscommearguments de poids dans les modèles prédictifs diagnostics de
la DLA, en fournissant des outils efficaces pour aider à la mise en place de stratégies de protection et de prévention des équipes hospitalières.
Méthodes : Quatorze facteurs de risque prédictifs (par exemple, âge, sexe, indice de masse corporelle IMC [kg/m2], activité domestique, etc.) et
17 facteurs de risque professionnels (par exemple, statut professionnel, heures quotidiennes passées debout, pauses quotidiennes,
insatisfaction professionnelle, etc.) ont été recueillis en utilisant un autoquestionnaire au sein de l'équipe de l'hôpital du Sacré-Coeur au Liban
(utilisé comme une étude de cas) et corrélés à la fréquence de la DLA en utilisant l'approche non paramétrique bivariée du tau b de Kendall.
Résultats : Cette étude indique que parmi les facteurs de risque professionnels étudiés, le statut professionnel, le nombre d'heures travaillées
par jour et le nombre d'heures passées debout quotidiennement sont les plus influents sur la fréquence de la DLA (hautement corrélée avec
d'autres facteurs à un niveau de risque de 1 et 5 %). Cela montre également que des corrélations statistiques fortement positives (entre 0,25 et
0,65) et fortement négatives (entre −0,38 et −0,26) existent dans la DLA entre les facteurs de risque professionnels et le nombre de jours
travaillés par semaine, le nombre d'heures passées assis par jour, le stress au travail, l'insatisfaction professionnelle, les enfants à charge, et la
conduite automobile.
Il a également été montré que le nombre d'heures hebdomadaires d'activité domestique, la taille de l'équipe et le sexe étaient les facteurs
individuels les plus importants dans l'aggravation de la pathologie de DLA. Ces facteurs individuels sont hautement corrélés à un risque de 1 %
(allant de 0,28 à 0,49 pour les corrélations positives et de −0,49 à −0,25 pour les négatives) aux soins apportés aux enfants, au poids, aux
activités extraprofessionnelles et à l'utilisation de techniques manuelles.
Conclusions : La détermination de ces corrélations bivariées peut être utilisée par des médecins experts dans le cadre du processus décisionnel
du diagnostic de DLA.
MOCHE Hélène
Dany CHEVALIER (EA 4483 - BROLY Franck)
Etude du potentiel de nanoparticules de carbure de tungstène – cobalt (WC-Co) comme témoin positif pour des tests de
génotoxicité in vitro appliqués aux nanoparticules
Moche H. 1,2, Chevalier D. 3, Platel A. 1,3, Lorge E. 2, Claude N. 2, Nesslany F. 1.
1 Laboratoire de Toxicologie, Institut Pasteur de Lille. 2 Biologie Servier – 45520 Gidy. 3 Faculté de pharmacie, Université Lille 2.
Les nanoparticules, définies comme des objets dont les trois dimensions sont comprises dans l’intervalle de 1 à 100 nm, ont des propriétés
particulières qui expliquent leurs multiples applications. Les nanotechnologies sont en effet utilisées dans de nombreux secteurs industriels, et la
question de leur toxicité, en particulier de leur génotoxicité, se pose donc actuellement. Toutefois les essais de génotoxicité couramment utilisés
pour l’évaluation des produits solubles ne semblent pas parfaitement adaptés aux nanoparticules. De plus, aucun témoin positif de référence
sous forme nanoparticulaire n’est encore disponible pour les tests de génotoxicité.
Une recherche bibliographique a mis en évidence l’utilisation de microparticules de carbure de tungstène – cobalt (WC-Co) comme témoin
positif dans le test des micronoyaux in vitro et in vivo sur des cellules pulmonaires. Cet alliage, utilisé dans l’industrie métallurgique
principalement pour la fabrication d’outils de coupe et d’usinage, est classé parmi les composés cancérogènes probables pour l’homme (2A) par
le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC).
Afin d’évaluer le potentiel comme témoin positif génotoxique de nanoparticules de WC-Co, plusieurs essais de génotoxicité in vitro ont été
réalisés. Nous avons en parallèle procédé à la caractérisation physico-chimique de ces nanoparticules, composées pour 92% de la masse de
carbure de tungstène et 8% de cobalt.
Les différents tests de génotoxicité utilisés nous ont permis d’étudier plusieurs types de dommages génétiques : les dommages primaires à
l’ADN grâce au test des comètes, les dommages au niveau chromosomique avec le test des micronoyaux et les effets mutagènes grâce au test
de mutation génique sur cellules de lymphome de souris L5178Y (test MLA-TK). Chacun de ces tests a été réalisé dans deux conditions de
traitement : après un traitement court de 4 heures et un traitement long de 24 heures. Les tests des comètes et des micronoyaux ont été
réalisés sur lymphocytes humains et dans la lignée cellulaire murine L5178Y.
Les résultats des tests des micronoyaux, positifs dans les deux types cellulaires, ont été complétés grâce à la technique d’hybridation in situ
fluorescente (FISH) avec des sondes pan-centromériques afin de distinguer les activités clastogènes et aneugènes et ainsi de définir plus
précisément le mécanisme d’action de ces nanoparticules.
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MOURAD Abbas
Philippe MATHURIN (U 995 éq. AVENIR - YAZDANPANAH Yazdan)
Modélisation de la morbi-mortalité du Carcinome HépatoCellulaire (CHC) liés au Virus de l’Hépatite C (VHC) en France :
impact du dépistage précoce et des traitements
Abbas Mourad1,2, Thibaud Renaut-Vantroys1,3, Philippe Mathurin2,3, Sylvie Deuffic-Burban1,2
1. Université Lille Nord de France, 2. Inserm U995, 3. CHRU-Huriez, Lille
Introduction : En France, environ 4000 décès par an sont dus au carcinome hépatocellulaire (CHC). Ce cancer survient sur foie cirrhotique,
principalement de maladie alcoolique (50 à 75%) ou virale, principalement l’infection à virus de l’hépatite C (VHC) (15 à 25%). La survie au CHC
est liée au stade de la tumeur et au degré d’altération de la fonction hépatique au moment du diagnostic. La maladie étant le plus souvent
asymptomatique, les patients sont diagnostiqués à un stade de gravité sévère. A l’inverse, le pronostic des formes prises en charge
précocement est amélioré par certains traitements lorsqu’il est diagnostiqué à un stade plus précoce. Les objectifs de ce projet sont d’estimer la
morbidité et la mortalité attendues des patients atteints de CHC lié au VHC (CHC-C) en France dans les 5 prochaines années et d’évaluer
l'impact d’un dépistage précoce et d’un deuxième traitement.
Matériels et méthodes : Un modèle de Markov est développé sous le logiciel TreeAge pour décrire la trajectoire des patients atteints de CHC-C
depuis le développement du CHC et jusqu’au décès. Le modèle intègre les données de prévalence et d’incidence du CHC-C issues des travaux
de Deuffic-Burban et al, (J Hepatol 2008). Le développement du CHC et sa progression sont basés sur la classification BCLC (Liovet et al,
Semin Liver Dis. 1999). Les données sur la distribution des patients dans les stades BCLC et sur la distribution des traitements du CHC sont
issues de la cohorte de l’observatoire CHANGH (Rosa et al, EASL 2010). Dans une 1ère étape, le modèle est validé d’une part sur la morbimortalité prédite entre 2001-2010, en comparant les prédictions du modèle aux données observées de décès par CHC-C (CépiDc, et Marcellin
et al, J Hepatol 2008) et de transplantations hépatiques sur CHC-C (Agence de Biomédecine), d’autre part sur la survie au diagnostic de CHC à
1, 3 et 5 ans d’après les données de la littérature (El-Serag et al, GUT 2011). Ensuite, le modèle prédit l’impact d’une augmentation du
dépistage du CHC et/ou du dépistage du VHC sur l’incidence de la mortalité par CHC entre 2012 et 2016 selon 5 scénarios : S1) pas de
dépistage précoce du CHC (0%) et dépistage actuel du VHC (67%), S2) dépistage précoce actuel du CHC (75%, c.-à-d. 88% des cirrhoses bien
diagnostiqués et 85% des cirrhoses diagnostiquées suivies dans un processus de dépistage du CHC) et dépistage actuel du VHC (67%), S3)
dépistage précoce idéal du CHC (97%) et dépistage actuel du VHC (67%), S4) dépistage précoce actuel du CHC (75%) et dépistage idéal du
VHC (75%) et S5) dépistage précoce idéal du CHC (97%) et du VHC (75%).
Résultats : Le modèle s'ajuste bien aux données observées en termes de décès par CHC (écarts ≤ 3%) et de transplantations hépatiques
(écarts ≤ 4%). De plus, les taux de survie prédits par le modèle à 1%, 3% et 5% sont proches de celles estimées dans la littérature. Le
dépistage du CHC actuel va permettre de réduire les décès par CHC de 5.17% sur 5 ans (p < 0.0001 ; S2 vs. S1), soit 417 décès évités.
Cependant, avec les pratiques actuelles de dépistage, 55% des patients restent dépistés à un stade avancé de la maladie. Le renforcement du
dépistage à 97% permettrait de réduire la mortalité globale des tous les patients de 1.53% sur 5 ans (p = 0.023 ; S3 vs. S2), soit 124 décès
évités. Dans le sous groupe des patients avec CHC sur VHC dépisté, ce renforcement permettrait de réduire la mortalité globale de 3.2% sur 5
ans. Le renforcement du dépistage du VHC à 75% permettrait de réduire la mortalité globale du CHC de 0.86% (p = 0.2 ; S2 vs. S4), soit 69
décès évités. Le renforcement du dépistage de CHC à 97% et du VHC à 75% permettrait de réduire la mortalité globale du CHC de 2.64% (p <
0.001; S2 vs. S5), soit 213 décès évités.
Conclusion : La plupart des patients sont diagnostiqués à un stade avancé. Augmenter le dépistage précoce du CHC ou du VHC dans la
pratique clinique actuelle est plutôt modeste sur la réduction de la mortalité liée au CHC.
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OLEJNIK Cécile
Guillaume PENEL (EA 4490 - HARDOUIN Pierre)
Analyse Raman des modifications moléculaires induites in vivo par les biphosphonates sur le tissu osseux mandibulaire
Cécile OLEJNIK, Guillaume FALGAYRAC, Alexandrine DURING, Sophie DESMONS, Marie-Hélène VIEILLARD, Jean Michel MAES, Bernard
CORTET, Guillaume PENEL
Physiopathologie des Maladies Osseuses Inflammatoires, EA 4490, Lille, Université Lille Nord de France
Contexte : Les biphosphonates (BP) sont des médicaments couramment utilisés dans le traitement des pathologies osseuses bénignes
(ostéoporose) et malignes (myélome, métastases osseuses). Ils permettent d’augmenter la masse osseuse et la résistance à la fracture par leur
action inhibitrice sur le remodelage et la résorption osseuse. Ils ont un rôle sur l’augmentation et l’homogénéisation de la densité de
minéralisation osseuse. Cependant leurs effets au long terme semblent également causer une minéralisation secondaire excessive et
influencent les propriétés mécaniques et la qualité osseuse. L’impact de cette interaction BP/os sur la qualité osseuse (microarchitecture,
ultrastructure et notamment composition moléculaire) sont peu connus. Une meilleure connaissance des effets moléculaires des BP sur le tissu
osseux dans les conditions biologiques est nécessaire pour mieux comprendre leurs propriétés et optimiser leur utilisation.
Objectifs : Évaluer d’une part les modifications moléculaires induites par l'incorporation des BP à la matrice osseuse et, d’autre part, les
conséquences sur la qualité osseuse à partir d’un modèle animal et de séquestres osseux de patients traités par BP.
Méthodes d’analyse : Étude par microspectrométrie Raman des modifications moléculaires globales du tissu osseux à la fois des compartiments
minéral et organique : les paramètres physico-chimiques (rapport minéral/organique, taux de carbonatation et cristallinité) sont évalués. En
complément, des analyses chimiométriques discriminantes sont réalisées pour permettre le traitement de données spectrales nombreuses et
complexes du fait de l’hétérogénéité du tissu osseux. Analyse complémentaire par Microscopie Electronique à Balayage Environnemental
(MEBE) : le taux et l’hétérogénéité de la minéralisation sont étudiés à partir de la teneur élémentaire en calcium.
Mise au point du modèle animal : Évaluation de l’action in vivo d’un amino-BP, le zolédronate (ZA), selon des doses et modalités
d’administration contrôlées. Un modèle de cicatrisation de défaut osseux standardisé est réalisé chez le rat adulte (Sprague Dawley) au niveau
du calvaria afin de majorer l’incorporation du BP dans une zone déterminée. Au maximum du remodelage osseux, trois modalités sont testées
(ZA vs solution saline) : l’équivalent au traitement de l’ostéoporose en doses uniques ou fractionnées et l’équivalent à 6 mois de traitement pour
l’ostéolyse maligne. Un double marquage fluorescent aux cyclines localise la zone d’os néoformé au moment de l’injection de ZA. Cette zone
d’intérêt est analysée par microspectrométrie Raman et par MEBE.
Échantillons cliniques : Étude de séquestres d’os mandibulaire de patients souffrant d'ostéonécrose des maxillaires induite par BP (ONM). Ces
cas d'ONM, connus comme une complication rare, constituent un modèle de forte accumulation de BP. Ils sont comparés à des pièces
anatomiques constituant le groupe témoin.
Résultats cliniques : Les résultats obtenus montrent des variations des paramètres physico-chimiques, avec augmentation de la minéralisation,
diminution de carbonatation et tendance à la diminution de la cristallinité suite au traitement par BP. Des variations pour ces paramètres entre
pathologies bénignes et malignes semblent se distinguer au sein du groupe BP. Les analyses chimiométriques permettent une bonne
discrimination des groupes BP et témoin. Les bandes Raman spécifiques à chaque groupe ont été déterminées : le groupe témoin est
notamment caractérisé par les carbonates de type B et le contenu organique.
Perspectives : Les variations des paramètres physico-chimiques observés entre les échantillons cliniques bénins et malins soulignent à la fois
l’influence du BP utilisé (mode d’action et affinité variable) mais aussi de la durée de traitement. L’analyse des données sur le modèle animal
mis au point (en cours d’acquisition) permettra de clarifier ce point et de déterminer l’influence de la dose cumulée et des modalités
d’administration.
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OUSSAIDENE Kahina
Patrick MUCCI (EA 4488 - BERTHOIN Serge)
Implication de l’oxygénation cérébrale dans la limitation de l’exercice musculaire durant un exercice progressif maximal
Kahina Oussaidene1, Fabrice Prieur2, Semah Tagougui1, Valerie Bougault1, Benoit Borel1 et Patrick Mucci1
1Université Lille Nord de France, 2Laboratoire AMAPP, EA 4248, Université d'Orléans, Orléans, France,
Introduction : Récemment, il a été montré que l’oxygénation cérébrale varie avec l’intensité d’exercice musculaire : celle-ci diminue à partir de
hautes intensités au cours d’un exercice progressif maximal (1). D’autre part, Amann et al (2) ont suggéré qu’une diminution de l’oxygénation
artérielle pouvait altérer la commande motrice centrale en limitant la performance musculaire. Suivant cette hypothèse, notre objectif était
d’étudier l’implication de la disponibilité en oxygène au niveau cérébral comme facteur limitant de l’exercice incrémental en comparant l’évolution
de ce paramètre et de la performance motrice en normoxie et en hyperoxie.
Méthode : Huit sujets modérément actifs, ne pratiquant pas une activité physique régulière (moyenne ± SD: âge 27 ± 6 ans, masse 77 ± 6 kg,
taille 180 ± 5 cm, activité physique ≤ 3h/semaine, consommation maximale d’oxygène (VO2max = 3,49 ± 0,48 L.min-1)), ont réalisé deux
exercices maximaux et progressifs (20W/min) sur un cyclo-ergomètre jusqu’à l’incapacité de soutenir l’exercice demandé. Les deux tests étaient
réalisés en rampe et de façon randomisée en normoxie (FIO2 = 0,21) pour l’un et en hyperoxie (FIO2 = 0,30) pour l’autre. L’oxygénation
cérébrale (COx) a été évaluée par la spectroscopie du proche infrarouge (Oxymon MKIII, Artinis) en même temps que les échanges gazeux
pulmonaire et la saturation de l’hémoglobine artérielle en oxygène. Le seuil de compensation respiratoire (RCP) et le seuil de diminution de
l’oxygénation cérébrale (ThCox) ont été déterminés durant l’exercice pour chaque sujet et dans chaque condition d’ambiance gazeuse.
Résultats : L’hyperoxie a augmenté significativement la puissance maximale développée (Pmax : 319 ± 28vs. 302 ± 20 W) en comparaison à la
normoxie (P<0.05). Dans les deux conditions, ThCox apparaissait à partir de très hautes intensités d’exercice (> 90% Pmax), proches de RCP,
jusqu’à l’atteinte à Pmax d’un niveau minimum d’oxygénation cerébrale d’exercice qui n’était pas différent entre l’hyperoxie et la normoxie (COx
:5,56 ± 4,73 vs. 4,73 ± 6,30 μM, respectivement). ThCox apparaissait pour de plus hautes intensités (288 ± 30 vs. 259 ± 23 W., P<0.05) en
hyperoxie vs. normoxie. Ce décalage était significativement corrélé avec l’amélioration de Pmax (r = 0.71, P<0.05).
Discussion : Dans les deux conditions, COx diminuait à partir de RCP, ce qui est en accord avec l’implication de l’hyperventilation dans la
désoxygénation cérébrale durant l’exercice (3). La corrélation significative entre le décalage de ThCox et l’amélioration de la performance
maximale atteinte avec l’hyperoxie supporte le rôle de l’oxygénation cérébrale dans la limitation de l’exercice chez les sujets actifs. L’absence de
différence de COx à la fin de l’exercice maximal dans les deux conditions suggère l’atteinte d’un niveau critique d’oxygénation cérébrale à la fin
de l’exercice.
Références : 1. Rupp T, & Perrey S. (2008). Eur J Appl Physiol, 102, 153-163.
2. Amann M, Eldridge MW, Lovering AT, Stickland MK, Pegelow DF, Dempsey JA. (2006). J Physiol, 575, 937-952.
3. Rooks CR, Thom NJ, McCully KK, Dishman RK. (2010). Progress Neurobiol, 92, 134-150.
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PETIT Florence
Muriel HOLDER-ESPINASSE (U 837 éq. 05 - VAN SEUNINGEN Isabelle)
Les malformations embryonnaires d’origine génétique touchant les membres : Contribution à l’étude de l’hétérogénéité
génétique du syndrome de Nail Patella.
F Petit1,2,3, F Escande2, AS Jourdain2, J Andrieux4, N Porchet2,3, S Manouvrier1,3, M Holder1,3
1 Clinique de Génétique médicale, CHRU LILLE, 2 Laboratoire de Biologie moléculaire, CHRU LILLE, 3 Faculté de Médecine et Université Lille
Nord de France
Le syndrome Nail-Patella (NPS) est une onycho-ostéo-dysplasie héréditaire transmise selon un mode autosomique dominant. Sa prévalence est
de 1 sur 50 000 individus. Les signes cliniques incluent des anomalies squelettiques caractéristiques (dysplasie des ongles, hypo- ou aplasie
des rotules, exostoses des ailes iliaques, dysplasie de la tête radiale…), qui s’associent fréquemment à des complications rénales et oculaires.
Le NPS est lié à des mutations du gène LMX1B localisé en 9q34.1. Ce gène contient 8 exons et s’étend sur 95 kb. Il code un facteur de
transcription de 372 acides aminés, contenant deux domaines LIM et un homéodomaine HD, essentiel à de nombreux phénomènes
développementaux
Au niveau des membres, LMX1B est impliqué dans la voie de signalisation nécessaire à l’établissement de l’axe dorso-ventral et dans la
trajectoire des axones des motoneurones destinés aux muscles extenseurs. Au niveau rénal, ses transcrits sont retrouvés en abondance au
cours du développement embryonnaire, mais aussi chez l’adulte. Les modèles animaux ont permis de montrer que le facteur de transcription
Lmx1b joue un rôle dans la morphogenèse et le maintien de la membrane basale glomérulaire. Au niveau oculaire, LMX1B est exprimé au cours
du développement de la chambre antérieure et aurait un rôle essentiel dans son homéostasie.
Des mutations entraînant une haploinsuffisance de LMX1B sont identifiées chez 85 à 90% des patients présentant un NPS typique. Il s’agit de
mutations non-sens ou décalant le cadre de lecture, de délétions intra-géniques ou emportant l’ensemble du gène, ou plus rarement de
mutations faux-sens situées dans les domaines LIM ou HD. Chez environ 10 à 15% des patients, aucune mutation ou délétion de LMX1B n’est
mise en évidence et la cause de la pathologie reste inconnue.
A partir de l’étude de 5 familles de NPS typique pour lesquelles aucune mutation du gène LMX1B n’a été identifiée par les techniques
diagnostiques de routine (recherche de mutation dans les exons et séquences introniques flanquantes par PCR-séquence, recherche de
réarrangement génique par MLPA et CGH-array), nous avons poursuivi les investigations dans le but d’identifier l’anomalie moléculaire
responsable et d’étudier les mécanismes impliqués.
Dans un premier temps, une étude de liaison par analyse de marqueurs microsatellites dans les différentes familles nous a permis de montrer la
non-exclusion du locus LMX1B. Au vu de ces résultats, une stratégie par séquençage des régions non codantes du gène (régions 3’ et 5’-UTR,
promoteur et introns) a été mise en place. Compte tenu de la grande taille du gène et de la présence d’un intron 2 de 75 kb, le recours à des
techniques de séquençage de nouvelle génération et de PCR longues couvrant l’ensemble du gène en fragments chevauchants de 10 kb a été
nécessaire. Les régions promotrices et introniques hautement conservées au cours de l’évolution ont été analysées en priorité. L’identification
de variants ségrégant avec le phénotype nécessitera secondairement une validation fonctionnelle.
L’étude de liaison ne permettant pas d’exclure l’hypothèse d’une hétérogénéité génétique, une recherche de déséquilibre allélique par étude de
polymorphismes sur transcrits va être réalisée. En fonction des résultats obtenus, nous étudierons l’implication possible d’autres gènes du
développement codant des protéines impliquées dans la voie de signalisation de LMX1B selon les données de la littérature. Si cette approche
n’aboutissait pas, une analyse de l’exome entier, dont la puissance a déjà été démontrée pour d’autres affections, serait envisagée.
Les retombées attendues de ce travail sont d’une part de permettre une prise en charge des familles actuellement étiquetées comme négatives,
et d’autre part une meilleure connaissance des régions fonctionnelles du gène LMX1B et de ses partenaires au cours du développement.
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PINETON DE CHAMBRUN Guillaume
Jean-Frédéric COLOMBEL (U 995 éq. 01 - DESREUMAUX Pierre)
La caspase-8 participe au maintien de la barrière intestinale en contrôlant d'adhésion des cellules épithéliales
intestinales en présence d'un stimulus infectieux
Guillaume Pineton de Chambrun
Introduction : La caspase-8 est une protéase à cystéine classiquement impliquée dans la régulation de l’apoptose. Récemment, la caspase-8 a
aussi été impliquée dans la régulation de l’adhésion et la migration des cellules tumorales in vitro. Les conséquences physiopathologiques de
ces nouvelles propriétés de la caspase-8 au niveau intestinal sont encore méconnues.
But : Etudier le rôle de la caspase-8 dans la régulation de l'homéostasie de la barrière intestinale et sa réponse au stimuli infectieux, in vivo,
chez la souris.
Matériels et méthodes : Des souris inactivées pour la caspase-8 au niveau des cellules épithéliales intestinales ont été utilisées (casp8ΔIEC). La
morphologie de la muqueuse intestinale colique et de l'intestin grêle des souris casp8ΔIEC a été analysée avant et après stimulation par des
agents infectieux et comparée à celle des souris contrôles.
Résultats : Le développement des souris casp8ΔIEC était normal et à 6 semaines de vie ces souris ne présentaient pas d'anomalie
macroscopique ou microscopique au niveau de l'intestin grêle et du colon par rapport aux souris contrôles. Après infection par Citrobacter
rodentium, une bactérie gram négative utilisée comme modèle murin d'infection intestinale, les souris casp8ΔIEC présentaient une perte de
poids et une mortalité significativement plus importante que les souris contrôles chez qui C. rodentium n'entraine habituellement qu'une perte de
poids minime, sans mortalité. Microscopiquement, les souris casp8ΔIEC présentaient des lésions inflammatoires coliques et greliques majeures
qui étaient absence chez le souris contrôles. Afin de mieux caractériser les mécanismes responsables de cette susceptibilité des souris
casp8ΔIEC, un modèle de stimulation par du lipopolysaccharide (LPS) bactérien était utilisé. Quatre heures après l'injection intra péritonéale de
LPS, les souris casp8ΔIEC présentaient une dilatation majeure de l'intestin grêle avec une perte de fluide très importante au niveau de la
lumière intestinale. Microscopiquement, il existait au niveau de l'intestin grêle une perte d'adhérence des cellules épithéliales intestinales par
rapport à la membrane basale, avec détachement cellulaire vers la lumière intestinale et inflammation muqueuse majeure en résultant. Ce
phénotype était dépendant de l'activation du récepteur au TNFα, TNFR1, sachant que les souris doublement inactivées pour caspase-8 et
TNFR1 étaient protégées de ce phénotype. Sur le plan mécanistique, il existait une absence de clivage de l'adaptine-α, protéine faisant partie
du complexe d'endocytose, dans la muqueuse intestinale des souris casp8ΔIEC, alors que celle-ci était clivée chez les souris contrôles, après
stimulation par le LPS. L'absence de contrôle négatif de l'endocytose entrainait chez les souris casp8ΔIEC une diminution de l'expression des
integrines-β1 au niveau du pole basal des cellules épithéliales intestinales. L'implication de l'endocytose était confirmée par l'absence de
phénotype après injection de LPS chez des souris casp8ΔIEC traitées par chlorpromazine, un inhibiteur de l'endocytose membranaire. La
diminution d'expression des molécules d'adhésion était due à la dégradation probable de ces protéines par un processus autophagique.
Effectivement, les souris doublement inactivée pour caspase-8 et atg-7, un constituant indispensable de la machinerie autophagique, au niveau
des cellules épithéliales intestinales, étaient protégées du phénotype après injection de LPS et infection par C. rodentium. Finalement, à plus
long terme, certaines souris casp8ΔIEC présentaient une perte de poids spontanée avec apparition de sang dans les selles.
Macroscopiquement et microscopiquement, ces souris malades présentaient une iléocolite inflammatoire mimant la localisation et les
caractéristiques morphologique de l'iléocolite de la maladie de Crohn humaine.
Conclusions : La caspase-8, au niveau des cellules épithéliales intestinales, contrôle l'adhésion cellulaire en limitant l'endocytose et la
dégradation autophagique des molécules d'adhésions en réponse à un stimulus infectieux. L'absence de caspase-8 au niveau des cellules
épithéliales intestinales entraine chez la souris le développement d'une iléocolite spontanée très similaire à la maladie de Crohn chez l'homme.
Ce travail, tout en précisant les fonctions de la caspase-8, in vivo, au niveau des cellules épithéliales intestinales, met en évidence son rôle
majeur dans le maintien de l'homéostasie muqueuse et le déclenchement de l'inflammation intestinale.
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PLOMHAUSE Lucie
Christelle MONACA-CHARLEY (EA 4559 - BOUCART Muriel)
Troubles du comportement en sommeil paradoxal associés au Mild Cognitive Impairment. Peut-on toujours parler d’une
forme “idiopathique” ?
Plomhause L., Dujardin K., Boucart M., Delliaux M., Defebvre L., Derambure P., Monaca-Charley C.
Univ Lille Nord de France, F-59000 Lille, France; EA 4559, F-59000 Lille, France ; CHRU Lille, F-59000 Lille, France
Introduction : Un grand nombre de patients présentant des troubles du comportement en sommeil paradoxal (TCSP) développe dans un second
temps une pathologie neurodégénérative de type synucléinopathie telle que la maladie de Parkinson (MP). Des troubles cognitifs sans démence
allant d’un trouble isolé (trouble dysexécutif, trouble des fonctions visuospatiales) au Mild Cognitive Impairment (MCI), ont été décrits chez des
patients présentant des TCSP dits idiopathiques (TCSPi).
Objectif : Mettre en évidence un profil de fonctionnement cognitif chez les patients avec TCSPi, notamment sur le plan visuospatial, pouvant
être évocateur d’un risque d’évolution vers une démence.
Méthode : Nous avons évalué les fonctions cognitives et plus particulièrement les fonctions visuospatiales de 15 patients présentant des TCSPi
et de 20 sujets témoins sains. Ces évaluations comportaient des tests neuropsychologiques validés, mais également 2 tâches informatisées
analysant les composantes perceptive et attentionnelle du traitement visuospatial (identification de figures fragmentées et capture
attentionnelle).
Résultats : En comparaison du groupe contrôle, les patients avec TCSPi présentent une atteinte du traitement visuospatial, à la fois des
composantes attentionnelle et perceptive. Huit des 15 patients avec TCSPi (53%) présentent les critères de MCI. L’analyse des 2 sous-groupes
de patients avec TCSPi a permis de mettre en évidence des troubles visuospatiaux plus importants chez les patients avec TCSPi associés au
MCI que chez les patients avec TCSPi sans MCI.
Conclusions : Les évaluations cliniques ont permis de mettre en évidence la présence de troubles cognitifs légers sans démence de type MCI
chez des patients présentant des TCSPi. L’association entre TCSP, MCI et troubles visuospatiaux, pourrait être un facteur de risque d’évoluer
vers un processus neurodégénératif. La forme « idiopathique » de TCSP est ainsi en partie remise en cause. Sur le plan clinique, ces patients
devraient bénéficier d’un suivi particulier dans le cadre d’une prise en charge précoce de patients à risque d’évoluer vers une démence.
PONTANA François
Martine REMY-JARDIN (EA 2694 - DUHAMEL Alain)
Low-dose low-kilovoltage chest CT angiography using iterative reconstruction vs standard-dose filtered back projection
CT: Evaluation of image quality in 80 patients
François Pontana, Julien Pagniez, Alain Duhamel, Thomas Flohr, Jean-Baptiste Faivre, Jacques Remy, Martine Remy-Jardin
Department of Thoracic Imaging, Hospital Calmette (EA 2694); University Lille Nord de France, Lille, France
Purpose : To evaluate image quality of low-dose low-kilovoltage chest CT angiography using iterative reconstruction in comparison with
standard-dose standard-kilovoltage filtered back projection (FBP) CT.
Materials and methods : This prospective study had institutional review board approval; informed consent was waived. Eighty consecutive
patients, referred for a follow-up chest CT angiographic examination, underwent a low-dose CT examination (Group 2) in similar technical
conditions to those of the initial examination (Group 1), except for (a) the kilovoltage selection reduced by 20kV with adaptation of the
milliamperage to ensure a 50% reduction of the CTDI; and (b) the replacement of regular FBP by iterative reconstruction using the SAFIRE
algorithm.
Results : Compared with Group 1, Group 2 scans showed: (a) significantly less objective noise, measured at the level of the trachea on
mediastinal images and lung parenchymal images (p<0.0001) and no significant difference in the objective noise measured at the level of the
aorta on mediastinal images (p=0.5071); (b) significantly higher signal-to-noise and contrast-to-noise (p<0.0001) ratios; (c) a similar visual
perception of noise on mediastinal (p=0.1317) and lung images (p=0.3657), mainly rated as moderate; and (d) a similar overall subjective image
quality (p=0.4054).
Conclusion : The raw-data-based iterative reconstruction technique provided an equivalent subjective and improved objective image quality in
low-kilovoltage half-dose CT angiograms compared to standard-dose FBP CT examinations for an average DLP of less than 80 mGy.cm in the
studied population.
Advances in knowledge :
1-Compared with the standard convolution filtered back projection reconstruction algorithm, the raw-data-based iterative reconstruction algorithm
(Sinogram Affirmed Iterative Reconstruction; SAFIRE) yields significantly lower noise and improved signal-to-noise and contrast-to-noise ratios
at low tube energy (80 kVp and 100 kVp) CT pulmonary angiography (CTPA) with reduced radiation dose.
2- CTPA can be obtained with a mean DLP of less than 80 mGy.cm in a population with a mean body mass index of 25 kg/m2.
Implications for patient care:
1-The SAFIRE algorithm provides diagnostic image quality of low-kilovoltage pulmonary CT angiograms in a wide range of body morphotypes.
2- Using raw-data-based iterative reconstruction, it is possible to reduce dose while improving vascular enhancement on low-dose chest CT
angiograms in routine clinical practice.
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POREZ Geoffrey
Dean HUM (U 1011 - STAELS Bart)
The inflammatory acute phase proteins orosomucoids are regulated by the nuclear bile acid receptor FXR
Porez G, Gross B, Prawitt J, Staels B, Lefebvre P.
FXR (Farnesoid X Receptor) is a transcription factor belonging to the nuclear receptor superfamily. FXR is expressed in several tissues such as
liver, intestine, the vascular wall, pancreas or kidney. FXR is transcriptionally activated by bile acids and synthetic analogs such as GW4064.
Activated, FXR binds to FXR response elements (FXRE) either as a monomer or as an heterodimer with the retinoid X receptor (RXR). FXR is
implicated in the regulation of several metabolic pathways such as bile acids homeostasis, glucose metabolism or lipid metabolism.
Furthermore, FXR transcriptional activity can be modulated by post-transcriptional modifications like phosphorylation or acetylation.
Orosomucoids (or alpha acid glycoprotein) are members of the lipocalin family and is one of the most abundant proteins in the plasma. Three
isoforms of Orm occurs in mice (Orm1, Orm2 and Orm3) and two in humans (ORM1 and ORM2). ORMs belong to the acute phase protein
family, are expressed by hepatocytes and secreted into the plasma after tissue injury, infection or inflammation. ORM possesses various
functions: they inhibit mitogen-induced proliferation of lymphocytes and aggregation of neutrophils. Mechanisms driving these processes are not
well understood and are known to protect liver from inflammation. As other members of the lipocalin family, ORMs are able to interact with and
to transport hydrophobic molecules (fatty acid, retinoids, lysophosphatidylcholine and biliverdin) in the circulation.
In order to identify genes regulated by FXR in the liver, we compared transcriptone of WT mice to that of FXR liver specific KO (LKO) mice in by
Affymetrix microarray. Affymetrix data showed that most of the members of the lipocalin family are dysregulated in FXR LKO mice. These results
were confirmed by RT-QPCR experiments. To determine which genes are regulated by FXR, we treated wild type and FXR LKO mice with a
FXR agonist taurocholic acid (TCA). ORMs were upregulated by TCA in wild type mice, but not in FXR LKO mice, whereas others lipocalin
genes were regulated by TCA both in wild type mice and in FXR LKO mice. This indicated that only ORMs are regulated by FXR. FXR is also
highly expressed in the intestine. We analysed ORMs expression in the intestine of TCA-treated mice. In contrast to liver, FXR activation did not
result in ORM upregulation. Similarly, FXR activation in several human hepatic cell lines (IHH, HepG2 and HepaRG) did not modify ORM1 and
ORM2 expression.
In conclusion, ORMs are regulated in mice but not in human by FXR in a tissue-specific manner. Since a FXRE was found upstream of the
mouse ORM1 promoter, gel shift and functional experiments will be performed to characterize this tissue- and species-specific enhancer.
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POTEY Camille
Régis BORDET (EA 1046 - BORDET Régis)
La modulation des interactions entre leucocytes et endothélium vasculaire intervient-elle dans l’effet neuroprotecteur
des statines?
Potey C, Ouk T, Gautier S, Bordet R.
EA1046, Département de Pharmacologie, Faculté de Médecine, Université Lille Nord de France
L’accident vasculaire cérébral, en particulier d’origine ischémique, est un problème majeur de santé publique, face auquel l’arsenal
thérapeutique disponible reste très limité. De plus, sa physiopathologie est complexe et fait intervenir différents acteurs, elle en effet va
concerner l’unité neurogliovasculaire dans son ensemble, ainsi que de nombreux processus délétères, dont l’inflammation. Dans ce contexte,
l’intérêt s’est donc porté vers le développement de stratégies thérapeutiques globales, comme les inhibiteurs de l’HMG-CoA-réductase, ou
statines, dont l’action neuroprotectrice découle de leurs effets pléiotropes.
L’objectif de cette étude est d’évaluer l’effet anti-inflammatoire et la modulation des interactions entre paroi vasculaire et leucocytes
secondairement à l’administration d’un traitement par statine après ischémie cérébrale, ainsi que le bénéficeglobal observé en termes de
récupération fonctionnelle.
Pour cela, des souris mâles C57BL6 ont été soumises à une heure d’ischémie cérébrale par occlusion filamenteuse de l’artère cérébrale
moyenne droite, puis traitées oralement par véhicule (groupe Veh) ou atorvastatine à la dose de 10 et 20 mg/kg/jour (groupes AT10 et AT20)
pendant 24 ou 72 heures. Les animaux opérés non ischémiés (groupes sham) suivent le même protocole, à la différence que le filament occlusif
n’est pas mis en place lors de la chirurgie. La récupération fonctionnelle est évaluée par quatre tests : score neurologique, grip test, hanging
wire test et test du retrait de l’adhésif, à 24 et 72 heures après ischémie/reperfusion, tout comme le volume d’infarctus et l’analyse par
immunohistochimie des marqueurs de l’adhésion leucocytaire et de l’infiltration tissulaire (ICAM-1, myéloperoxydase). L’évaluation de la
réactivité vasculaire ex-vivo sur artère cérébrale moyenne isolée a été réalisée à 72 heures de reperfusion uniquement.
Le traitement aigu par atorvastatine est à l’origine d’une diminution du volume d’infarctus chez les animaux traités. A 72 heures de reperfusion
cette différence est de 27% chez les animaux traités à la dose de 20 mg/kg/jour (moyenne +/- déviation standard 28,93 +/- 11,64 mm3, p<0,05
vs Veh) et de 8% dans le groupe traité à 10 mg/kg/jour (36,66 +/- 6,87 mm3, NS) par rapport aux animaux traités par véhicule seul (39,70 +/9,82 mm3). Cette diminution était associée à une meilleure récupération fonctionnelle chez les animaux traités (score neurologique moyen +/déviation standard à 72 heures de reperfusion : AT20 1,07 +/- 0,96, p<0,001 vs Veh ; AT10 2,29 +/- 1,14, NS ; Veh 2,33 +/- 0,90), mise en
évidence dans chacun des tests réalisés. Par ailleurs, il n’existait pas de différence dans le nombre de cellules immunopositives pour ICAM-1 ou
pour la myéloperoxydase, ne mettant pas en évidence d’impact de l’atorvastatine sur l’adhésion et l’infiltration des polynucléaires neutrophiles à
72 heures de reperfusion. Enfin, le traitement par atorvastatine ne procurait qu’une protection modeste contre la dysfonction endothéliale postischémique.
Dans cette étude, nous mettons en évidence un effet neuroprotecteur de l’atorvastatine quand elle est administrée après ischémie cérébrale
chez la souris. Ces résultats, suggérant une action limitée sur l’adhésion et l’infiltration leucocytaire, ainsi qu’une protection endothéliale
modeste, laissent à penser que la modulation des interactions entre leucocytes et endothélium vasculaire n’est pas une voie majeure impliquée
dans l’effet neuroprotecteur des statines.
- 52 -
PREAU Sébastien
Rémy NEVIÈRE (EA 4484 - NEVIÈRE Rémy)
MACROPHAGE MIGRATION INHIBITORY FACTOR INDUCES CONTRACTILE AND MITOCHONDRIA
DYSFUNCTION BY ALTERING CYTOSKELETON NETWORK IN THE HUMAN HEART
Sébastien PREAU (MD), Xavier MARECHAL (PhD), David MONTAIGNE (MD, PhD), Remi NEVIERE (MD, PhD)
Département de Physiologie (EA 4484), Faculté de Médecine, Université Lille, IFR 114 (IMPRT), Lille, France
Objective: Macrophage migration inhibitory factor (MIF) has been recognized as a potent pro-inflammatory mediator that may induce myocardial
dysfunction. Putative mechanisms by which MIF affects cardiac function are not completely elucidated, yet macrophage migration inhibitory
effects have been related to changes in cytoskeleton architecture. We hypothesized that MIF-induced myocardial depressant effects and
mitochondrial respiration deficit could be the result of cardiomyocyte microtubule dynamics alterations.
Design: Prospective, randomized, controlled study.
Setting: Experimental cardiovascular laboratory, University hospital.
Subjects: Freshly obtained human myocardial (atrial) trabeculae.
Interventions: Human atrial trabeculae were obtained at the time of cardiac surgery. Cardiac fibers were suspended in organ baths and field
stimulated, and the developed force was recorded. After equilibration, MIF (100 ng/mL) was added to the bath for 60 min, in the presence or not
of colchicine (10μM) and paclitaxel (10μM) pretreatment.
Measurements and Main Results: Maximal active isometric tension curve was studied and developed isometric force was measured and
normalized per trabeculae cross-sectional area. Trabeculae were then permeabilized and transferred to chambers of a high-resolution oxygraph
for measurements of respiration rates. Cardiac ultra structure evaluation by electron microscopy and visualization of βIV-tubulin staining by
confocal microscopy were used to evaluate sarcomere and microtubule disarray. Compared with controls, MIF (100 ng/mL for 60 min) elicited
cardiac contractile and mitochondrial dysfunction, which were largely prevented by pre-treatment with colchicine, a microtubule-depolymerizing
agent, but not by paclitaxel, a microtubule-stabilizing agent. Pre-treatment with colchicine prevented MIF-induced microtubule network
disorganization, excessive tubulin polymerization and mitochondrial fragmentation.
Conclusions: MIF depresses human myocardial contractile function and impairs mitochondrial respiration. Changes in microtubule network likely
promote MIF-induced cardiac dysfunction by 1) interfering with mitochondrial tubular assembly and outer membrane permeability for adenine
nucleotides leading to energy deficit, and 2) excessive tubulin polymerization that may impede sarcomere motion and lead to contractile
depression.
RAIBAUT Laurent
Oleg MELNYK (UMR 8161 éq. 01 - MELNYK Oleg)
Bis(2-sulfanylethyl)amino Native Peptide Ligation: A novel tool for protein total synthesis
Laurent Raibaut, Julien Dheur, Nathalie Ollivier, Reda Mhidia, Aurélie Vallin , Annick Blanpain and Oleg Melnyk*
*UMR 8161 CNRS, Institut de Biologie de Lille, 1 rue du Pr. Calmette, 59021 Lille, France .
The total chemical synthesis of native or modified proteins is gaining increase importance in the study of protein function, but also in the
development of protein therapeutics. It is usually achieved by assembling in water unprotected peptide blocks using so-called native peptide
ligation methods.
Recently, our group has developped a novel native peptide ligation method based on a peptide featuring a bis(2-sulfanylethyl)amido (SEA)
group on its C-terminus in reaction with a cysteinyl peptide in water at pH 7.[1] Interestingly, SEA peptides are easily prepared using standard
Fmoc/tert-butyl solid phase peptide synthesis procedures.
Besides this, SEA peptides were found to constitute a useful platform for thioester synthesis. Indeed, SEA peptides can be converted efficiently
into thazolidine thioester peptides,[2] by reaction with glyoxylic acid at pH 1, or into 3-mercaptopropionic acid thioester analogs by reaction with
3-mercaptopropionic acid at pH 4.[3]
Consequently, SEA peptides enrich the existing native peptide ligation toolbox available to the peptide chemist.
[1]
N. Ollivier and al. Org. Lett. 2010, 12, 5238-5241.
[2]
J. Dheur and al. Org Lett 2011, 13, 1560-1563.
[3]
J. Dheur and al. J. Org. Chem. 2011, in press.
- 53 -
REBOUL Angéline
Florent SEBBANE (U 1019 - UMR 8204 éq. 03 - SEBBANE Florent)
Rôle des systèmes à deux composants dans le cycle de la peste
Angéline REBOUL, Isabelle RICARD, Michaël MARCEAU et Florent SEBBANE,
Eq Peste et Y. pestis, INSERM U1019, F-59021 Lille; Institut Pasteur de Lille, CIIL F-59019 Lille; Univ Lille Nord de France, F-59000 Lille,
France ; 5 UDSL, F-59000 Lille
La peste est une maladie mortelle causée par la bactérie Yersinia pestis. De manière générale, la maladie est véhiculée au sein des populations
mammifères via un hôte intermédiaire : la puce. Pour se propager, Y. pestis doit donc s’adapter de manière très rapide à deux hôtes bien
distincts. Les systèmes à deux composants permettent de ressentir et de s’adapter rapidement aux conditions environnementales. Parmi les
systèmes à deux composants (S2C) de Y. pestis, nous avons pu mettre en évidence 15 systèmes à deux composants qui semblent être requis
pour la formation de biofilm in vitro, un processus biologique important pour produire une infection transmissible par la puce. Plus
particulièrement, le senseur BarA pourrait réguler la production de biofilm de manière indépendante au régulateur qui lui est normalement
associé.
REYNAERT Marie-Line
Stefania MACCARI (UMR 8576 éq. 08 - MACCARI Stefania)
Role for sex hormones in prenatal stress-induced programming of preference to natural reward
Marie-Line Reynaert
UMR 8576/UGSF- Neuroplasticity Team, Bât C9 Av. Mendéleiëv, CNRS/North Lille University (Lille1), 59655 Villeneuve d'Ascq cedex
Early life events induce persistent epigenetic modifications that lead to neurobehavioral impairments in the adult life. We have shown that
prenatal restraint stressed (PRS) rats, i.e. the offspring of mothers exposed to repeated episodes of stress during pregnancy, show an increased
vulnerability to drugs of abuse, with a high propensity to self-administration and an enhanced sensitivity to the locomotor-activating effect of
psychostimulant drugs. A clear-cut gender effect has been shown in relation to the anxiety-like profile of PRS rats. Here, we examined the
influence of gender and sex hormones in the preference for natural high palatable (HP) food in a conditioned place preference paradigm. Adult
male and female PRS rats showed, respectively, an increased and decreased preference for natural reinforcement as compared to age- and
gender-matched unstressed controls. Dihydrotestosterone (DHT) appeared to be responsible for the high food preference of male PRS rats,
because preference was reduced by a 1-month continuous subcutaneous treatment with the 5α-reductase inhibitor, finasteride and exacerbated
by testosterone supplementation. In addition, DHT treatment in unstressed rats significantly enhanced food preference. In females, 17β-estradiol
appeared to be a key player in the regulation of food preference. Preference was increased by estrogen treatment in female PRS rats, and
reduced by ovariectomy in unstressed rats. We conclude that PRS exerts a strong impact on rat preference to natural rewards and that DHT in
males, and estrogens in females, play a key role in modulating sex dimorphic effects on preference to natural rewards.
SIPIETER Francois
Katia CAILLIAU-MAGGIO (EA 4479 - BODART Jean-Francois)
Rôle de la protéine kinase MAPK/Erk dans la nécroptose.
François Sipieter123, Franck Riquet1, Laurent Héliot3, Jean François Bodart1, Peter Vandenabeele2 et Katia Cailliau-Maggio1.
1.EA4479, USTL-Lille1, Villeneuve d’Ascq. 2.DMBR, VIB, Gand. 3.IRI-CNRS USR3078, Biophotonics Group,Villeneuve d’Ascq.
La nécroptose est un processus programmé de mort cellulaire indépendant des caspases. Elle est déclenchée par le TNF alpha et repose sur
l’assemblage d’un complexe moléculaire intracellulaire, le « ripoptosome » qui fait intervenir, notamment, deux sérine/thréonine kinases de la
famille des RIP kinases, RIP1 et RIP3. La régulation de ces kinases et leur place en regard des effecteurs classiques de la signalisation
cellulaire reste encore à ce jour à déterminer.
Nos résultats préliminaires montrent que les profils de phosphorylation de la kinase MAPK/Erk varient sous l’effet de la nécrostatine, un
inhibiteur de RIP1, et suggèrent une action de la kinase dans ce processus de mort cellulaire. Cependant, il est important de déterminer si
MAPK/Erk est nécessaire à l’induction ou bien à l’accomplissement de la nécroptose. En effet plusieurs études rapportent une importance
capitale exercée par la dynamique spatio-temporelle de l’activité de la kinase MAPK/Erk dans les processus de mort cellulaire, en fonction du
type cellulaire.
Les profils d’activation topologiques et chronologiques de la kinase MAPK/Erk ont été mesurés à l’aide de biosenseurs FRET codés
génétiquement dans le contexte de la nécroptose. Nous avons pu ainsi mettre en évidence que l’activité de la kinase MAPK/Erk ne corrélait pas
avec les profils de phosphorylation. Ces mesures ont été rapportées à la localisation de la kinase et révèlent une compartimentation de la
protéine phosphorylée dans le cytoplasme des cellules engageant la nécroptose. L’utilisation d’inhibiteurs ciblant la kinase MAPK/Erk suggère
également un rôle capital de la phosphorylation mais pas de l’activité de la kinase dans ce processus cellulaire.
Enfin, afin de préciser le rôle de la kinase MAPK/Erk dans la nécroptose, il a été entrepris la création inédite d’un biosenseur RIP-KAR
rapporteur de l’activité kinasique des protéines RIP. Pour ce faire, des études phosphoprotéomiques ont été menées par un consortium
européen auquel le laboratoire de Peter Vandenabeele appartient. Elles ont permis de déterminer les substrats spécifiques des kinases RIP
jusqu’alors inconnus qui serviront de base à ce travail collaboratif.
- 54 -
SOBOCINSKI Jonathan
Feng CHAI (U 1008 - SIEPMANN Juergen)
Fonctionnalisation de stents vasculaires métalliques par des matrices polymères contenant des molécules
thérapeutiques
Jonathan SOBOCINSKI, Unité Inserm U1008, Faculté de Médecine de Lille, Pôle Recherche.
Ce projet de thèse concerne les 2 principales complications rencontrées en pratique clinique dans les suites de l’angioplastie-stenting artériel :
la resténose et la thrombose aigüe.
Pour remédier à ce problème, des stents enrobés d’agents antiprolifératifs sont déjà sur le marché, mais leurs résultats restent décevants avec
l’augmentation de thrombose tardive intrastent (RR 1,2) à l’origine d’une surmortalité (RR 1,32) [Lagerqvist et al, NEJM 2007]. Nous proposons
d’immobiliser sur le stent une ancre soit pour fixer 1 ) le principe actif ou 2 ) Une matrice polymère sur laquelle sera associée le principe actif
dans le cas d’un système à libération prolongée; dans le but de cibler la resténose et la thrombose.
La première partie du projet concernait la mise au point d’une ancre chimique spécifique permettant l’accroche de polymère sur le support
métallique formant le stent. Cette ancre est la base commune pour une immobilisation par liaison covalente du principe actif ou du système
polymère. La fixation de cette ancre a été validée sur le plan chimique et biologique. Ces deux modèles sont complémentaires : le principe actif
employé aura un mécanisme propre devant être soit sous forme fixe agissant comme recruteur de cellule(s) cible(s), soit libre pour être intégrée
par la(es) cellule(s) cible(s). Actuellement nous travaillons dans le but de valider et d’optimiser ces deux modèles (quantité de principe actif ,
cinétique de libération, évaluation biologique in vitro et in vivo sur un modèle de rat développé au laboratoire) en vue d’une application clinique.
Dans le cas de l’immobilisation du principe actif directement sur l’ancre, une étude faisant appel à 2 molécules (heparin-like) proposées par la
société Endotis Pharma a été développée. La pertinence de ces 2 molécules thérapeutiques dans la problématique de resténose a été validée
chez le rat par administration systémique. En se basant sur nos travaux réalisés précédemment [Zobrist Macromol 2011], l’ancre chimique
spécifique incluant un ester activé permettant le greffage des polymères a été modifiée et améliorée ; ce qui permet le greffage d’un panel
relativement large de fonctions : amines, acides et groupement biotine qui vont permettre d’adsorber différents principes actifs de façon
covalente sur le support.
Dans le système à libération prolongée, notre procédé permet de greffer un polymère de cyclodextrine (CD) via l’ancre spécifique. Les CDs sont
des oligosaccharides cycliques sous forme de cône tronqué possédant une cavité hydrophobe ; des hydroxyles apportent à l’extérieur un
caractère hydrophile. Cette structure cyclique et cette cavité hydrophobe sont à l’origine de leur capacité à former des complexes d’inclusion
réversibles avec un grand nombre de molécules. Elles pourront donc stocker un principe actif et auront la capacité de la libérer dans le temps.
Deux molécules thérapeutiques sont a l’étude pour la libération contrôlée: les statines et le paclitaxel. Les statines sont des molécules
pléiotropes, régulatrices de la dysfonction endothéliale (par modulation du niveau d’activité de la NO synthase endothéliale) et limitant la
réaction inflammatoire locale des phénomènes de resténose et de thrombose [Balk Am J Med. 2004]. Le paclitaxel est un agent antiprolifératif
limitant la prolifération de la néointima et sera le modèle de référence de notre étude par rapport à ce qui existe actuellement en clinique [Creel
Circ Res 2000].
L’accroche de ce système au support métallique est validée sur le plan chimique, les complexations CDs - paclitaxel et CDs - statines ont été
étudiées avec des résultats favorables.
Finalement, nous sommes parvenus à mettre au point un système permettant de rendre actif un revêtement métallique vasculaire à l’aide d’une
molécule thérapeutique. L’optimisation du procédé pour les deux modèles est en cours. Des études complémentaires chez l’animal
détermineront son applicabilité et les résultats dans la problématique posée.
- 55 -
STEENACKERS Agata
Philippe DELANNOY (UMR 8576 éq. 05 - DELANNOY Philippe)
Effect of the expression of GD3 synthase in MCF-7 breast cancer cells.
Agata Steenackers1, A.Cazet1, M.Bobowski1, J.Vanbeselaere1, Y.Rombouts1, F.Colomb1, Y.Guérardel1, X.Le Bourhis2 and P.Delannoy1,
1 UMR CNRS 8576, UGSF, University of Sciences and Technologies of Lille, 2 USTL, INSERM U908, Villeneuve d’Ascq
Morpho-histological classification is usually used to classify breast tumours regarding their invasiveness, nuclear grade or hormone receptors
expression. Recently, a molecular classification has defined five different subgroups based on multi-genes signature. Subtypes luminal A and
luminal B are characterized by the expression of estrogens receptors (ER). Subtype ERBB2 demonstrates over-expression HER2 (ERBB2) in
absence of ER expression. The Basal-like subtype does not show expression of hormone receptors or ERBB2. The last subtype, Normal-like, is
less well defined. Complex gangliosides from b- and c-series are often over-expressed in neuro-ectoderm-related cancers. In breast cancer,
complex gangliosides are over-expressed in about 50 % of invasive ductal carcinoma and ST8SIA1, the gene that encodes the GD3 synthase
(GD3S), displays higher expression among ER negative breast cancer tumours (Ruckhäberle et al., 2008). In contrast, breast cancer cell lines
only express a-series gangliosides, mainly GM2 in MDA-MB-231 or GM1 in MCF-7. We have shown that GD3S expression in the basal-like
subtype MDA-MB-231 cells results in the accumulation of GD2 at the cell surface, associated with an increased migration and a proliferative
phenotype in absence of serum. We also showed that GD3S expression induces the constitutive activation of c-Met in absence of ligand (Cazet
et al., 2009; 2010). Here, we show the effect of GD3S expression in MCF7 cells, which represent to the luminal A subtype of breast cancer.
MCF7 GD3S+ clones were obtained by transfection of human ST8SIA1 cDNA followed by clonal selection by limit dilution. Clones were
analyzed by qPCR, flow cytometry, Western blot and confocal microscopy. Our results show that the GD3S+ MCF7 cells accumulate mainly
GD1b and GT3. GD3S+ MCF7 cells display an increased migration but no effect on the proliferation was observed. The results obtained by
mass spectrometry have shown that MCF-7 cells express high amount of globoside such as Gb3 and Gb4 and very low amount of gangliosides
compared to MDA-MB-231. Moreover, we demonstrated that GD3S was capable to synthesise GT3 from GD3 and we also observed the
expression of unusual tetra- and penta-sialylated lactosylceramide derivatives GQ3 (II3Neu5Ac4-Gg2Cer) and GP3 (II3Neu5Ac5-Gg2Cer).
These results suggest that GD3S expression induce modification of both ganglioside profiles and cell phenotypes depending on breast cancers
cell types.
TONOLI Cajsa
Serge BERTHOIN (EA 4488 - BERTHOIN Serge)
EFFECTS OF DIFFERENT TYPES OF ACUTE EXERCISE AND TRAINING ON (ACUTE AND CHRONIC)
GLYCAEMIC CONTROL IN TYPE 1 DIABETES – A META-ANALYSIS.
Tonoli, C.1,2, Heyman, E.2, Roelands, B.1, Buyse, L.1, Cheung, S.3, Berthoin, S.2, Meeusen, R.1
1: VUB (Brussels, Belgium), 2: UL (Lille, France), 3: BU (Ontario, Canada).
Introduction : Exercise has been accepted and generally recommended for the management of type 1 diabetes (T1D) and for improving the
overall quality of life in affected individuals. In addition to increasing aerobic fitness, reducing cardiovascular risk factors, and reducing body
weight and body fat, physical activity develops and maintains chronic glycaemic control. Exercise stimulates insulin sensitivity, muscle glucose
uptake and improves insulin flexibility. This meta-analysis was conducted to determine the overall effects of exercise on acute and chronic
glycaemic control and the conditions (frequency, intensity …) which are required to obtain these effects in T1D patients.
Methods : Pubmed, ISI Web of Knowledge and SPORTDiscus were consulted to identify studies on Type 1 Diabetes (T1D) and exercise.
Cohen’s d statistics were used for calculating effect sizes (ES), with effect sizes (d) defined as small = 0.3, medium = 0.5 and large = 0.8.
Ninety-five percent confidence intervals (95% CIs) were used to establish the significance of our findings.
Results : From a total of 937 studies, 33 that met the inclusion criteria were selected. ES for exercise on acute glycaemic control were large,
while they were small for chronic glycaemic control. Aerobic exercise, resistance exercise, mixed exercise (aerobic combined with resistance
training) and high intensity exercise (HIE) decreased acute blood glucose levels. To prevent late onset hypoglycaemic episodes, the use of
single bouts of sprints into an aerobic exercise can be recommended. This meta-analysis also showed that a regular exercise training program
has a significant effect on acute and chronic glycaemic control, though, not all exercise forms showed significant results. Specifically, aerobic
training is a favourable tool for decreasing chronic glycaemic control, while resistance training, mixed and HIE did not significantly decrease
chronic glycaemic control.
Conclusion : Aerobic training and strength training have different actions in the body and can therefore influence (acute and chronic) glycaemic
control through different pathways. Based on this meta-analysis it is advised that regular aerobic exercise with the addition of bouts of HIE,
strength exercise (or the combination of strength and aerobic exercise) will improve the glucose levels of T1D patients. Regular aerobic training
will improve long term glycaeted haemoglobin.
- 56 -
TOURTEAU Aurélien
Benoît RIGO (EA 4481 - BONTE Jean-Paul)
From FAAH Inhibitors to a Novel Class of Selective CB2 Cannabinoid Receptor Agonists in the Treatment of
Experimental Colitis.
A. Tourteau, V. Lucas-Andrzejak, J. El Bakali, M. Body-Malapel, N. Renault, A. Lemoine, B. Rigo, R. Mansouri, C. Furman, G. G. Muccioli, D. M.
Lambert, P. Chavatte, P. Desreumaux, and R. Millet.
Crohn’s disease and ulcerative colitis, known as inflammatory bowel diseases (IBD), are chronic inflammatory diseases of the digestive system.
Both diseases are diagnosed in patients aged between 10 and 40 years and the current symptoms are abdominal pain, diarrhea, rectal bleeding,
nausea and weight loss. According to the European Federation of Crohn’s and ulcerative Colitis Associations (EFCCA), IBD affects over 2.2
million people in Europe. Despite investigations on these unbearable diseases, the causes of IBD are still unknown and no treatment is currently
available.
Recently, several researches showed that the endocannabinoid system plays an autoprotective role in immunologically mediated disorders,
making this endocannabinoid system an attractive therapeutic target for the treatment of IBD. Endocannabinoids (ECs), including anandamide
(AEA) and 2-arachidonoylglycerol (2-AG), trigger a wide range of biological responses by activation of both cannabinoid receptors (CB1 and
CB2). These physiological effects are transient because of a rapid inactivation of ECs by specific enzymes such as fatty acid amide hydrolase
(FAAH) and monoacylglycerol lipase (MAGL). Thereby, direct or indirect stimulation of cannabinoid receptors constitutes a promising strategy to
treat numerous gastrointestinal pathologies, especially inflammatory diseases such as IBD. Indeed, the use of ECs membrane transport
(VDM11) or FAAH (URB597) inhibitors in order to raise anandamide levels has been successfully applied to reduce intestinal inflammation.
In this context, we focused on the molecular modeling associated conception and synthesis of 3-carboxamido-5-aryl isoxazole FAAH inhibitors.
Encouraging preliminary results, compound 1, N-(1-Adamantyl)-5-phenylisoxazole-3-carboxamide (IC50=500nM), support the molecular
modeling and led us to carry out pharmacomodulations on this class of FAAH inhibitors. A library of 54 compounds was synthesized and
evaluated for their biological activity leading to the discovery of compound 2, (2-benzo[1,3]dioxol-5-yl-ethyl)-5-Biphenyl-4-yl-isoxazole-3carboxamide. Andrzejak et al. described compound 2 with a great FAAH inhibition potential (IC50=88nM), without affecting MAGL activity, and a
colon inflammation decrease in a model of TNBS-induced colitis in mice. In parallel, our molecule library was evaluated in vitro for binding affinity
on the CB2 receptor. Surprisingly, some compounds revealed a submicromolar full-agonist affinity for the CB2 receptor, without any cytotoxicity,
as compound 3, N-(3-Noradamantyl)-5-(2-pentyloxyphenyl)isoxazole-3-carboxamide. Today, in vitro assays and in vivo assays are in progress
in order to evaluate their anti-inflammatory effects, respectively on macrophages (LPS-stimulated TNF production) and on a model of TNBSinduced colitis in mice.
TUNCAY Hande
David DAUVILLEE (UMR 8576 éq. 03 - BALL Steven)
Genetic dissection of starch catabolism in the model green alga Chlamydomonas reinhardtii
Hande TUNCAY*, Justin FINDINIER*, Miriam SCHULZ-RAFFELT**, Pascaline AUROY**, Gilles PELTIER** and David DAUVILLEE*
*UGSF-UMR 8576 CNRS, USTL1, 59655 Villeneuve d’Ascq, ** CEA Cadarache DSV/IBEB/LB3M UMR 7265 CEA CNRS bât 161 13108 St
Paul-Les-Durance
During the last two decades of research, most of the efforts have been focused on the understanding of the complex pathway necessary to
starch biosynthesis which requires more than 40 genes highly conserved from green algae to land plants. This comes as a surprise when one
considers that this storage polysaccharide is solely made of α-1,4 glucose chains branched together with β-1,6 linkages. While starch anabolism
is now well understood, the mechanisms underlying its mobilization remain unclear. The growing interest of the scientific community on
renewable green energies requires an in-depth understanding of the enzymatic and regulative functions necessary to this process. While
successful reverse genetic approaches mostly applied to Arabidopsis allowed to determine the function of the different enzymes in the process,
these approaches are not convenient to understand the regulative processes underlying nor can allow to discover unsuspected functions
involved.
We then propose to reassess our vision of starch catabolism by applying a high throughput forward genetic strategy in a particularly adapted
model system: the unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii. We have setted up a specific genetic screen relying on the highly specific
iodine interaction with α-1,4 linked glucans to identify strains defective in starch catabolism after plasmid insertional mutagenesis. The disrupted
function in the selected strains is then identified through plasmid rescue and inverse PCR strategies. A detailed biochemical characterization of
the mutants allow us to determine the exact function of the missing gene in starch catabolism and is then confirmed through the reintroduction of
a wild-type copy of the gene in the mutant in order to restore a wild-type phenotype. We expect that the data collected from our numerous
mutants altered in starch catabolism will considerably deepen our knowledge of this process not only in hydrogen producing green algae but
also in plants in general. An already performed small scale mutagenesis campaign assessed the validity of our experimental procedure allowing
the identification of both functions known to be involved in starch catabolism and unsuspected ones.
The biochemical characterizations performed on the 37 putative mutants allowed us to confirm that 14 of them do carry a mutation slowing
down starch mobilization. The molecular approaches allowed us to identify the plasmid insertion location for 15 of them. Among these identified
functions are found expected mutations (deficiency for β-amylase, for the maltose exporter (Mex) protein) but also potential regulator proteins
(kinases) or unsuspected functions (function linked to lipid metabolism or respiratory process).
A complete characterization of the maltose exporter (Mex) mutant of Chlamydomonas has been performed and our results demonstrate its
function in starch mobilization in algae but also reveal a different role played by this protein is than the one described in Arabidopsis.
- 57 -
VANBESELAERE Jorick
Yann GUERARDEL (UMR 8576 éq. 01 - GUERARDEL Yann)
Cartographie du Glycome et des Glycosyltransferases des cellules de foie
de poisson zèbre (ZFL)
Vanbeselaere1, Chang2, Harduin-Lepers1, Fabre1, Yamakawa1, Slomianny3, Biot2, Khoo2, Guérardel1.
1 UGSF, CNRS UMR 8576 USTL, 59650 Villeneuve d'Ascq France. 2 IBC, Academia Sinica, Tapei 115, Taiwan. 3 INSERM-LPC U1003, USTL
SN3, 59650 France.
L'émergence du poisson zèbre comme organisme modèle pour l’étude des maladies humaines a été accompagné par le développement de
nombreuses lignées cellulaires permettant les manipulations in vitro et in vivo après implantation. L'exploitation des lignées cellulaires de
poisson-zèbre est cependant toujours entravée par le manque de données génomiques et biochimiques. Dans les travaux présentés, nous
avons utilisé les cellules ZFL (Zebrafish Liver), une lignée dérivée du foie de poisson zèbre, comme une plate-forme pour l'étude de la
glycosylation. Pour ce faire, nous avons étudié le profil de glycosylation des cellules ZFL par une combinaison de spectrométrie de masse et de
RMN. Nous avons ainsi pu démontrer que les glycoprotéines étaient substituées par des N-glycannes multi-antennés hautement sialylés,
possédant un épitope très spécifique du poisson zèbre, le Galβ1-4[Neu5Ac(α2,3)]Galβ1-4[Fuc(α1,3)]GlcNAc, et que les O-glycannes étaient
constitués d’un noyau de type 1 multi-sialylé. De même, nous avons établi le profil des glycosphingolipides qui sont dominés par des
gangliosides sialylés. En parallèle, nous avons corrélé les profils d'expression de toutes les sialyl- et fucosyltransférases avec les structures
glycanniques identifiées. Enfin, nous avons démontré que ce modèle cellulaire permettait le marquage métabolique in vivo des sialoconjugués
par click-chemistry. Les analyses glycomiques, génomiques et les études fonctionnelles ont permis d’établir la lignée cellulaire ZFL comme un
modèle pertinent d’étude de la glycosylation.
VANDERSTRAETE Mathieu
Colette DISSOUS (U 1019 - UMR 8204 éq. 02 - PIERCE Raymond)
Molecular and functional studies of the Schistosoma mansoni Venus kinase receptors SmVKR1 and SmVKR2: potential
roles in larval development and oogenesis
M Vanderstraete, N Gouignard, M Morel, E Browaeys, S Beckmann, CG Grevelding, C Dissous
Center for Infection and Immunity of Lille, Inserm U1019, CNRS-UMR 8204, University Lille Nord de France, Institut Pasteur de Lille, 59019 Lille
Cedex, France
Venus kinase receptors (VKRs) form a new family of receptor tyrosine kinases. Atypically, VKRs contain an extracellular Venus Flytrap (VFT)
domain, a ligand-binding domain activated by small molecules such as aminoacids (Ahier et al., 2009). Vkr genes are found in diverse
eumetazoan genomes, from cnidarians to echinoderms and are particularly well conserved in protostomian species (Vanderstraete et al., in
prep). In the platyhelminth Schistosoma mansoni, two VKRs have been described, SmVKR1 and SmVKR2 (Gouignard et al., 2011). Quantitative
RT-PCR as well as in situ hybridization indicated a large expression of both genes in larval stages and in female ovaries. RNA interference
experiments performed on sporocysts and adult worms further confirmed the implication of SmVKRs in larval development and oogenesis. Using
Xenopus laevis oocytes for protein expression, we demonstrated that SmVKR1 could bind and be activated by amino acids, mainly by LArginine, whereas SmVKR2 activation was triggered by calcium ions. In order to decipher the downstream signalling pathways of SmVKR1 and
SmVKR2, we have started to identify binding partners of these receptors by the screening of an adult worm cDNA library using the yeast twohybrid system. Our results suggest that both SmVKR1 and SmVKR2 participate in cytoskeleton rearrangement and in developmental
mechanisms. Potential substrate/adapters for SmVKR1 have been identified and their function in the activation pathway of the receptor is under
investigation.
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VANDOMME Audrey
Christine PIERROT (U 1019 - UMR 8204 éq. 02 - PIERCE Raymond)
Etude d’un régulateur de la phosphatase de type 2A chez Plasmodium falciparum : le Phospho Tyrosyl Phosphatase
Activor (PTPA)
A. VANDOMME, Dr C. PIERROT, Dr K. CAILLIAU, Pr J-F. BODART, Dr J. KHALIFE
Les protéines phosphatases sont connues pour jouer des rôles clés dans différentes fonctions biologiques en contrôlant des points essentiels
dans la croissance cellulaire, la différenciation ou la division. La protéine phosphatase de type 2A (PP2A) est considérée avec la protéine
phosphatase de type 1 comme l’une des phosphatases majeures impliquées dans les étapes de déphosphorylation. Dans les cellules
eucaryotes, PP2A est généralement complexée à un certain nombre de régulateurs qui contrôlent son activité, sa localisation et/ou sa
spécificité. Parmi ces régulateurs, le phospho-tyrosyl phosphatase activator (ou PTPA) est un activateur de PP2A qui potentialise l’activité
tyrosine phosphatase de cette protéine ou encore l’inhibiteur 2 (I2PP2A) qui inhibe l’activité de PP2A.
Chez Plasmodium falciparum (Pf), un parasite apicomplexe responsable de la majorité de la morbidité et de la mortalité du paludisme humain, la
protéine PfPP2A est décrite comme une protéine essentielle dans la survie des formes érythrocytaires du parasite et dont la fonction doit être
finement contrôlée par différents régulateurs. Cependant, excepté I2PP2A (également nommé SET) aucun régulateur de PfPP2A n’a été décrit
à ce jour. Au laboratoire, nous avons identifié in silico plusieurs homologues de régulateurs de PP2A connus chez les eucaryotes. L’un de ces
régulateurs potentiels codée par l’ORF PF14_0280, est une protéine homologue à PTPA (identité de 30% avec la PTPA humaine). Cette
protéine dont l’étude aux niveaux moléculaire et fonctionnel fait l’objet de ma thèse est notée PfPTPA.
Nous avons réalisé la caractérisation moléculaire de PfPTPA et montré la conservation de motifs d’interaction avec PP2A. Grâce à la production
de PfPTPA sous forme recombinante, nous avons montré : 1) l’interaction in vitro de PfPTPA avec PP2A, et 2) l’inhibition dans des ovocytes de
Xénope de la transition G2/M induite par la progestérone. De plus, l’étude de la localisation de PfPP2A et de son régulateur chez le parasite a
montré une colocalisation des deux protéines aux différents stades du cycle érythrocytaire du parasite. Par la suite des études d’interaction in
vivo (double hybride de levure) seront effectuées, de même que des études d’activités in vitro. L’utilisation en parallèle d’une protéine PfPTPA
tronquée des motifs potentiels d’interaction avec PP2A permettra de déterminer les régions impliquées dans l’interaction et l’activité régulatrice
de la phosphatase.
VANDOMME Jérôme
Renata POLAKOWSKA (U 837 éq. 04 - FORMSTECHER Pierre)
Rôle des cytokines pro-inflammatoires et des voies de l’IGF-1 et de la p38 MAPK dans la différenciation des cellules
souches de la pulpe dentaire.
Vandomme J.(1,2), Touil Y.(1), Masselot B. (1), Segard P.(1), Formstecher P.(1), Bailliez Y.(2), Polakowska R.(1).
1. INSERM U837 JPARC, IRCL, Lille,France. 2. Faculté Dentaire, Université Lille 2, Lille, France.
Notre travail concerne l’étude des propriétés des cellules souches de la pulpe dentaire (CSPD), dont l’extraordinaire potentiel de prolifération et
de différenciation en de nombreux types cellulaires (odontoblastes, ostéoblastes, chondrocytes, cellules musculaires, neurones et mélanocytes)
soulève un intérêt considérable du fait de son application potentielle en médecine régénérative. Elles possèdent notamment un excellent
potentiel de réparation du tissu dentinaire lésé au cours de la carie. La croissance et la réparation du tissu dentinaire dépendent de la balance
entre la quiescence et la prolifération de ces cellules, un phénomène jouant un rôle clef dans le contrôle de l’homéostasie des tissus.
Actuellement, il existe peu de données publiées concernant les facteurs impliqués dans la régulation de cette balance dans les CSPD et dans
les cellules souches de crête neurale dont elles dérivent. Cependant, il a été montré que le TNFα et d’autres cytokines pro-inflammatoires
produites en réponse à l’infection bactérienne lors d’une carie pouvaient activer les précurseurs odontoblastiques et déclencher leur prolifération
et leur différenciation en odontoblastes sécrétant la dentine réparatrice. Nous nous proposons d’élucider le circuit de régulation qui contrôle la
quiescence et l’activation des CSPD en réponse à des facteurs pro-inflammatoires in vitro et nous essaierons de comprendre comment deux
cytokines inflammatoires majeures, le TNFα et l’IL-6, agissent sur les voies de signalisation de l’IGF-1 et de la p38 MAPK dans la biologie des
cellules pulpaires.
Nos objectifs sont: 1) Identifier les marqueurs les plus pertinents pour la quiescence et l’activation des CSPD et utiliser ces marqueurs pour
caractériser les effets des inducteurs et des inhibiteurs des voies de signalisation du TNFα, de l’IL-6, de l’IGF1R et de la p38 MAPK, explorés
sur la balance quiescence/activation des CSPD, afin de déterminer quels sont les relais moléculaires situés en aval de ces voies de transduction
2) Explorer plus avant les mécanismes impliqués dans la réactivation, l’autorenouvellement et la différenciation des CPSD en utilisant
notamment les siRNA.
Nos résultats préliminaires suggèrent que les voies de signalisation de l’IGF1R et de la p38 MAPK, situées en aval du TNFα ont des effets
opposés sur la prolifération et la différenciation des CSPD, comme le corrèle les variations des marqueurs de cellule souche et de différenciation
odontoblastique.
Nos données suggèrent également que la voie de l’IGF1R active les CSPD quiescentes et que la voie p38 MAPK maintient leur quiescence.
Ces données ont été complétées par des expériences de culture ex vivo qui montrent de manière intéressante que l’inhibition de la voie p38
MAPK active la prolifération de cellules qui sont co-localisées au sein de régions de cellules exprimant des marqueurs de cellule souche.
Projet financé par la Fondation pour la Recherche Médicale.
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VAUSSELIN Thibaut
Jean DUBUISSON (UMR 8161 - DE LAUNOIT Yvan)
La Ferroquine, une molécule anti-paludisme prometteuse, est un nouvel inhibiteur de l'infection par le virus de l'hépatite
C.
Thibaut Vausselin1, Noémie Calland1, Sandrine Belouzard1, Véronique Descamps2, Gilles Duverlie2 , Yann Guérardel3, Czeslaw Wychowski1,
Christophe Biot3, Jean Dubuisson1.
1 CNRS UMR8204 - Inserm U1019; 2 Université d'Amiens; 3 CNRS UMR8576
L'infection par le Virus de l'Hépatite C (VHC) est un problème de santé publique global affectant 3% de la population mondiale. Le VHC est un
agent viral hépatotrope, à transmission parentérale dont la primo-infection est généralement asymptomatique, mais d’évolution quasisystématiquement chronique (50 à 80% des cas).
Bien qu'une bithérapie combinant l'interféron-alpha pegylé et la ribavirine existe depuis de nombreuses années, elle reste cependant nonspécifique du VHC, mal tolérée par les patients, et efficace dans seulement 50% des cas. En effet, l'une des particularités du VHC réside dans
sa propension à pouvoir muter rapidement, lui conférant sa capacité de résistance aux traitements. Il est donc essentiel de développer une
approche combinant plusieurs inhibiteurs du VHC ciblant les différentes étapes du cycle viral, à l'instar du bocéprévir et du télaprévir,
récemment mis sur le marché et inhibant la réplication virale.
Dans l'objectif d'une inhibition combinée des différentes étapes, l'entrée virale constitue l'une des cibles d'intérêt. Cette entrée débute par
l’attachement du virus aux récepteurs membranaires cellulaires et se poursuit avec l’internalisation de la particule virale via un mécanisme
d’endocytose clathrine-dépendant. Le virus est alors transporté vers les endosomes où l’acidification de la vacuole permet la fusion des
membranes virales et cellulaires, aboutissant à la décapsidation et à la libération de l’ARN viral dans le cytoplasme.
Certaines drogues, telles que la chloroquine, sont capables d’inhiber l’acidification de ces endosomes. Initialement utilisée comme antipaludique, la chloroquine a également montré des effets antiviraux directs sur des virus à ARN, tels que les coronavirus ou les flavivirus, ainsi
que le VHC. Toutefois, en raison des nombreux effets secondaires de la chloroquine, des dérivés ont été développés afin d’en augmenter
l’efficacité tout en diminuant la foetotoxicité ou la génotoxicité.
Parmi ces dérivés, nous avons montré que la ferroquine, initialement utilisée pour une activité antipaludique, possédait une action antivirale
contre le VHC. En effet, la ferroquine est capable d'inhiber l'entrée virale, mais également d'affecter la réplication génomique du VHC. Par
ailleurs, il a été démontré que l'une des voies de transmission du VHC, en dehors d'une infection par néo-virions nouvellement formés, était une
transmission directe de cellule à cellule au niveau des régions de contact intercellulaire. Là encore, nous avons pu montrer que la ferroquine
était capable d'inhiber cette transmission cellule-cellule, renforçant ainsi son action antivirale. De plus, les expériences que nous avons menées
indiquent que la ferroquine, conjuguée aux drogues désormais utilisées en clinique, n'aurait ni action inhibitrice sur ces drogues, ni ne verrait
son activité anti-VHC affectée.
Enfin, les études réalisées en clinique dans le cadre de son action antipaludique, permettent entrevoir une application thérapeutique possible de
la ferroquine qui viendrait ainsi compléter l'arsenal thérapeutique anti-VHC.
VELGHE Carine
Nicolas BLANCHEMAIN (U 1008 - SIEPMANN Juergen)
IMPACT OF TREHALOSE ADDITION TO LYSOZYME-LOADED, LIPID IMPLANTS
C. Velghe, Y. Karrout, S. Krenzlin, N. Blanchemain, J. Siepmann
INSERM U 1008, Controlled Drug Delivery Systems and Biomaterials, 3 Rue du Prof Laguesse, 59000 LILLE
Due to the advances in biotechnology, protein drugs have become available in much higher quantities at reduced costs. However, up to date
their administration remains highly challenging: Oral delivery is not feasible due to degradation within the gastro intestinal tract. Parenteral
administration of solutions/suspensions needs to be frequently repeated, because of the short half-lives of most proteins. Parenteral controlled
release is challenging, since the standard matrix former [poly(lactic-co-glycolic acid)] generates acidic micro environments upon ester hydrolysis,
destroying fragile proteins. Lipid implants offer an interesting alternative. However, yet little is known on the stability of proteins in lipid implants
and how these systems control drug release.
The aim of this study was to investigate the impact of the addition of trehalose to lysozyme containing implants based on hardened soybean oil.
Lipid implants loaded with lysozyme (chicken egg white), trehalose and hardened soybean oil (Dynasan 118) were prepared via an
emulsification/casting method. Briefly, an aqueous protein solution optionally containing 0.05 M trehalose was emulsified within the molten lipid
at 70-72 C using ultrasound (1 min). The emulsions were cast into cylindrical moulds (3 mm diameter) and subsequently cooled to room
temperature and freeze dried. Protein release was measured in phosphate buffer pH 7.4. The trehalose is known to be a protector during freezedrying .
The total protein content in withdrawn samples was determined using a bicinchoninic acid protein assay (BCA). So, the protein integrity was
measured using enzymatic activity tests with Micrococcus Lysodeikticus. And Raman spectroscopy was used like a new tool to determin the
good conformation of the protein inside a lipid matrix.
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VERHAEGHE Romain
François PATTOU (U 859 - PATTOU François)
Effets du gastric bypass par anse en Y ou en Ω sur l’homéostasie glucidique
R. Verhaeghe 1, B. Tréchot 1, R. Caiazzo 1,2, E. Hervieux 1, C. Zerrweck 1, T. Hubert 1,2, V. Gmyr 1, G. Queniat 1, J. Kerr-Conte 1,2, F. Pattou
1,2
1 Inserm U 859 - Biothérapies du diabète, 2 Université Lille - Nord de France, Lille, France
Introduction : Le gastric Bypass par anse en Y (GBPY) est l’intervention de référence dans la prise en charge de l’obésité massive (>40kg/m2),
avec 60% de perte d’excès de poids. Sa réalisation laparoscopique est difficile et son taux de complication reste élevé (0.2% mortalité, 4.8%
morbidité), mais le taux de guérison du T2DM est spectaculaire (79.3%). L’augmentation post-prandiale de la sécrétion de GLP-1 après GBPY
est une des causes largement évoquées mais sa physiopathologie fait encore l’objet de nombreuses hypothèses. Nous avons donc récemment
proposé un modèle préclinique de GBPY chez le mini-porc. Le gastric bypass par anse en oméga (GBPO), de réalisation plus facile, connaît un
essor important, toutefois, son impact sur l’équilibre glycémique post-opératoire est peu étudié.
Objectifs : Comparer l’équilibre glycémique, la sécrétion de GLP-1 et d’insuline post-prandiaux dans un modèle préclinique de GBPY et de
GBPO chez le mini-porc non diabétique.
Matériels et Méthodes : Nous avons comparé les modifications post prandiale de l’équilibre glycémique chez 5 mini-porcs après GBPY et 5 miniporcs après GBPO. Pour cela, chaque animal a été soumis à un repas test standardisé en pré-opératoire et à j10 en post-opératoire. La
glycémie, l’insulinémie, et le GLP-1 ont été mesurés à t0, t15, t30, t60, t90 et t180 minutes. L’analyse statistique a été réalisée en ANOVA par
deux groupes.
Résutats : Les résultats pré-opératoires n’étaient pas significativement différents entre les mini-porcs. L’insulinémie et le GLP-1 post prandiaux
étaient augmentés par rapport aux mesures pré-opératoires. La glycémie post prandiale après GBPY était plus élevée qu’après GBPO
(p=0.003). L’augmentation de l’insulinémie post-prandiale est significativement plus importante après GBPY (p=0.0035). Les secrétions postprandiales de GLP-1 ne sont pas significativement différentes après les deux procédures.
Conclusion : La réalisation d’un GBPO et d’un GBPY modifie l’équilibre glycémique, la secrétion d’insuline et de GLP-1 chez le mini-porc
reproduisant les modifications observées chez l’Homme. La secrétion d’insuline après GBPY est significativement supérieure à celle après
GBPO alors que la sécrétion de GLP-1 est similaire. L’augmentation plus importante de la glycémie post-prandiale après GBPY pourrait
expliquer l’hyperinsulinisme postprandial. L’essor de la chirurgie métabolique sera conditionné par une meilleure compréhension de ses
mécanismes physiologiques à travers le développement de tels modèles précliniques chez de grands mammifères omnivores.
- 61 -
VIOLET Marie
Marie-Christine GALAS (U 837 éq. 01 - BUEE Luc)
Tau : un nouveau rôle dans la protection de l'ADN neuronal
M. Violet 1, L. Delattre 1, A. Sultan 1, Z. Mansuroglu 2, M. Tardivel 1, S. Humez 1, F. Nesslany 3, M. Colin 1, E. Bonnefoy 2, L. Buée, M.-C.
Galas 1
1Université Lille 2-Inserm UMR837, Alzheimer & Tauopathies, Lille, 2CNRS FRE 3235, Université Paris
Introduction : La maladie d’Alzheimer (MA) est caractérisée par deux types de lésions histopathologiques qui sont les plaques amyloïdes
extracellulaires composées de peptide A-beta et les dégénérescences neurofibrillaires intra neuronales composées de protéine Tau hyper et
anormalement phosphorylée.
Tau est principalement connue pour son rôle clé dans la régulation de la dynamique microtubulaire. Cependant, Tau est aussi localisée en faible
quantité dans le noyau des neurones. Nous avons précédemment montré dans des cultures primaires de neurones qu’un stress oxydant,
mécanisme précocement observé dans la MA, et un stress hyperthermique induisait l’accumulation réversible de Tau déphosphorylée dans le
noyau des neurones (Sultan et al., 2011). De façon intéressante, cette protéine Tau nucléaire à la capacité de se lier à l’ADN et de le protéger
de dommages induits par le stress. Notre premier objectif était de tester si in vivo la protéine Tau était également capable de protéger l’ADN
neuronal.
De plus, dans les cerveaux de patients Alzheimer, une augmentation des dommages à l’ADN a été décrite dans les neurones vulnérables qui
développent une dégénérescence neurofibrillaire. Une hypothèse attrayante serait que l’augmentation de la phosphorylation de Tau observée
dans la MA, induirait la perte de sa fonction protectrice vis à vis de l’ADN. Afin de vérifier cette hypothèse, notre second objectif était d’étudier
l’impact de l’augmentation de la phosphorylation de Tau sur l’intégrité de l’ADN en condition de stress.
Matériels et Méthodes : Des cultures primaires de neurones corticaux d’embryons de souris ont été soumises à un stress hypothermique afin
d’induire une augmentation de la phosphorylation de Tau. Des souris sauvages, déficientes en protéine Tau ou développant une pathologie Tau
(THY-Tau22) ont été soumises à un stress hyperthermique modéré après avoir été anesthésiées. Les souris Thy Tau 22 ont la particularité
d’exprimer une protéine Tau humaine mutée dont la phosphorylation augmente au cours du temps. La localisation de Tau dans les neurones a
été visualisée par Western Blot après fractionnement subcellulaire, ou par immunocyto ou histochimie et analyse par microscopie confocale.
Des dommages à l’ADN ont été détectés par TUNEL et Comet assays.
Résultats : Le rôle protecteur de Tau vis à vis de l’ADN a été validé in vivo. Dans des cultures primaires de neurones, nous avons pu observé
qu’une augmentation de la phosphorylation de Tau induite par un stress hypothermique prévient son accumulation nucléaire. Dans ces
conditions, une accumulation des dommages à l’ADN a été observée. L’impact délétère de l’augmentation de la phosphorylation de Tau sur sa
fonction nucléaire a également été observé dans des souris transgéniques développant une pathologie Tau (Thy tau 22). En effet, dans des
souris transgéniques soumises à un stress hyperthermique, une accumulation des dommages à l’ADN a été détectée dans les neurones
présentant une pathologie Tau modérée.
Conclusion : Nos résultats confirment la fonction neuroprotectrice de Tau vis à vis de l’ADN in vivo en condition de stress et suggèrent qu’une
phosphorylation modérée de Tau altère sa capacité à protéger l’ADN neuronal.
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WARNIER Marine
Pascal MARIOT (U 1003 - PREVARSKAYA Natalia)
Rôle du canal calcique voltage-dépendant de type T, CaV3.2 et de ses sous-unités régulatrices dans le développement
du cancer de la prostate.
M. Warnier, M. Roudbaraki, N. Prevarskaya et P. Mariot
INSERM U1003 Laboratoire de physiologie cellulaire, Université Lille 1 Sciences et Technologies, 59655 Villeneuve d'Ascq
Le cancer de la prostate, troisième cause de mortalité par cancer chez l’homme, est dépendant des androgènes dans les premiers stades de la
maladie. Le principal traitement à l’heure actuelle hors intervention chirurgicale est la privation en androgènes circulants qui induit une
régression tumorale. Néanmoins, il se produit souvent un échappement thérapeutique des tumeurs qui évoluent vers un cancer androgénoréfractaire. Ceci suggère que d’autres facteurs que les androgènes interviennent dans la cancérogenèse prostatique. Un de ces facteurs
pourrait être une altération de l’homéostasie calcique. En effet, le calcium intracellulaire intervient dans plusieurs mécanismes impliqués dans la
cancérogenèse tels que la prolifération, l’apoptose, la sécrétion et la migration. La progression du cancer de la prostate s’accompagne de
l’apparition de cellules cancéreuses surexprimant les canaux calciques voltage-dépendants de type T (canaux T), CaV3.2. Il a été établi que la
surexpression de ce canal favorisait la sécrétion de phosphatase acide prostatique et d’autres facteurs mitogènes responsables de la
prolifération des cellules avoisinantes. S’il a été montré que ce canal T est constitué d’une sous-unité pore Cav3.2, la structure multimérique des
canaux T reste inconnue à l’heure actuelle. Ce canal pourrait être constitué d’une sous-unité pore associée à des sous-unités accessoires (α2δ,
β, γ) comme cela a été décrit pour d’autres canaux calciques voltage-dépendants.
Notre projet de recherche consiste à mettre en évidence le rôle régulateur de potentielles sous-unités accessoires des canaux T et l’étude de
leur rôle combiné dans la cancérogenèse prostatique. Nous avons effectué un criblage des sous-unités régulatrices potentielles des canaux
voltage-dépendants dans les cellules cancéreuses prostatiques. Nous avons ainsi mis en évidence l’expression d’une sous-unité régulatrice de
type α2δ2 dans les lignées et tissus prostatiques. Nous montrons que cette sous-unité est plus fréquemment exprimée dans les tissus
cancéreux que dans les tissus non cancéreux. Par la suite, nous avons étudié son rôle dans l’activité du canal et la régulation de la croissance
cellulaire. Grâce aux techniques d’immunofluorescence, d’immunoprécipitation et d’électrophysiologie, nous mettons en évidence pour la
première fois que Cav3.2 et la sous-unité α2δ2 appartiennent au même complexe protéique, un canal de type T, et qu’α2δ2 module l’activité de
ce canal avec un rôle potentiel dans l’adressage de Cav3.2 à la membrane plasmique. De plus, en modifiant l’expression de ces protéines, nous
mettons en évidence leur rôle dans la prolifération des cellules cancéreuses prostatiques. En effet, la surexpression de Cav3.2, α2δ2 ou des
deux induisent un cycle cellulaire beaucoup plus rapide tandis que la suppression de l’expression d’α2δ2, ou de Cav3.2, ou l’inhibition de
l’activité de ces canaux, diminue la croissance cellulaire. Enfin, des études in vivo en cours sur des souris nude, semblent montrer que les
tumeurs issues de xénogreffes des clones CaV3.2 se développent avec une croissance plus rapide que les tumeurs des clones contrôle.
Ainsi, cette étude amène à une meilleure compréhension de l’implication des canaux calciques de type T dans le cancer de la prostate. Il reste à
préciser par quels mécanismes ces protéines activent la prolifération et notamment à déterminer si l’association du canal avec d’autres sousunités est indispensable pour son effet inducteur de prolifération cellulaire.
- 63 -
ZGHEIB Sara
Odile BROUX (EA 4490 - HARDOUIN Pierre)
Relation entre adiposité médullaire et masse osseuse dans un modèle murin de restriction calorique suivie d’une phase
de récupération
ZGHEIB Sara
Physiopathologie des Maladies Osseuses Inflammatoires, EA4490, ULCO-Lille2, Boulogne /mer, Université Lille Nord de France
L’anorexie mentale est un trouble du comportement alimentaire caractérisé par une recherche obsessionnelle de minceur, une forte réduction
de la prise alimentaire et une distorsion de l’image de soi. Les patientes présentent de multiples perturbations neuroendocrines et métaboliques
qui induisent notamment une ostéopénie (95% des cas) et une ostéoporose avec un risque fracturaire multiplié par 7, y compris après le
rétablissement des patientes. Plusieurs études ont montré une augmentation de l’adiposité médullaire osseuse , qui pourrait être liée à une
hypoleptinémie, une résistance à la GH, une augmentation des acides gras libres associée à la mobilisation des réserves lipidiques dans les
tissus adipeux extra-osseux.
L’objectif du projet de thèse est d’étudier la perte et la récupération osseuse et les mécanismes impliqués dans ces deux processus. Dans ce
but nous avons développés un modèle murin de restriction alimentaire associé à un stress chronique induit par la séparation, appelé SBA
(Separation-Based Anorexia). Des souris femelles C57Bl/6 en fin de croissance rapide sont placées dans des cages divisées en 6
compartiments par des parois en plexiglas pour induire le stress chronique, ce stress chronique est associé à une restriction alimentaire
progressive de 6h jusqu’à 2h/jour sur une période de 10 semaines, ce protocole SBA est suivi d’une phase de Récupération (REC) de 10
semaines en conditions standard.
Le suivi de la masse corporelle des souris montre qu’après 2 semaines du protocole les souris SBA ont perdu 25% de leur poids initial, ce poids
est maintenu constant jusqu’au sacrifice, à noter que cette diminution du poids est de 40% par rapport aux souris Ctrl au même âge. De plus le
suivi des masses grasse et maigre révèle une perte de 15% de la masse musculaire et de 40% de la masse adipeuse au bout d’une semaine
puis stabilisation de ces pertes tout au long du protocole SBA. Le cyclage journalier montre une perturbation du cycle œstral par rapport aux
souris Ctrl. La masse minérale stagne rapidement alors celle des Ctrl continue à augmenter. Le comptage des adipocytes médullaires des tibias
en zone proximale montre qu’après deux semaines du protocole SBA on constate une diminution de cette adiposité. Paradoxalement, après 10
semaines du protocole SBA on a un doublement de cette adiposité médullaire par rapport au Ctrl
En phase de récupération les souris issues du protocole SBA reprennent rapidement du poids. Et après 2 semaines de REC on a une reprise
complète des masses maigre et grasse comparable au groupe Ctrl de même âge. La masse minérale n’est corrigée qu’à 10 semaines de
récupération malgré une adiposité médullaire qui reste élevée.
Des dosages sanguins des différents facteurs qui sont touchés en anorexie mentale (cortisol, adiponectine, leptine, GH, IGF-1, T3) sont en train
d’être achevés afin de valider définitivement notre modèle animal.
L’ensemble des paramètres évalués dans ce modèle miment ce qui est observé dans la pathologie humaine. La principale exception étant la
récupération totale de masse osseuse chez les souris. Nous allons par la suite étudier la microarchitecture osseuse pour déterminer si la
récupération osseuse est également qualitative et rechercher quels sont les mécanismes qui permettent cette récupération et pourquoi ils ne
sont pas effectifs chez l’humain
- 64 -
Colloque Annuel des Doctorants – 11 Septembre 2012
Comité d’Organisation
Alaa AL SAABI, François AUBERT, Sébastien BONTEMPS-GALLO,
Céline CARPENTIER, Bachra CHOUFI, Swan FIRQUET,
Solene GATAULT, Caroline GRONNIER, Fanny JUMEAU,
Cyril LAURENT, Pierre MARTINEZ, Remi MONTAGNE,
Nicolas PORET, Gurvan QUENIAT, Mohamed-Sami TRABELSI,
Romain VERHAEGHE, Marine WARNIER
Malika Hamdane, Jean-Jacques Hauser
François Delcroix, Nathalie Jouy, Murielle Verghote
Avec la participation des autres membres du Comité d’Animation Scientifique
de l’Ecole Doctorale Biologie Santé de Lille :
Kadiombo BANTUBUNGI-BLUM, Christelle CAUFFIEZ, Julie DUMONT,
Emmanuel HERMANN, Sandrine HUMEZ, Thierry JOUAULT, Steve LANCEL,
Michaël PERRAIS, Olivier PETRAULT, Olivier PLUQUET, Albin POURTIER,
Pierre-Eric SAUTIERE, Xavier THURU
Le Comité d’Organisation exprime ses remerciements aux Institutions et
Sociétés qui ont participé à l’organisation du colloque 2012 :

POISSY Julien - Ecole Doctorale BIOLOGIE SANTE

Transcription

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