Production de sinalbine extraite de graines de moutarde blanche de

FICHE D’APPLICATION
Benoît PINEL1, Jérémy MEUCCI1, Olivier SUAREZ1, François DE LA POYPE1, Alix TORIBIO2, Luc MARCHAL3,
Jean-Marc NUZILLARD2, Alain FOUCAULT3 et Jean-Hugues RENAULT2
Production de sinalbine extraite de graines de
moutarde blanche de l’échelle laboratoire à
industrielle par CPC en mode échange d’ions forts
RÉSUMÉ
La purification à l’échelle pilote avec une productivité élevée du p-hydroxybenzylglucosinolate, ou sinalbine,
un glucosinolate extrait des graines de moutarde blanche (Sinapis alba var. concerta, Brassicaceae) a été réalisée
en utilisant une variante de la chromatographie à contre courant : la chromatographie de partage centrifuge
en mode échange d’ions fort (SIXCPC, pour Strong Ion-eXchange Centrifugal Partition Chromatography).
Initialement, l’isolement de la sinalbine a été effectué à l’échelle du laboratoire, obtention de 2,4 g sur un appareil
FCPC® A200 de la société Kromaton, puis la montée en échelle a été réalisée avec un pilote CPC comportant
une colonne de 5,7 litres permettant ainsi d’obtenir 70,3 g de sinalbine en moins de 3 heures. Une seconde
montée en échelle permettant le passage éventuel d’un rotor de 5 litres à un rotor de 20 litres pourrait permettre
de purifier 240 g par injection. Les résultats montrent que la production de sinalbine à l’échelle pilote, mais
également industrielle, est envisageable par SIXCPC et donne ainsi accès à ces composés avec des puretés
et des quantités permettant d’envisager des études pharmacologiques et de biodisponibilité.
MOTS CLÉS
Sinalbine, agent anticancéreux, chromatographie par échange d’ions forts, chromatographie de partage
centrifuge, montée en échelle
I - Introduction
Evolution
La Chromatographie de Partage Centrifuge (CPC)
constitue une branche de la Chromatographie à Contre
Courant (CCC). La CCC est une technique de
chromatographie liquide-liquide sans support solide,
basée sur les différences de partage des solutés entre
deux phases liquides non miscibles, voir l’article « du
milligramme au kilogramme : une technique séparative,
la chromatographie à contre courant (NDR, en page
18 de ce numéro).
Cette technique très capacitive présente de
nombreux avantages, tels que : l’absence de support
solide (celle-ci induisant l’absence de phénomènes
d’absorption irréversible et/ou de dégradation des
solutés et l’obtention de taux de recouvrement des
produits injectés proches de 100 %), la possibilité
d’atteindre des sélectivités très élevées, la possibilité
de réaliser des montées en échelle de manière
relativement aisée et une faible consommation de
solvant. Comme pour les autres techniques de
chromatographie liquide plus conventionnelles, il
existe trois modes de développement en CCC et
donc en CPC : le mode frontal, le mode par élution
(phase normale et inverse) et le mode par déplacement
(pH-zone refining et échange d’ions). De plus, ces
différents modes peuvent être mis en œuvre sur une
colonne unique. Les modes par élution et par
déplacement sont les plus couramment utilisés.
Nous allons développer plus particulièrement le
déplacement par échange d’ions forts (SIXCPC)
car celui-ci sera utilisé par la suite pour la séparation
ainsi que la purification de glucosinolates (GSLs) tel
que le p-hydroxybenzylglucosinolate (sinalbine).
Les modes de développement par déplacement
comme le SIXCPC (1) ou le pH-zone refining
introduit par Ito et al. (2) présentent l’avantage de
pouvoir atteindre des productivités très élevées, ce
qui les rend particulièrement intéressants pour des
utilisations industrielles. Le développement par
SIXCPC fait intervenir des ions lipophiles appelés
« échangeurs » (Aliquat 336® ou chlorure de
trioctylméthylammonium) présents en phase
stationnaire organique, des espèces nommées «
déplaceurs » (iodures) présentes en phase mobile
aqueuse, et bien entendu les analytes qui doivent
être sous forme ionique. Le mécanisme d’échange
d’ions est le suivant : les analytes dissous dans de la
phase mobile aqueuse (sans déplaceur) vont dans
un premier temps « s’associer » avec l’échangeur
lipophile. Ils seront alors extraits de la phase mobile
aqueuse vers la phase stationnaire organique en
fonction de leur constante d’association avec
l’échangeur. Il en résulte un début de fractionnement
de l’extrait injecté, dans la mesure où plus la
constante d’association analyte/échangeur est
grande, plus le composé sera extrait « tôt » dans la
1
Kromaton SARL – Atelier 3 – ZA Vernusson Pierre Martine – 39, rue Cugnot – Ste-Gemmes-sur-Loire 49130 – E-Mail : [email protected]
www.kromaton.com
2
FRE CNRS 2715 – IFR 53 Biomolécules – UFR Pharmacie – Université de Reims Champagne-Ardenne – Bât. 18, Moulin de la Housse – BP 1039 – 51687 Reims Cedex 2
3
Laboratoire de Génie des Procédés-Environnement-Agroalimentaire – Université de Nantes – UMR CNRS 6144 – CRTT – BP 406-44602 – Saint-Nazaire Cedex
SPECTRA ANALYSE n° 267 • Avril - Mai 2009
35
FICHE D’APPLICATION
colonne. Dans un second temps, la phase mobile 2
(avec déplaceur) est pompée à travers la phase
stationnaire,ledéplaceurs’associantpréférentiellement
avec l’échangeur ce qui permet ainsi de déplacer les
analytes vers la phase mobile, et ainsi de les mobiliser
dans la colonne de CPC.
Le principe de l’échange d’ions repose sur la combinaison
des affinités des différentes espèces (force ionique)
pour l’échangeur d’ions (et/ou la stabilité des espèces
formées avec l’échangeur) ainsi que le caractère hydrophobe/hydrophile (KD) de chaque espèce. La présence
du groupement sulfate (OSO3-) sur la partie aglycone
des GSLs induit un caractère anionique fort, tandis
que la partie glucosidique amène la forte hydrophilie.
C’est pourquoi ces métabolites secondaires sont de
bons candidats pour la technique SIXCPC. La Figure 1
illustre le processus chromatographique mis en œuvre
pour la purification par SIXCPC de GSLs.
Les GSLs sont des métabolites secondaires que l’on
rencontre dans la plupart des Brassicaceae ou
Crucifères ainsi que d’autres familles de plantes de
l’ordre des Capparales. Ce sont des phytoanticipines :
ils apparaissent au sein des vacuoles cellulaires dès le
début de croissance de la plante et sont fabriqués en
permanence, même en l’absence de substances
pathogènes. Ils sont hydrolysés par une enzyme
spécifique (la myrosinase) lorsque la plante est
agressée. Le végétal libère alors des substances
protectrices actives (isothiocyanates, dérivés indoliques,
nitriles, thiocyanates) qui contribuent à sa défense.
Ces composés libérés comme l’isothiocyanate de
p-hyroxybenzyl possèdent des propriétés antimicrobiennes et anti-insecticides (3) tandis que le
sulforaphane, dérivant de la glucoraphanine du
brocoli, présente des propriétés anticancéreuses
avérées (4).
Les GSLs sont des esters de (Z)-N-hydroximinosulfate
contenant un atome de soufre lié à une molécule de
β-D-glucose et une chaîne latérale R variable. Le radical
R peut être de nature aliphatique (saturé ou insaturé,
linéaire ou ramifié…), aromatique (phénolique, benzylé…)
ou encore hétérocyclique indolique…) (5). Il existe plus
de 120 GSLs différents recensés à ce jour. La plante
herbacée dont nous allons extraire les GSLs et les
purifier par SIXCPC est la moutarde blanche (Sinapis
alba sp.). Elle contient une douzaine de GSLs, parmi
eux, nous avons entrepris de purifier le glucosinolate
majoritaire : la sinalbine (figure 2). Il est intéressant
de noter que la propriété mise en œuvre pour purifier
ce métabolite secondaire, à savoir la faculté des
ammoniums quaternaires à s’associer avec les sulfates,
est utilisée par la plante pour véhiculer la sinalbine.
En effet, cette dernière est souvent associée à un ester
aromatique de choline : la sinapine (figure 2).
Différentes molécules telles que les GSLs ou encore
les anthocyanes ont déjà été purifiées par la méthode
SIXCPC sur un FCPC® A200 (6-8), c’est pourquoi
nous allons utiliser cette même méthode pour la
purification de la sinalbine issue des graines de
moutarde blanche. Nous avons tout d’abord réalisé la
purification de la sinalbine sur un appareil FCPC®
A200 muni d’une colonne de 200 mL puis nous avons
effectué une montée en échelle de cette purification
en passant sur un appareil FCPC® B5000 comprenant
un rotor de 5700 mL et enfin nous discuterons d’une
industrialisation potentielle sur un FCPC® P20
comprenant un rotor de 20 L. L’objectif de cet article
est de montrer que la montée en échelle de l’échelle
laboratoire à pilote puis l’industrialisation est aisée
sans modifier la pureté de la sinalbine obtenue et sans
grande augmentation de temps de manipulation.
II - Matériels et méthodes
1. Instrumentation
Le chromatographe de partage centrifuge à l’échelle laboratoire est un FCPC® A200. Le rotor est composé de 20 disques
de partage (1320 cellules de partage : 0,130 mL par cellule ;
capacité totale de la colonne de 200 mL ; volume mort de la
colonne de 32,3 mL). La distance entre le centre du rotor et
chaque cellule est de 105 mm. La vitesse de rotation peut
être ajustée de 0 à 2000 tpm (tours par minute), produisant
Affinité pour l'échangeur
zone D
Phase stationnaire organique
contenant l'échangeur (Ech+)
Concentration dans la
phase mobile aqueuse
Phase mobile aqueuse
contenant le déplaceur (Dépl-)
zone n
zone 2
zone 1
zone R
Al336+
Al336+
Al336+
Al336+
Al336+
Dépl
GSL0
GSL2
GSL1
Ret
GSLnNa+
GSL2Na+
GSL1Na+
INa+
" Front de reteneur "
" Front de déplaceur "
Dépl
Na+
GSLnNa+
CINa+
GSL2Na+
GSL1Na+
CINa+
Longueur de colonne
Figure 1
Train isotactique de la sinalbine et ses métabolites dans le mode de déplacement par échange d’ions forts (SIXCPC).
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SPECTRA ANALYSE n° 267 • Avril - Mai 2009
Fiche d’application
Production de sinalbine extrait de graines de moutarde blanche
de l’échelle laboratoire à industrielle par CPC en mode échange d’ions forts
sinalbine
OH
6'
4'
O
1'
5'
HO
HO
3'
2'
2
5
3
OH
N
O3SO
H 3C
KA 1 (Château-Thierry, France), le filtrat a été
évaporé jusqu’à obtenir un extrait sec de GSLs
respectivement (102 g et 370 g). L’extrait a été
stocké à -10 °C jusqu’à utilisation pour la
purification par CPC.
6
OH
O
+
N
H3C CH
3
O
sinapine
OCH3
OH
OCH3
Figure 2
Structure chimique de la sinalbine et de la sinapine.
un champ de force centrifuge dans les cellules de partage
d’environ 120 g à 1100 tpm et 420 g à 2000 tpm. Le FCPC®
A200 est équipé d’une pompe binaire à gradient haute
pression Dionex P580HPG 4 (Sunnyvale, Etats-Unis). La
valve d’injection à basse pression Upchurch (CIL Cluzeau ;
Sainte-Foy-La-Grande, France) est équipée d’une boucle
d’injection de 21 mL.
Le chromatographe de partage centrifuge à l’échelle
pilote est un FCPC® B5000 développé par la société
Kromaton SARL (Ste-Gemmes-sur-Loire, France). Il
est équipé de deux rotors contenant chacun 20
disques de partage, chaque disque contient 27 cellules de
partage (1080 cellules de partage : 4,13 mL par cellule ;
capacité totale de la colonne de 5,7 L ; volume mort
de la colonne de 1,232 L). La distance entre le centre
du rotor et chaque cellule est de 142,5 mm. La vitesse
de rotation peut être ajustée de 0 à 1200 tpm,
produisant un champ de force centrifuge dans les
cellules de partage d’environ 120 g à 900 tpm et 410 g
à 1200 tpm. Le FCPC® B5000 est équipé d’une pompe
Dynamax SD-1 avec une tête de pompe titan 800
(Varian ; Les Ulis, France). Le débit peut être ajusté
de 0 à 800 mL/min.
2. Système biphasique de solvants
Le système de solvants a été préparé en mélangeant
dans une ampoule à décanter de l’acétate d’éthyle, du
n-butanol et de l’eau dans les proportions (3:2:5, v/v).
La phase mobile 1 (3,5 L) correspond à la phase
aqueuse sans ajout d’iodure de potassium. La phase
mobile 2 (4,5 L) correspond à la phase aqueuse avec
ajout de 80 mM d’iodure de potassium. La phase
stationnaire (6 L) est la phase organique avec ajout de
80 mM d’Aliquat 336®.
3. Extraits bruts de glucosinolates
Des graines de moutarde blanche (Alpha semences ;
Douai, France) respectivement 1,5 kg et 5 kg pour
les manipulations sur FCPC® A200 et FCPC® B5000,
ont été immergées dans un volume d’eau bouillante,
de respectivement 9 L et 30 L, correspondant à six
fois la masse de graines. Une fois la température
abaissée à 70 °C, le mélange a été agité pendant 4h.
Le surnageant a été séparé du mélange chaud par
filtration (filtre papier Whatman No 4). Un volume
équivalent d’éthanol a ensuite été ajouté trois fois
pour précipiter les mucilages. Après séparation
solide/liquide sur un séparateur Westfalia de type
4. Préparation des échantillons
• Echantillon pour l’échelle laboratoire (FCPC® A200) :
12 g d’extrait brut de GSLs dissous dans 19 mL de
phase mobile aqueuse 1 et saturés par 1 mL de phase
organique stationnaire sans reteneur Aliquat 336®.
• Echantillon pour l’échelle pilote (FCPC® B5000) :
341 g d’extrait brut de GSLs dissous dans 1200 mL de
phase mobile aqueuse 1 et saturés par 10 mL de phase
organique stationnaire sans reteneur Aliquat 336®.
5. Analyse des fractions de CPC
Toutes les fractions CPC issues des FCPC® A200 et
FCPC® B5000 ont été analysées par chromatographie
sur couche mince sur des plaques de gel de silice
Merck 60 F 254. Un mélange n-butanol/acide acétique/
eau (60:15:25 v/v) a été utilisé comme solvant d’élution
et du nitrate d’argent ammoniacal comme agent
révélateur. Après chauffage des plaques pendant
2 minutes à 120 °C, des tâches brunes correspondant
à la sinalbine sont apparues.
Le dosage de la sinalbine a été réalisé sur un système
CLHP Dionex Summit équipé d’une pompe P580,
d’un injecteur automatique ASI-100, d’un four à
colonne STH, d’un détecteur à barrettes de diodes
UVD340S et d’une colonne C18 Uptisphere 5HDO25QS (250×4,6 mm de diamètre interne, 5 μm de
taille de particules ; Interchrom, Montluçon, France).
Le solvant utilisé était composé de 10 mM d’Aliquat
336® dissous dans un mélange acétonitrile/eau 50:50
pompé à un débit de 1 mL/min. La détection UV est
effectuée à λ=235 nm. La température du four a été
fixée à 25 °C. Les données chromatographiques ont
été enregistrées par le logiciel Chromeleon, version
6.0.1(Dionex).
Les analyses RMN 1H, 13C, COSY (spectroscopie de
corrélation), HSQC (Heteronuclear Single Quantum
Correlation) et HMBC (Heteronuclear Multiple Bond
Correlation) ont été réalisées dans D2O sur un
spectromètre Bruker (Wissembourg, France) Avance
DRX 500 (1H à 500 MHz et 13C à 125 MHz).
Les analyses de spectrométrie de masse ESI ont été
réalisées sur un appareil Micromass (Guyancourt,
France) Q-TOF (Quadripole - Time Of Flight)
6. Procédure de purification par CPC
Les conditions expérimentales des manipulations sur
FCPC® A200 et FCPC® B5000 sont résumées dans le
Tableau I (voir page suivante).
Les colonnes ont d’abord été remplies en mode
descendant par de la phase stationnaire organique
contenant le reteneur (Aliquat 336®). Les échantillons
ont été injectés dans la colonne à des débits de 2 mL/min
et 50 mL/min à 1200 tpm et 700 tpm, respectivement
SPECTRA ANALYSE n° 267 • Avril - Mai 2009
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FICHE D’APPLICATION
pour les manipulations laboratoire et pilote. Ensuite,
la phase mobile aqueuse 1 (sans déplaceur) a été pompée
pendant 40 minutes avec les mêmes débits afin
d’extraire les GSLs vers la phase stationnaire organique
et éluer les impuretés polaires comme les polyphénols ou
les sucres libres. Une fois ces impuretés éluées, la phase
mobile 2 a été pompée pendant respectivement 40 et
50 minutes. Les fractions ont été récoltées toutes les
minutes (échelle laboratoire) et toutes les 2 ou 5 minutes
(échelle pilote) avant d’être analysées par CCM.
III - Résultats et discussion
L’objectif de cet article est de démontrer que le
mode de développement SIXCPC peut être appliqué
à la production de sinalbine à l’échelle pilote puis
pourrait être envisagé à l’échelle industrielle.
Le principal avantage du mode de développement
par déplacement en CCC ou en CPC est son aspect
capacitif. Le mode particulier par SIXCPC ne
déroge pas à cette règle : il permet d’injecter jusqu’à
10 fois plus d’échantillon que le mode par élution.
En effet, en SIXCPC ou en pH-zone refining, la
colonne peut être remplie jusqu’à saturation de la
phase stationnaire (la charge n’est limitée que par
la solubilité de l’échantillon) sans diminuer le
pouvoir de séparation.
Capacité de la colonne CPC
L’un des atouts majeurs de la CPC est la grande
facilité pour l’utilisateur de réaliser la montée en
échelle d’une manipulation. En effet, il suffit
d’appliquer le principe de la linéarité des volumes
entre des colonnes de différentes tailles pour trouver
les nouveaux paramètres chromatographiques
comme le débit de phase mobile ou la masse
d’échantillon injectée.
La purification de sinalbine par SIXCPC a été mise
au point à l’échelle laboratoire. La Figure 3 (voir
page suivante) montre le chromatogramme
classiquement obtenu dans le cadre de ce type
d’expérience. Il résulte de l’injection de 12 g
d’extrait de graine de moutarde blanche. La
quantité d’échangeur (Al336) a été calculée sur la
base d’une teneur d’environ 20 % de GSL dans
l’extrait. Des travaux précédents avaient montré
qu’un rapport échangeur/analytes voisin de 4-5
était optimal. Les conditions expérimentales sont
présentées dans le Tableau I. Les fractions éluées
entre 127 et 162 min ont été rassemblées, évaporées
à sec et ont fourni 2,35 g de sinalbine à 98 %.
Comme précédemment expliqué, la transposition
sur l’appareil pilote a été réalisée en appliquant le
facteur de « scale-up » simplement calculé sur la
base du rapport des volumes des colonnes
laboratoire et pilote. Ce rapport est de 28,5, et il a
été directement utilisé pour adapter la masse
Echelle laboratoire
Echelle pilote
200 mL
5700 mL
Facteur de montée en échelle
Echantillon
Système biphasique de solvants
Phase stationnaire (PS)
Phase mobile (PM)
~28
12 g dans 1 mL de PS
+ 19 mL de PM sans déplaceur
AcOEt / n-BuOH / eau 3:2:5, v/v (mode descendant)
Phase organique supérieure + Al336 (80 mM)
Phase aqueuse inférieure + NaI (80 mM)
Après 60 min d’élution
Teneur en GSL estimée
Phase aqueuse inférieure + NaI (80 mM)
après 40 min d’élution
~20 % (m/m)
Ratio échangeur/GSL estimé
Ratio déplaceur/GSL
341 g dans 100 mL de PS
+ 1,2 L de PM sans déplaceur
2,2
1
1
Débit
2 mL/min
50 mL/min
Vitesse de rotation
1200 tpm
1000 tpm
71%
82%
23 bars
24 bars
λ = 235 nm (UV, online)
TLC (offline)
Temps de collecte (volume)
2 min (4 mL)
5 min (250 mL)
Masse de sinalbine obtenue
avec une pureté > 98 % *
2,35 g (19,5 %)
70,3 g (20,6 %)
Consommation totale de solvants
0,44 L
13,6 L
Concentration en GSL dans les fractions en
sortie de colonne
75 mM
79 mM
Rétention de la phase stationnaire
Perte de charge
Système de détection
Tableau I
Conditions expérimentales des purifications de sinalbine effectuées sur FCPC® A200 et FCPC® B5000. * rendement
par rapport à l’extrait brut
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Fiche d’application
Production de sinalbine extrait de graines de moutarde blanche
de l’échelle laboratoire à industrielle par CPC en mode échange d’ions forts
Etape de lavage : phase aqueuse sans déplaceur
Etape de déplacement : phase aqueuse avec déplaceur (NaI)
Absorbance (235 nm)
5000
4000
3000
Front de solvent
2000
Sinalbine
1000
-500
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
160
170
182
Temps (min)
Figure 3
Chromatogramme obtenue pour la purification de sinalbine extrait de graines de moutarde blanche.
RMN 1H
Analyse CLHP
λ = 225 nm
mAU
150
5,078 min
100
-20
0
7.0
5 10 15
min
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
ppm
Rf
sinalbine
0.18
19 20
21
22
24
25
26
28
30 31 32
Fractions CPC
Figure 4
Fractogramme, chromatogramme de chromatographie liquide haute performance et spectre RMN 1H obtenue
pour la sinalbine extraite des graines de moutarde
d’échantillon injectée (341 g) et le débit de phase
mobile (50 mL/min). Les concentrations
d’échangeur et de déplaceur, ainsi que le champ
de force généré par la colonne (F=ω2r) ont été
conservés afin de garder constantes les
conditions chromatographiques. Pour ce dernier
aspect, un ajustement de la vitesse de rotation
afin de tenir compte de la différence de rayon
des deux rotors CPC a été réalisé. L’injection
des 341 g d’extrait de GSL dans la colonne pilote
de 5 litres a permis la séparation de 70,3 g de
sinalbine, collectée entre 120 et 160 min, ce qui
correspond à une productivité d’environ 560 g/
j. Le fractogramme obtenu par chromatographie
sur couche mince est présenté Figure 4.
Que ce soit pour la séparation à l’échelle du
laboratoire ou pour celle à l’échelle pilote, la
concentration en sinalbine dans l’effluent est
d’environ 80 mM, c’est-à-dire égale à celle du
déplaceur. Cette constatation confirme si besoin
en était que le mode chromatographique
en jeu relève bien du concept de déplacement.
De manière prospective, il est aussi possible
d’envisager la montée en échelle en réalisant la
purification de sinalbine sur un appareil FCPC®
de 20 L. Cette manipulation n’a pas encore été
réalisée, toutefois le principe de la linéarité des
volumes permet d’estimer les résultats que l’on
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FICHE D’APPLICATION
Echelle labo.
Echelle pilote
Production
Capacité de la colonne CPC
200 mL
5700 mL
20 000 mL
Masse d’échantillon injectée
12 g
341 g
1193 g
Montée en échelle
~ 28 x
~ 3,5 x
Volume total de solvants
consommés
0,4 L
13,6 L
46,7 L
Masse totale
de sinalbine purifiée
avec une pureté > 98 %
2,35 g
70,3 g
238 g
Rendement en sinalbine
par rapport à la masse initiale
de graines de moutarde
1, 33 %
1,52 %
/
Tableau II
Résultats attendus de la montée en échelle de l’échelle pilote (FCPC® B5000) à industrielle (FCPC® P20).
pourrait en attendre (tableau II). Le passage
d’un volume de colonne de 5,7 L à 20 L
représente une montée en échelle de 3,5×.
IV - Conclusion
Avant le développement récent d’appareils
industriels de chromatographie de partage
centrifuge tel que le FCPC® B5000, les études
étaient limitées à la purification de molécules
naturelles ou synthétiques à l’échelle laboratoire
ou semi-préparative (9, 10). Dernièrement,
quelques exemples d’applications industrielles
de chromatographie à contre courant utilisant
le mode par élution ont été publiés (11). En
revanche, peu de procédures utilisant les modes
par déplacement tel que le pH-zone refining ou
l’échange d’ions ont été réalisées. Pourtant l’un
des avantages majeurs de ces modes de
développement est de pouvoir augmenter la
capacité de chargement de la colonne
permettant ainsi de conduire à de grandes
productivités sans diminuer le pouvoir de
séparation (12, 13). Cette étude a démontré que
le mode de déplacement SIXCPC possède de
nombreux atouts et qu’il est intéressant de
l’utiliser à l’échelle industrielle car la montée en
échelle est très aisée à mettre en œuvre. La purification de plus de 70,3 g de sinalbine (23,6 g/h),
a facilement et rapidement été transférée et
appliquée de l’échelle laboratoire à l’échelle
pilote via le FCPC® B5000. En effet, la manipulation
sur le FCPC® B5000, sans réelle étape
d’optimisation, n’a duré que 0,2 h de plus que
celle réalisée sur le FCPC® A200. Les rendements
en sinalbine sont de 1,33 % avec le FCPC® A200
et 1,52 % avec le FCPC® B5000. On peut
s’attendre à des rendements similaires en
utilisant le FCPC® P20. Les résultats ont aussi
montré que la SIXCPC est une méthode robuste
et efficace qui peut être appliquée à différentes
échelles du moment que les paramètres
chromatographiques sont choisis avec soin
(système biphasique, nature et concentration
du déplaceur et de l’échangeur).
BIBLIOGRAPHIE
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