PT-Multi Calibrator

OPAT G03 C1642 (1803)
PT-Multi Calibrator
Intended Use
Calibrator set for the direct calibration of the prothrombin time (PT) in INR and % of norm.
For the determination of a local ISI value.
Principle of the Method
The prothrombin time (PT) is generally used for monitoring oral anti-coagulation therapy. It
is recommended by the World Health Organization (WHO) to report PT values in "International Normalized Ratio" (INR). The INR is calculated via the ISI (International Sensitivity Index) and the MNPT (mean normal prothrombin time) using below equation:
ISI
PT
INR = ––––––––
MNPT
The manufacturer provides the corresponding ISI value for each lot of thromboplastin.
However, the ISI value may be influenced by local, laboratory specific conditions and the
particular instrument used. Therefore the use of a locally determined ISI is recommended 1,4.
The MNPT is in accordance with the ISTH (International Society on Thrombosis and
Haemostasis) the geometric mean of at least 20 healthy adults 2,4.
The calibrant plasmas 1 through 6 of the PT-Multi Calibrator kit allow you to establish reference curves for reporting PT values in INR and % of norm, using Dade Behring Thromboplastin reagents. The reference curves allows for the direct interpolation of an INR for a
patient sample (local INR calibration, calibrant plasma procedure).
Using the assigned values, the PT-Multi Calibrator kit can be used:
• For direct determination of the PT in INR (syn.: calibrant plasma procedure; local INR
calibration).
• For direct determination of the PT in % of norm.
Further the PT-Multi Calibrator can be used to establish the laboratory-, instrument- and
reagent specific ISI and Mean Normal PT.
Reagents
Materials provided
PT-Multi Calibrator Level 1 through 6:
Kit with 1 x 6 vials, 1 mL each (lyophilized), Code No. OPAT 035
Each kit of PT-Multi Calibrator contains a lot-specific table of assigned values.
The assigned values indicated in % of norm are valid only for the thromboplastins listed in
the lot-specific table of assigned values.
The assigned values indicated in INR are valid only for the thromboplastins listed in the lotspecific table of assigned values.
Composition
The PT-Multi Calibrator set contains 6 calibrant plasmas for the calibration of the PT. The
calibrant plasmas contain human pool plasma stabilized with buffer.
Certain calibrant plasmas may contain added portions of animal plasma or preprocessed
human plasma. The calibrant plasmas are lyophilized and calibrated.
The PT-Multi Calibrator kit is free of preservatives.
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use only.
2. Each individual blood donation intended for use in the manufacturing of the calibrant
plasma level 1 though 6 is tested for HBsAg, Anti-HCV, Anti-HIV1 and Anti-HIV2 by FDArequired testing. Only donations with negative findings are used.
Nevertheless, since absence of infectious agents cannot be totally proven, all materials
obtained from human blood should always be handled with due care, observing the
precautions recommended for biohazardous material 5.
Preparation of the Reagents
1. Reconstitute the PT-Multi Calibrator level 1 through 6 with the amount of distilled water
indicated on the label.
2. Allow to stand for at least 30 minutes at +15 to +25 $C.
3. Agitate carefully before using (prevent foam formation).
Storage and Stability
The calibrant plasmas level 1 through 6 of the PT-Multi Calibrator kit must be stored at +2 to
+8 $C and may be used up to the date given on the label.
Stability after reconstitution (closed vial), at
+2 to +8 $C
8 hours
+15 to +25 $C 4 hours
) -18 $C
4 weeks
PT-Multi Calibrator level 1 through 6 may be frozen (see stability data) and thawed again
once after reconstitution. The calibrant plasmas must be frozen as quickly as possible in the
original vials, well sealed. Thaw in a water bath at +37 $C for a maximum of 10 minutes. The
calibrant plasmas must be used for calibration within 2 hours at +15 to +25 $C.
Contamination by microorganisms must be avoided.
Procedure
Materials provided
Lyophilized calibrant plasmas
PT-Multi Calibrator Level 1
PT-Multi Calibrator Level 2
PT-Multi Calibrator Level 3
PT-Multi Calibrator Level 4
PT-Multi Calibrator Level 5
PT-Multi Calibrator Level 6
Additional materials required, but not provided
Dade Behring Thromboplastins
Thromborel® S
Code No. OUHP
Dade® Innovin®
Code No. B4212
®
Dade Thromboplastin C plus Code No. B4216
Depending on the thromboplastin used a different number of calibrant plasmas has to be used
for calibration. Calibrant plasmas level 1 through 6 are used with Dade ® Innovin® and Dade®
Thromboplastin C plus. Calibrant plasma level 1 through 5 are used with Thromborel® S.
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
1
Edition April 2004
Calibration
The primary calibration (value assignment) of the calibration plasmas Level 1-6 in INR is
carried out by the manufacturer. The assigned values of the calibrant plasmas are directly
linked to the international reference preparation (IRP) of the respective thromboplastin in
accordance with WHO guideline 2.
Internal Quality Control
The accuracy of the calibration curve should be assessed by running appropriate controls.
Controls are listed in each related reagent package insert. If controls repeatedly exhibit
systematic deviations from the declared confidence interval of the lot-dependent table of
assigned values, a new reference curve must be established.
Automatic Evaluation
Special instructions for coagulation measuring devices may be obtained from Dade Behring
by request.
Manual Evaluation
1. Calculating an INR reference curve
The prothrombin times of the calibrant plasmas level 1-6 (level 1-5 using Thromborel® S) are
measured in double determinations. The mean values are plotted double-logarithmically (xaxis: INR values; y-axis: prothrombin times in seconds). The calibration points are connected by the best possible straight line. The INR value of patient plasmas can be directly read
off the double-logarithmic representation of this reference curve.
[log (sec)
y
=
=
1/ISI
m
•
•
log(INR)
x
+log (MNPT)]
+b
Note: Only, when using the double-logarithmic scaling may the numeric values for m and b
be read off the graph directly.
2. Calculation of the laboratory-specific, local ISI and MNPT value
The determination of the laboratory-specific, local ISI is based on above equation (1). The
ISI can thus be determined graphically or can be calculated.
Graphical determination of the local ISI and MNPT
Calculate the slope of the INR reference curve generated under (1).
The laboratory-specific ISI corresponds to the reciprocal of the slope (m) of this straight line,
i.e. ISI = 1/m.
Die MNPT [sec] corresponds to the y-axis intercept of the reference curve.
Calculation of the local ISI and MNPT
The local ISI and the MNPT can be calculated on the basis of the linear equation
(y=log(sec); x=log(INR); m=slope of the straight line; b=y-axis intercept). To determine the
parameters of the linear equation refer to standard mathematical procedures.
Local ISI = 1/ m
MNPT
= 10b
Example
Calibrating plasma
L1
L2
L3
L4
L5
L6
sec.
INR
log INR
9.0
1.00
0.00
11.1
1.21
0.08
14.8
1.60
0.20
23.5
2.46
0.39
42.0
4.25
0.63
53.5
5.34
0.73
Slope m
local ISI
y-axis intercept
MNPT
log sec
0.950
1.05
1.17
1.37
1.62
1.73
1.06
0.94
0.96
9.12 sec
NOTE: It is not necessary to determine the local ISI and MNPT when using the INR reference curve. The INR of any PT value in seconds is directly read off the INR reference curve.
This direct INR determination has been shown to improve accuracy of INR reporting, compared
to INR calculation using ISI and MNPT values provided by the manufacturer 1.
Limitations of the Procedure
The reference curve is valid only for the particular PT-Multi Calibrator lot and lot of Dade
Behring thromboplastin reagent. The calibration is instrument and reagent specific. For every new lot of thromboplastin reagent a new calibration is required. A new calibration is further
required with change in experimental conditions, software, and after maintenance and repairs of the instrument.
Bibliography
1. Adcock DM, Johnston M: Evaluation of Frozen Plasma Calibrants for enhanced Standardization of the International Normalized Ratio (INR):A Multi-Center Study. Thromb
Haemost 2002, 87: 74-9.
2. Poller L: The Prothrombin Time. WHO/LAB/98.3
3. Van den Besselaar AMHP: Precision and Accuracy of the International Normalized Ratio
in Oral Anticoagulant Control. Haemostasis 1996, 26: 248-65.
4. Fairweather RB, Ansell J, van den Besselaar AMHP, Brandt JT, Bussey HI, Poller L,
Triplett DA, White RH: College of American Pathologists Conference XXXI on Laboratory Monitoring of Oral Anticoagulant Therapy. Laboratory Monitoring of Oral Anticoagulant
Therapy. Arch Pathol Lab Med 1998, 122: 768-81.
5. U.S. Department of Health and Human Services CDC, Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories, HHS Publication (CDC) 1999, 93-8395: Section II: 8-16.
Dade and Innovin are registered trademarks of Dade Behring, Inc. in the USA, Germany
and other countries.
Thromborel is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA, Germany
and other countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
USA Distributor:
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
PT-Multi Calibrator
Kalibration
Die Deklaration der INR Sollwerte für die Kalibrierplasmen Level 1-6 wird vom Hersteller
durchgeführt. Die Werte beziehen sich gemäß WHO-Richtlinie auf die entsprechenden Internationalen Referenz Thromboplastine (IRP) 2.
Anwendungsbereich
Interne Qualitätskontrolle
Die Richtigkeit der Kalibrationskurve sollte mit geeigneten Kontrollen, die in der jeweiligen
Packungsbeilage des entsprechenden Reagenzes aufgelistet sind, überprüft werden.
Bei wiederholter systematischer Abweichung der Kontrollen vom deklarierten Vertrauensbereich, angegeben in der chargenspezifischen Sollwertetabelle, muss die Kalibrationskurve überprüft und neu gemessen werden.
Kalibratorsatz zur Kalibrierung der Prothrombinzeit (“Prothrombin Time” (PT)) in INR und %
der Norm und zur Bestimmung des laborspezifischen ISI-Wertes.
Prinzip der Methode
Zur Kontrolle der oralen Antikoagulanztherapie ist die Prothrombinzeit (PT) (Synonyme:
Thromboplastinzeit, Quick-Test, "Prothrombin Time") gemäß WHO in "International Normalized Ratio" (INR) anzugeben. Die Berechnung der INR erfolgt unter Verwendung des ISI
(International Sensitivity Index) und der MNPT (siehe unten) nach der Formel:
INR =
PT
–––––––
MNPT
ISI
Manuelle Auswertung
Für jede Thromboplastincharge wird vom Hersteller der entsprechende ISI-Wert angegeben.
Da der ISI-Wert jedoch zusätzlich vom verwendeten Gerät sowie von lokalen, laborspezifischen Einflüssen beeinflußt werden kann, ist ein vor-Ort ermittelter ISI vorzuziehen 1,4.
Als "PT Normalplasma" wird gemäß ISTH (International Society on Thrombosis and
Haemostasis) die "Mean Normal Prothrombin Time" (MNPT) verwendet. Die MNPT wird
berechnet als geometrischer Mittelwert der PT von mindestens 20 gesunden Personen 2,4.
Die Kalibrierplasmen Level 1 bis 6 des PT-Multi Calibrator dienen zur Erstellung von Bezugskurven für die Prothrombinzeit (PT) in % d. Norm und INR unter Verwendung von Dade
Behring Thromboplastin Reagenzien .
Die erstellten Bezugskurven ermöglichen die direkte Bestimmung der INR einer Patientenprobe.
Unter Verwendung der angegebenen Sollwerte kann der PT-Multi Calibrator Satz verwendet werden:
• Zur direkten Bestimmung der PT einer Patientenprobe in INR.
• Zur direkten Bestimmung der PT einer Patientenprobe in % der Norm.
Zusätzlich kann der Kalibratorsatz PT-Multi Calibrator zur Ermittlung der laborspezifischen
Werte für ISI und MNPT herangezogen werden.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
PT-Multi Calibrator Level 1 bis 6:
Packung mit 1 x 6 Flaschen für je 1 ml (lyophilisiert), Bestell-Nr. OPAT 035
Jede Packung PT-Multi Calibrator enthält eine chargenspezifische Sollwertetabelle.
Die deklarierten Sollwerte in % der Norm und INR gelten nur für die auf der chargenspezifischen Sollwertetabelle aufgeführten Thromboplastine.
Zusammensetzung
Der Kalibratorsatz PT-Multi Calibrator enthält 6 Kalibrierplasmen zur Kalibration der PT. Die
Kalibrierplasmen bestehen aus pufferstabilisiertem Humanplasmapool, lyophilisiert und kalibriert. Bestimmte Kalibrierplasmen enthalten Zusätze von Plasma tierischen Ursprungs
oder vorbehandeltem Humanplasma. Der Kalibratorsatz PT-Multi Calibrator ist frei von Konservierungsmitteln.
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in vitro diagnostischen Anwendung
2. Jede individuelle Blutspende, die zur Herstellung der Kalibrierplasmen Level 1 bis 6
vorgesehen war, wurde auf HBs-Ag, Anti-HCV, Anti-HIV1 und Anti-HIV2 untersucht. Für
die Herstellung wurden nur Spenden mit negativem Befund verwendet.
Unabhängig davon sollten alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wegen
nie völlig auszuschließender Gefährdung durch Krankheitserreger mit angemessener
Sorgfalt unter Einhaltung der bei Biogefährdung empfohlenen Sicherheitsmaßnahmen
gehandhabt werden 5.
Vorbereitung der Plasmen
1. PT-Multi Calibrator Level 1 bis 6 mit der auf dem Etikett angegebenen Menge dest.
Wasser rekonstituieren.
2. Mindestens 30 min bei +15 bis +25 $C stehenlassen.
3. Vor Gebrauch vorsichtig (ohne Schaumbildung) schwenken.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Die Kalibrierplasmen PT-Multi Calibrator Level 1 bis 6 sind ungeöffnet bei +2 bis +8 $C zu
lagern und bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Datum verwendbar.
Stabilität nach Rekonstitution (geschlossene Flasche)
+2 bis +8 $C
8 Stunden
+15 bis +25 $C 4 Stunden
) -18 $C
4 Wochen
PT-Multi Calibrator Level 1 bis 6 können nach Rekonstitution einmal eingefroren (siehe Stabilitätsdaten nach Rekonstitution) und wieder aufgetaut werden. Hierzu müssen die Kalibrierplasmen in geschlossener Originalflasche eingefroren werden. Das Auftauen ist im
Wasserbad bei +37 $C in max. 10 min zu vollziehen. Die Kalibrierplasmen sind dann 2
Stunden bei einer Lagerung +15 bis +25 $C verwendbar. Eine Kontamination durch Mikroorganismen ist zu vermeiden.
Testdurchführung
1. Erstellung einer INR-Bezugskurve
Die Prothrombinzeit der Kalibrierplasmen Level 1-6 (Level 1-5 bei Verwendung von Thromborel® S) wird in Doppelbestimmung gemessen. Die Mittelwerte werden gegen die deklarierten INR-Werte aufgetragen (x-Achse: INR-Werte; y-Achse: Gerinnungszeiten in Sekunden). Dabei ist eine doppellogarithmische Skalierung zu verwenden. Durch die Kalibrationspunkte wird die bestmögliche Gerade gelegt. An dieser Bezugskurve kann der INR-Wert
von Patientenplasmen direkt abgelesen werden.
[log (sec)
y
=
=
1/ISI
m
•
•
log(INR)
x
+log (MNPT)]
+b
2. Ermittlung des laborspezifischen, lokalen ISI und der MNPT
Der Bestimmung des laborspezifischen, lokalen ISI-Wertes liegt die unter (1) ermittelte Geradengleichung zugrunde.
Der ISI kann unter Verwendung der ermittelten Prothrombinzeit der Kalibrierplasmen entweder graphisch oder rechnerisch ermittelt werden.
Graphische Ermittlung
Die Steigung der unter (1) erstellten INR-Bezugskurve wird ermittelt.
Der laborspezifische ISI entspricht dem reziproken Wert der Steigung (m) dieser Geraden,
also ISI = 1/m.
Die MNPT [sec] entspricht dem Schnittpunkt der Bezugskurve mit der y-Achse in der doppellogarithmischen Skalierung..
Berechnung des lokalen ISI und der MNPT
Anhand der Geradengleichung kann der lokale ISI- und MNPT- Wert berechnet werden
(y=log(sec); x=log(INR); m=Steigung der Geraden; b=Achsenabschnitt der Geraden). Für
die Berechnung der Parameter der Geradengleichung sind die allgemein üblichen mathematischen Verfahrensweisen anzuwenden.
Lokaler ISI = 1/ m
MNPT
= 10b
Beispiel
Kalibrierplasma
L1
L2
L3
L4
L5
L6
sec.
INR
log INR
9,0
1,00
0,00
11,1
1,21
0,08
14,8
1,60
0,20
23,5
2,46
0,39
42,0
4,25
0,63
53,5
5,34
0,73
Steigung m
laborspezifischer ISI
y-Achsenabschnitt
MNPT
log sec
0,950
1,05
1,17
1,37
1,62
1,73
1,06
0,94
0,96
9,12 sec
Bei Erstellung einer INR-Bezugskurve ist die Berechnung von ISI und MNPT jedoch
nicht erforderlich. Für jede Gerinnungszeit kann die entsprechende INR direkt abgelesen werden. Die direkte INR Bestimmung über die Bezugskurve führt darüber hinaus zu
einer verbesserten Richtigkeit der INR-Bestimmung gegenüber der Verwendung des vom
Hersteller angegebenen ISI- und MNPT -Wertes 1.
Einschränkungen der Testdurchführung
Die Bezugskurve gilt für die jeweilige PT-Multi Calibrator Charge und Dade Behring Thromboplastin Reagenzien-Charge und mufl bei Chargen oder Reagenzwechsel, sowie bei jeder
Änderung der experimentellen Bedingungen neu erstellt werden. Sie ist für die jeweilig verwendete Geräte-Reagenz Kombination zur Bestimmung der Prothrombinzeit spezifisch. Bei
Software Änderungen und nach Gerätewartungen bzw. -reparaturen wird eine neue Kalibrierung erforderlich.
Literatur
Siehe Seite 1.
Dade und Innovin sind eingetragene Marken der Dade Behring Inc. in den USA, Deutschland und anderen Ländern.
Thromborel ist eine eingetragene Marke der Dade Behring Marburg GmbH in den USA,
Deutschland und anderen Ländern.
Mitgelieferte Materialien
Lyophilisierte Kalibrierplasmen
PT-Multi Calibrator Level 1
PT-Multi Calibrator Level 2
PT-Multi Calibrator Level 3
PT-Multi Calibrator Level 4
PT-Multi Calibrator Level 5
PT-Multi Calibrator Level 6
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Zusätzlich benötigte Materialien
Dade Behring Thromboplastine
Thromborel® S
Dade® Innovin®
Dade® Thromboplastin C plus
Automatische Auswertung
Spezielle Vorschriften für Gerinnungsmessgeräte sind von Dade Behring auf Anfrage erhältlich.
Bestell-Nr.: OUHP
Bestell-Nr.: B4212
Bestell-Nr.: B4216
Bei Verwendung der Thromboplastine Dade® Innovin® und Dade® Thromboplastin C plus
wird die Bezugskurve mit 6 Kalibrierplasmen (Level 1-6) erstellt. Bei Verwendung des
Thromboplastins Thromborel® S wird die Bezugskurve mit 5 Kalibrierplasmen (Level 1-5)
erstellt.
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
2
Ausgabe April 2004
PT-Multi Calibrateur
Etalonnage
La détermination des valeurs théoriques en INR des plasmas calibrants niveaux 1 à 6 est
effectuée par le fabricant. Selon les recommandations de l’OMS, les valeurs sont déterminées par rapport à la Thromboplastine Internationale de Référence (IRP)2.
Domaine d’utilisation
Contrôle de qualité interne
L’exactitude de la courbe d’étalonnage doit être contrôlée à l’aide de contrôles adéquats,
selon les indications de la fiche technique du réactif utilisé.
Si on obtient une déviation systématique et répétée des valeurs de contrôles par rapport à
celles indiquées dans le tableau des valeurs théoriques spécifiques à chaque lot comme
domaine de confiance, la courbe d’étalonnage doit être vérifiée et une nouvelle courbe
établie.
Kit de calibrateurs pour l’étalonnage de la détermination du Temps de Prothrombine (TP) en
INR et en % de la normale, ainsi que pour la détermination d’une valeur ISI spécifique au
laboratoire.
Principe de la méthode
Pour le contrôle d’un traitement aux anticoagulants oraux, le Temps de Prothrombine (TP)
(synonyme : Temps de Quick) doit selon l’OMS, être exprimé en « rapport international normalisé » (INR). Le calcul de l’INR se fait en utilisant l’ISI (International Sensitivity Index) et le
MNPT (cf. ci-dessous) selon la formule suivante :
INR =
TP
–––––––
MNPT
ISI
La valeur ISI est indiquée pour chaque lot de thromboplastine. Cependant, la valeur ISI
étant très dépendante de l’appareil utilisé et d’influences locales et spécifiques au laboratoire, il est préférable d’utiliser une valeur ISI déterminée dans le laboratoire1, 4.
Comme « plasma normal TP », utiliser le « Mean Normal Prothrombin Time » (MNPT) selon
les recommandations de l’ISTH (International Society on Thrombosis and Haemostasis). Le
MNPT correspond à la valeur moyenne géométrique du temps de prothrombine d’au moins
20 sujets sains2, 4.
Les plasmas calibrants niveaux 1 à 6 du kit PT-Multi Calibrateur permettent l’établissement
de courbes d’étalonnage pour la détermination du temps de prothrombine (TP) en % de la
normale et en INR avec l’utilisation des réactifs Thromboplastine Dade Behring.
La courbe d’étalonnage ainsi établie permet d’obtenir directement l’INR d’un échantillon de
patient.
A partir des valeurs théoriques indiquées, le kit PT-Multi Calibrateur peut être utilisé pour :
• l’obtention directe du TP d’un échantillon de patient en INR,
• l’obtention directe du TP d’un échantillon de patient en % de la normale.
Par ailleurs, le kit PT-Multi Calibrateur peut également être utilisé pour déterminer des valeurs d’ISI et de MNPT spécifiques au laboratoire.
Réactifs
Conditionnement
PT-Multi Calibrateur, niveaux 1 à 6 :
Coffret de 6 flacons pour 1 ml chacun (lyophilisé), code OPAT 035
Chaque coffret PT-Multi Calibrateur contient un tableau de valeurs théoriques spécifiques à
chaque lot.
Les valeurs théoriques indiquées en % de la normale et en INR ne valent que pour les
thromboplastines précisées dans le tableau des valeurs théoriques spécifiques à chaque
lot.
Composition
Le coffret PT-Multi Calibrateur contient 6 plasmas calibrants pour l’étalonnage du TP. Les
plasmas calibrants sont composés d’un pool de plasmas humains stabilisé par un tampon,
lyophilisé puis calibré. Certains plasmas calibrants sont additionnés de plasma d’origine
animale ou d’un plasma humain prétraité. Les plasmas calibrants ne contiennent aucun
agent de conservation.
Mises en garde et précautions d’emploi
1. Réservé à un usage de diagnostic in vitro.
2. Tout don de sang individuel prévu pour la préparation des plasmas calibrants niveaux 1
à 6 a été testé vis-à-vis de l’AgHBs, de l’anticorps anti-VHC, de l’anticorps anti-VIH 1 et
de l’anticorps anti-VIH 2. Seuls les dons trouvés négatifs ont été utilisés.
Néanmoins, toutes les préparations obtenues à partir de sang humain doivent être manipulées avec les précautions nécessaires en cas de risque biologique, dans la mesure
où l’on ne peut exclure totalement un risque d’infection5.
Préparation des plasmas calibrants
1. Reconstituer chacun des plasmas calibrants niveaux 1 à 6 avec la quantité d’eau distillée indiquée sur l’étiquette.
2. Laisser reposer au moins 30 min à +15/+25$C.
3. Retourner les flacons avec précaution (éviter la formation de mousse) avant emploi.
Stabilité et conditions de conservation
Conservés dans leur flacon non ouvert à +2/+8$C, les plasmas calibrants niveaux 1 à 6
peuvent être utilisés jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.
Stabilité après reconstitution (flacon fermé) :
+2/+8$C
8 heures
+15/+25$C 4 heures
) -18$C
4 semaines
Les plasmas calibrants niveaux 1 à 6 reconstitués peuvent être congelés une fois (cf. stabilité après reconstitution). Les congeler dans leur flacon d’origine bien refermé. Les décongeler au bain-marie à +37$C en 10 min maximum. Une fois décongelés, les plasmas calibrants se conservent 2 heures à +15/+25$C. Eviter toute contamination microbienne.
Réalisation du test
Exploitation manuelle
1. Etablissement de la courbe d’étalonnage en INR
Déterminer en double les temps de prothrombine des plasmas calibrants niveaux 1 à 6
(niveaux 1 à 5 si on utilise le Thromborel® S). Calculer les moyennes des valeurs obtenues
et les reporter sur une échelle bi-logarithmique en fonction des valeurs déclarées d’INR (axe
des x : valeurs INR ; axe des y : temps de coagulation en secondes). Tracer ensuite la
meilleure droite possible à partir des points d’étalonnage. Lire directement sur la droite les
valeurs INR des plasmas de patients.
[log (sec)
y
=
=
1/ISI
m
Autres réactifs nécessaires
Thromboplastines Dade Behring :
Thromborel® S
code OUHP
Dade® Innovin®
code B4212
®
Dade Thromboplastine C plus code B4216
Avec les thromboplastines Dade® Innovin® et Dade® Thromboplastine C plus, la courbe
d’étalonnage s’établit avec 6 plasmas calibrants (niveaux 1 à 6). Avec la thromboplastine
Thromborel® S, elle s’établit avec 5 plasmas calibrants (niveaux 1 à 5).
3
Edition Avril 2004
•
•
log(INR)
x
+log (MNPT)]
+b
2. Etablissement de l’ISI local et spécifique au laboratoire, et du MNPT
La détermination de l’ISI local et spécifique au laboratoire est basée sur l’équation ci-dessus (1.).
L’ISI peut être déterminé soit graphiquement soit arithmétiquement à partir des temps de
prothrombine obtenus pour les plasmas calibrants.
Détermination graphique
Calculer la pente de la courbe d’étalonnage en INR établie comme indiqué en 1.
L’ISI spécifique au laboratoire correspond à la valeur réciproque de la pente (m) de cette
droite, c’est-à-dire ISI = 1/m.
Le MNPT [sec] correspond à l’intersection de l’axe des x sur la courbe d’étalonnage, établie
selon une échelle bi-logarithmique.
Calcul de l’ISI local et du MNPT
L’ISI local et le MNPT peuvent être calculés à partir de l’équation linéaire (y = log (sec) ; x =
log (INR) ; m = pente de la droite ; b = intersection de l’axe des y). Pour le calcul des paramètres de l’équation, utiliser les formules mathématiques standard.
ISI local = 1/m
MNPT
= 10b
Exemple
Plasmas calibrants
L1
L2
L3
L4
L5
L6
sec
INR
log INR
log sec
9,0
1,00
0,00
0,950
11,1
1,21
0,08
1,05
14,8
1,60
0,20
1,17
23,5
2,46
0,39
1,37
42,0
4,25
0,63
1,62
53,5
5,34
0,73
1,73
Pente m
1,06
ISI spécifique au laboratoire 0,94
Intersection de l’axe des y
0,96
MNPT
9,12 sec
Lorsqu’on établit une courbe d’étalonnage en INR, il n’est pas impératif de calculer
l’ISI et le MNPT. L’INR peut être lu directement pour chaque temps de coagulation
obtenu. L’INR obtenu directement sur la courbe d’étalonnage donne d’ailleurs une valeur
plus exacte que celui obtenu en utilisant les valeurs d’ISI et de MNPT données par le fabricant1.
Limites du test
Chaque courbe d’étalonnage n’est valable que pour les lots de PT-Multi Calibrateur et des
réactifs thromboplastine Dade Behring utilisés. Une nouvelle courbe doit être établie à chaque changement de lot ou de réactif, ainsi que pour toute modification des conditions environnementales du test. La courbe est spécifique de la combinaison automate-réactifs utilisés pour la détermination du temps de prothrombine. Une nouvelle courbe doit également
être établie en cas de changement du logiciel, ainsi qu’après toute maintenance ou réparation.
Littérature
Cf. page 1
Dade et Innovin sont des marques déposées de Dade Behring Inc. aux USA, en Allemagne
et dans d’autres pays.
Thromborel est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux USA, en Allemagne et dans d’autres pays.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Réactifs du coffret
Plasmas calibrants lyophilisés :
PT-Multi Calibrateur Niveau 1
PT-Multi Calibrateur Niveau 2
PT-Multi Calibrateur Niveau 3
PT-Multi Calibrateur Niveau 4
PT-Multi Calibrateur Niveau 5
PT-Multi Calibrateur Niveau 6
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
Exploitation automatique
Des adaptations spécifiques aux automates de coagulation sont envoyées sur demande
par Dade Behring.
PT-Multi Calibratore
Calibrazione
I valori nominali in INR dei plasmi calibranti livello 1-6 vengono dichiarati dal produttore.
Questi valori si basano sulle rispettive tromboplastine di riferimento internazionale (IRP),
secondo le linee guida dell’OMS.2
Settore d’impiego
Controllo di qualità interno
L’accuratezza della curva di calibrazione deve essere valutata mediante controlli appropriati, indicati nel foglietto illustrativo del rispettivo reagente. Se i controlli si discostano in maniera sistematica dall’intervallo di accettabilità dichiarato, indicato nella tabella dei valori teorici
specifici del lotto, è necessario ripetere la curva di calibrazione.
Set di calibratori per la determinazione del tempo di protrombina (PT) in INR e % della
norma e per la determinazione del valore ISI specifico del laboratorio.
Principio del metodo
Il tempo di protrombina (PT) viene utilizzato per monitorare la terapia anticoagulante orale.
L’OMS raccomanda di indicare il valore PT sotto forma di “International Normalized Ratio”
(INR). L’INR viene calcolato mediante l’ISI (International Sensitivity Index) e l’MNPT (Mean
Normal Prothrombin Time) secondo la seguente formula:
INR =
PT
–––––––
MNPT
ISI
Il produttore del reagente assegna un valore ISI ad ogni lotto di tromboplastina. Tuttavia, il
valore ISI potrebbe essere influenzato dal tipo di analizzatore utilizzato e dalle condizioni
locali, specifiche del laboratorio. Pertanto, si raccomanda di utilizzare l’ISI determinato localmente.1,4
Come “Plasma normale PT” l’ISTH (International Society on Thrombosis and Haemostasis)
raccomanda di utilizzare il “Mean Normal Prothrombin Time” (MNPT). L’MNPT è la media
geometrica di almeno 20 individui sani. 2,4
I plasmi calibranti 1-6 del PT-Multi Calibratore servono a realizzare le curve di calibrazione
per il tempo di protrombina (PT) in % della norma, con l’utilizzo dei reagenti Tromboplastina
della Dade Behring. Le curve di calibrazione servono alla determinazione diretta dell’INR di
un campione di paziente.
Utilizzando i valori teorici indicati, il kit PT Multi Calibratore può essere utilizzato per:
• la determinazione diretta del PT in INR
• la determinazione diretta del PT in % della norma
Inoltre il set di calibrazione PT-Multi Calibratore può essere impiegato per determinare il
valore ISI specifico del laboratorio e l’MNPT.
Reagenti
Contenuto della confezione
PT-Multi Calibratore livello 1-6:
Confezione da 1 x 6 flaconi da 1 ml ciascuno (liofilizzato), codice OPAT035
Ogni confezione di PT-Multi Calibratore contiene una tabella con i valori teorici specifici del
lotto.
I valori dichiarati in % della norma e INR sono validi esclusivamente per le tromboplastine
indicate nella tabella dei valori teorici specifici del lotto.
Composizione
Il set PT-Multi Calibratore contiene 6 plasmi calibranti per la calibrazione del PT. I plasmi
calibranti sono costituiti da un pool di plasma umano, stabilizzato con tampone, liofilizzato e
calibrato. Alcuni plasmi calibranti contengono un’aggiunta di plasma di origine animale o
plasma umano pretrattato.
Il kit PT Multi Calibratore non contiene conservanti.
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in vitro.
2. Ogni singola donazione di sangue, utilizzata per la produzione dei plasmi calibranti 1-6,
è stata esaminata per la ricerca dell’HBsAg e degli anticorpi anti-HCV, anti-HIV1 e antiHIV2. Solo le donazioni risultate negative vengono impiegate per la produzione. Tuttavia, poiché non è possibile escludere con assoluta certezza il pericolo di agenti patogeni,
tutti i derivati del sangue umano devono essere trattati con le necessarie precauzioni,
rispettando le norme di sicurezza sul rischio biologico.5
Preparazione dei reagenti
1. Ricostituire il PT-Multi Calibratore 1-6 con la quantità di acqua distillata indicata
sull’etichetta.
2. Lasciare riposare a +15/+25$C per almeno 30 minuti.
3. Agitare con cautela prima dell’uso (evitare la formazione di schiuma).
Conservazione e stabilità
Prima dell’apertura, il PT Multi Calibratore, livello 1-6 deve essere conservato a +2/+8$C ed
utilizzato entro la data riportata in etichetta.
Stabilità dopo ricostituzione (flacone chiuso):
+2/+8$C
8 ore
+15/+25$C 4 ore
) -18$C
4 settimane
Dopo ricostituzione, il PT Multi Calibratore 1-6 può essere congelato una sola volta (v. dati di
stabilità). I plasmi calibranti devono essere congelati il più rapidamente possibile in flaconcini ben chiusi. Lo scongelamento va effettuato a +37$C per 10 minuti al massimo. I plasmi
calibranti, conservati a +15/+25$C, devono essere utilizzati entro 2 ore.
Evitare contaminazioni microbiche.
Esecuzione del test
Materiale fornito
Plasmi calibranti liofilizzati
PT Multi Calibratore Livello 1
PT Multi Calibratore Livello 2
PT Multi Calibratore Livello 3
PT Multi Calibratore Livello 4
PT Multi Calibratore Livello 5
PT Multi Calibratore Livello 6
Altro materiale necessario ma non fornito
Tromboplastine Dade Behring
Thromborel® S
codice OUHP
codice B4212
Dade® Innovin®
Dade® Tromboplastina C plus codice B4216
Il numero dei plasmi calibranti da utilizzare dipende dalla tromboplastina impiegata. I plasmi
calibranti (livello 1-6) devono essere utilizzati con Dade® Innovin® e Dade® Tromboplastina
C plus. I plasmi calibranti (livello 1-5) devono essere utilizzati con Thromborel® S
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
4
Edizione Aprile 2004
Valutazione automatica
Sono disponibili presso Dade Behring, speciali istruzioni per strumenti di misura della
coagulazione.
Valutazione manuale
1. Calcolo della curva di calibrazione INR
Il tempo di protrombina dei plasmi calibranti livello 1-6 (livello 1-5 se si usa Thromborel® S)
viene misurato in doppio. La media dei valori viene riportata su carta bi-logaritmica (asse x
= valori INR; asse y = tempo di protrombina in secondi). I punti di calibrazione vengono uniti
a formare la migliore retta possibile. I valori INR dei plasmi dei pazienti potranno essere letti
direttamente su questa curva di calibrazione.
[log (sec)
=
1/ISI
•
log (INR)
+ log (MNPT)
y
=
m
•
x
+b
2. Determinazione del valore ISI locale specifico del laboraotrio e dell’MNPT
La determinazione dell’ISI locale, specifico del laboratorio si basa sulla precedente equazione (1). L’ISI può essere determinato dai risultati del PT ottenuto con i plasmi calibranti,
mediante grafico oppure mediante calcolo.
Determinazione grafica
Calcolare la pendenza della curva di calibrazione INR realizzata al punto (1).
L’ISI specifico del laboratorio corrisponde al valore reciproco della pendenza (m) di questa
retta, ovvero ISI = 1/m.
L’MNPT corrisponde al punto di intersezione della curva di calibrazione con l’asse y.
Calcolo dell’ISI locale e dell’MNPT
Il valore ISI locale e l’MNPT può essere calcolato sulla base di una equazione lineare (y =
log(sec); x = log(INR); m = pendenza della retta; B = intercetta dell’asse y). Per determinare
i parametri dell’equazione lineare, fare riferimento alle consuete procedure matematiche:
ISI locale = 1/m
MNPT = 10b
Esempio
Plasma calibrante
L1
L2
L3
L4
L5
L6
sec.
INR
9,0
1,00
11,1
1,21
14,8
1,60
23,5
2,46
42,0
4,25
53,5
5,34
Pendenza m
ISI locale
intercetta asse y
MNPT
log INR
0,00
0,08
0,20
0,39
0,63
0,73
log sec.
0,950
1,05
1,17
1,37
1,62
1,73
1,06
0,94
0,96
9,12 sec.
Nota: non è necessario determinare l’ISI e l’MNPT se si utilizza la curva di calibrazione INR. L’INR di ciascun valore PT può essere letto direttamente sulla curva di calibrazione
INR. La determinazione diretta dell’INR, tramite curva di calibrazione, porta ad una migliore
accuratezza della determinazione INR rispetto a quella ottenuta utilizzando i valori ISI e
l’MNPT indicati dal produttore.1
Limitazioni della esecuzione del test
La curva di calibrazione è valida solo per un particolare lotto di PT Multi Calibratore e di
reagente tromboplastina Dade Behring. La calibrazione è specifica dello strumento e del
reagente. Per ogni nuovo lotto di reagente tromboplastina, è necessaria una nuova calibrazione. Una nuova calibrazione è necessaria, anche, ad ogni variazione delle condizioni
sperimentali, del software e dopo riparazione o interventi di manutenzione sullo strumento.
Bibliografia
Vedi pagina 1.
Dade e Innovin sono marchi reigstrati della Dade Behring Inc. negli USA, in Germania e
negli altri Paesi.
Thromborel è un marchio registrato della Dade Behring GmbH negli USA, in Germania e
negli altri Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
PT - Multi Calibrador
Calibración
La declaración de los valores teóricos INR para los plasmas de calibración nivel 1 hasta 6
va a ser hecha por el fabricante. Los valores se relacionan, de acuerdo a las normas de la
OMS, con el correspondiente preparado internacional de referencia (IRP) de tromboplastina 2.
Campos de aplicación
Juego de calibradores para la calibración directa del tiempo de protrombina („Prothrombin
Time“ (PT)) en INR y en % del valor normal y para la determinación del valor ISI específico
del laboratorio.
Principio del método
En el control de la terapéutica con anticoagulantes orales, el tiempo de protrombina (PT)
(sinónimo: tiempo de tromboplastina, prueba de Quick, „Prothrombin Time“) se debe dar, de
acuerdo a la OMS, en „International Normalized Radio“ (INR). El cálculo se efectúa usando
el ISI (International Sensitivity Index) y el MNPT (ver más adelante) de acuerdo a la siguiente fórmula:
ISI
PT
INR =
–––––––
MNPT
Para cada lote de tromboplastina, el fabricante va a dar el valor ISI correspondiente.
Ya que el valor ISI puede estar influenciado por el aparato utilizado, así como, por influencias locales específicas del laboratorio, se prefiere un ISI determinado localmente1,4.
Como „PT Plasma normal“ se usa, de acuerdo al ISTH (International Society on Thrombosis
and Haemostasis), el „Mean Normal Prothrombin Time“ (MNPT). El MNPT se calcula como
el valor promedio geométrico del PT en por lo menos 20 personas sanas2,4.
Los plasmas de calibración nivel 1 hasta 6 del PT- Multi Calibrador sirven para elaborar la
curva de referencia para el tiempo de protrombina (PT) en % del valor normal y en INR,
usando los reactivos Dade Behring Tromboplastina.
La elaboración de la curva de referencia permite la determinación directa del INR en la
muestra de un paciente.
Usando los valores teóricos dados se puede utilizar el kit PT-Multi Calibrador para:
• la determinación directa del PT de una muestra de paciente en INR.
• la determinación directa del PT de una muestra de paciente en % del valor normal.
Además, el kit de calibradores PT-Multi Calibrador se puede usar, también, para la determinación de los valores ISI y MNPT específicos del laboratorio.
Reactivos
Contenido del envase comercial
PT-Multi Calibrador Nivel 1 hasta 6
Envase con 1 x 6 frascos c/u de 1 ml (liofilizado), N$ de pedido OPAT 035
Cada envase del PT- Multi Calibrador contiene una Tabla de valores teóricos específicos
del lote.
Los valores teóricos declarados en % del valor normal y en INR son válidos únicamente
para la Tromboplastina que viene con la Tabla de valores teóricos específicos del lote.
Composición
El kit de calibradores PT-Multi Calibrador contiene 6 plasmas de calibración para la calibración del PT. Los plasmas de calibración están formados por un pool de plasmas humanos,
estabilizados con tampón, liofilizados y calibrados. Determinados plasmas de calibración
contienen también adición de plasmas de origen animal o plasmas humanos pretratados. El
kit de calibradores PT-Multi Calibrador está libre de medios de conservación.
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. Cada donación de sangre destinada a la preparación de los plasmas de calibración nivel
1 hasta 6 , fue sometida a pruebas para detectar la presencia de HBsAg, anti-HCV, antiHIV 1 y anti-HIV 2. Para la elaboración sólo se utilizaron donaciones con resultados
negativos.
Independientemente de esto, todos los muestras obtenidos a partir sangre humana deben ser manipuladas con las precauciones necesarias, siguiendo las medidas de seguridad recomendadas en caso de riesgo biológico, puesto que nunca se puede excluir
completamente la existencia de agentes patógenos5.
Preparación de los plasmas
1. Reconstituir el PT-Multi Calibrador nivel 1 hasta 6 con la cantidad de agua destilada
dada en la etiqueta.
2. Dejar en reposo, por lo menos durante 30 min. entre +15 y +25$C.
3. Agitar cuidadosamente antes de usar (sin formación de espuma).
Estabilidad y almacenaje
Los plasmas de calibración nivel 1 hasta 6, sin abrir y mantenidos a una temperatura entre
+2 y +8$C, se pueden usar hasta la fecha de vencimiento dada en la etiqueta.
Estabilidad después de la reconstitución (frasco cerrado)
+2 hasta +8$C
8 horas
+15 hasta +25$C 4 horas
) -18$C
4 semanas
Los PT-Multi Calibrador nivel 1 hasta 6 después de reconstituidos pueden ser congelados
(ver datos de estabilidad después de la reconstitución) y descongelados solamente una
vez. En este caso los plasmas de calibración deben congelarse en su frasco original, perfectamente cerrados. La descongelación se debe hacer en máx. 10 min. en un baño de
agua a +37$C. Los plasmas de calibración se pueden usar entonces durante 2 horas entre
+15 y +25$C. Se debe evitar la contaminación por microorganismos.
Procedimiento
Materiales provistos
Plasmas de calibración liofilizados
PT-Multi Calibrador nivel 1
PT-Multi Calibrador nivel 2
PT-Multi Calibrador nivel 3
PT-Multi Calibrador nivel 4
PT-Multi Calibrador nivel 5
PT-Multi Calibrador nivel 6
Materiales adicionales necesarios
Dade Behring Tromboplastina
Thromborel® S
N$ de pedido: OUHP
Dade® Innovin®
N$ de pedido: B4212
®
Dade Tromboplastina C plusN$ de pedido: B4216
Al utilizar la Tromboplastina Dade® Innovin® y la Dade® Tromboplastina C plus se va a realizar la curva de calibración con 6 plasmas de calibración (nivel 1-6). Al utilizar la tromboplastina del Thromborel® S se prepara la curva de calibración con 5 plasmas de calibración
(nivel 1-5).
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
5
Edición Abril 2004
Control de calidad interno
La exactitud de las curvas de calibración debe ser comprobada con los controles adecuados, que vienen en una lista en el envase del reactivo correspondiente.
Si los controles muestran una desviación sistemática repetida del rango de confianza dado
en la Tabla de valores específica del lote, se debe comprobar la curva de calibración y
volver a medir.
Valoración automática
Instrucciones especiales para aparatos de medida de la coagulación se pueden obtener
consultando a Dade Behring.
Valoración manual
1. Elaboración de una curva de referencia INR
Medir el tiempo de protrombina de los plasmas de calibración nivel 1-6 (nivel 1-5 al usar
Thromborel® S) en determinaciones dobles. Graficar el valor promedio obtenido contra el
valor de INR dado (eje-x: Valor INR; eje-y: Tiempo de coagulación en segundos) utilizando
una escala logarítmica doble. Trazar por los puntos de calibración la mejor línea recta posible. En esta curva de referencia se pueden medir directamente los valores INR de las muestras de pacientes.
[log (seg.)
=
1/ISI
•
log (INR)
+ log(MNPT) ]
y
=
m
•
x
+b
2. Determinación del ISI local y del MNPT, específicos del laboratorio.
La determinación del valor ISI local, específico del laboratorio se basa en la ecuación lineal
dada en (punto 1).
El ISI se puede determinar gráficamente o por cálculo, usando los tiempos de protrombina
determinados para los plasmas de calibración.
Determinación gráfica
Se determina la pendiente de la curva de referencia INR (punto 1).
El ISI específico del laboratorio corresponde al valor reciproco de la pendiente de estas
línea, es decir ISI = 1/m.
El MNPT (seg.) corresponde al punto de corte de la curva de referencia con el eje-y en la
escala logarítmico doble.
Cálculo del ISI local y de MNPT
Basados en la ecuación lineal se puede calcular el ISI local y el MNPT (y=log(seg.);
x=log(INR); m=pendiente; b=corte de eje de las líneas). Para calcular los parámetros de la
ecuación lineal se debe usar procedimientos matemáticos estándar.
ISI local = 1/m
MNPT
= 10b
Ejemplo
Plasma de calibración
L1
L2
L3
L4
L5
L6
seg.
INR
log INR log seg.
9,0
1,00
0,00
0,950
11,1
1,21
0,08
1,05
14,8
1,60
0,20
1,17
23,5
2,46
0,39
1,37
42,0
4,25
0,63
1,62
53,5
5,34
0,73
1,73
Pendiente m
1,06
ISI específico del laboratorio 0,94
Corte de eje-y
0,96
MNPT
9,12 seg.
Al elaborar una curva de referencia INR no es necesario calcular ISI y MNPT. Para
cada tiempo de coagulación se puede leer directamente el INR correspondiente. La
determinación directa de INR en la curva de referencia conduce además a un mejoramiento
en la exactitud de la determinación de INR en comparación con la determinación usando los
valores ISI y MNPT dados por el fabricante1.
Limitaciones del Procedimiento
La curva de referencia es válida para los correspondientes lotes de PT-Multi Calibrador y de
reactivo Dade Behring Tromboplastina y se debe elaborar de nuevo después de cada cambio de lote o de reactivo, así como, al cambiar las condiciones experimentales. La curva es
también especifica para la combinación aparato-reactivo utilizados en la determinación del
tiempo de protrombina. Al cambiar el software y después del mantenimiento o reparación
del aparato es necesario una nueva calibración.
Bibliografía
Ver página 1
Dade y Innovin son marcas de fábrica registradas de Dade Behring Inc. en USA, Alemania
y otros países.
Thromborel es una marca de fábrica registrada de Dade Behring Marburg GmbH en USA,
Alemania y otros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Multicalibrador TP
Campo de aplicação
Kit calibrador para calibração do tempo de protrombina (”Prothrombin Time” (PT)) em INR e
% da norma e para a determinação do valor ISI específico do laboratório.
Princípio metodológico
Segundo a OMS, para o controlo da terapia oral de anticoagulantes, o tempo de protrombina (TP) (sinónimos: tempo de tromboplastina, Quick-Test, ”Promthrombin Time) tem de ser
indicado em ”International Normalized Ratio” (INR). O cálculo do INR é feito utilizando o ISI
(International Sensivity Index) e o MNPT (ver mais abaixo), segundo a fórmula:
INR =
TP
–––––––
MNPT
ISI
Para cada lote de tromboplastina, o fabricante indica o valor ISI respectivo. Contudo, como
o valor ISI pode ser influenciado ainda pelo aparelho utilizado e pelas influências locais
específicas do laboratório, deve preferir-se o valor ISI determinado localmente 1,4. Segundo
a ISTH (International Society on Thrombosis and Haemostasis), o “Mean Normal Prothrombin Time” (MNPT) é utilizado como ”plasma normal TP”. O MNPT é calculado como valor
médio geométrico do TP de 20 adultos saudáveis, no mínimo 2,4.
Os plasmas de calibração Level 1 a 6 do Multicalibrador TP servem para estabelecer curvas
de referência para o tempo de protrombina (TP) em % da norma e de INR, utilizando os
reagentes de tromboplastina da Dade Behring.
As curvas de referência estabelecidas permitem a determinação directa do INR de uma
amostra do paciente. O kit Multicalibrador TP pode ser utilizado usando os valores nominais
indicados:
• para a determinação directa do TP de uma amostra do paciente em INR.
• para a determinação directa do TP de uma amostra do paciente em % da norma.
Adicionalmente, o kit Multicalibrador TP pode ser utilizado para determinar os valores para
o ISI e MNPT específicos do laboratório.
Reagentes
Conteúdo da embalagem original
Multicalibrador PT Level 1 a 6:
Embalagem com 1 x 6 frascos, cada para 1 ml (liofilizado), ref. OPAT 035
Cada embalagem de Multicalibrador TP contém uma tabela de valores específica do lote.
Os valores nominais declarados em % da norma e INR só são válidos para as tromboplastinas específicas do lote, indicadas na tabela de valores nominais.
Composição
O kit Multicalibrador TP contém 6 plasmas para calibrar o TP. Os plasmas de calibração são
constituídos por um pool de plasma humano estabilizado e liofilizado. Determinados plasmas de calibração contêm aditivos de plasma de origem animal ou plasma humano previamente tratado. O kit Multicalibrador TP está isento de conservantes.
Advertências e medidas de precaução
1. Só para uso diagnóstico in vitro.
2. Cada dádiva individual de sangue prevista para a produção de plasmas de calibração
Level 1 a 6, foi analisada em termos de antigene HBsAg, Anti-HCV, Anti-HIV1 e AntiHIV2. Na produção só foram utilizadas dádivas com resultado negativo. Independentemente disso, devido ao risco de micróbios patogénicos que nunca pode ser excluído,
todos os materiais obtidos a partir do sangue humano deverão ser manipulados com o
devido cuidado e respeito pelas medidas de segurança recomendadas em caso de risco
biológico 5.
Preparação dos plasmas
1. Reconstituir o Multicalibrador TP Level 1 a 6 com a quantidade de água destilada indicada no rótulo.
2. Deixar repousar 30 min., no mínimo, entre +15 e +25 $C.
3. Antes de usar, agitar cuidadosamente (sem formação de espuma).
Estabilidade e condições de conservação
Não abertos, os plasmas de calibração do Multicalibrador TP Level 1 a 6 podem ser conservados entre +2 e +8 $C e utilizados até à data indicada no rótulo.
Estabilidade após a reconstituição (frasco fechado)
Entre +2 e +8 $C
8 horas
Entre +15 e +25 $C
4 horas
) -18 $C
4 semanas
Depois de reconstituído, o Multicalibrador TP Level 1 a 6 pode ser congelado uma vez (veja
características de estabilidade após a reconstituição) e descongelado novamente. Para
esse efeito, os plasmas de calibração têm de ser congelados no frasco original fechado. A
descongelação deverá ser efectuada em banho-maria a 37 $C, durante 10 min., no máximo.
Seguidamente, os plasmas de calibração são utilizáveis durante 2 horas, se conservados
entre +15 e +25 $C. Deverá evitar-se a contaminação pelos microorganismos.
Procedimento
Material fornecido
Plasmas de calibração liofilizados
Multicalibrador TP Level 1
Multicalibrador TP Level 2
Multicalibrador TP Level 3
Multicalibrador TP Level 4
Multicalibrador TP Level 5
Multicalibrador TP Level 6
Outro material necessário
Tromboplastina Dade Behring
Thromborel® S
ref.: OUHP
Dade® Innovin®
ref.: B4212
Tromboplastina C plus Dade ref.: B4216
Se se utilizar Tromboplatina Dade® Innovin® e Tromboplatina C plus Dade®, a curva de
referência é estabelecida com 6 plasmas de calibração (Level 1-6). Se se utilizar Tromboplastina Thromborel® S, a curva de referência é estabelecida com 5 plasmas de calibração
(Level 1-5).
Calibração
A declaração dos valores nominais INR para os plasmas de calibração Level 1-6 é efectuada pelo fabricante. Segundo a directiva da OMS, os valores referem-se à Tromboplastina
internacional de referência (IRP) 2.
OPAT G03 C1642 (1803) H/CS
6
Edição Abril 2004
Controlo de qualidade interno
A exactidão da curva de calibração deverá ser verificada com controlos adequados, que
estão enumerados no folheto da embalagem do respectivo reagente. No caso se repetir,
sistematicamente, o desvio dos controlos do intervalo de confiança declarado, indicado na
tabela de valores nominais específicos do lote, é necessário medir novamente a curva de
referência.
Interpretação automática
A pedido, a Dade Behring disponibiliza instruções especiais para coagulómetros.
Interpretação manual
1. Estabelecimento de uma curva de referência INR
O tempo de protrombina dos plasmas de calibração Level 1-6 (Level 1-5 se for utilizado
Thromborel® S), é medido com determinações duplas. Os valores médios são traçados
contra os valores INR declarados (eixo x: valores INR; eixo y: tempos de coagulação em
segundos). Neste caso, é preciso utilizar uma escala logarítmica dupla. A melhor linha recta
possível é traçada pelos pontos de calibração.
O INR do plasma dos pacientes pode ser lido directamente nesta curva de referência.
[log (seg) =
1/ISI
•
log(INR)
+log (MNPT)]
y
=
m
•
x
+b
2. Determinação do valor ISI local específico do laboratório e do MNPT
A determinação do valor ISI local específico do laboratório baseia na equação acima (1). O
valor ISI pode ser determinado graficamente ou pode ser calculado utilizando o tempo de
protrombina determinado para os plasmas de calibração.
Determinação gráfica
Calcular o vector de subida da curva de referência INR estabelecida em (1).
O valor ISI específico do laboratório corresponde ao valor recíproco da subida (m) desta
linha recta, ou seja, ISI = 1/m.
O valor MNPT [seg] corresponde ao ponto de intersecção da curva de referência com o eixo
y na escala logarítmica dupla.
Cálculo do valor ISI local e do valor MNPT
O valor local ISI e o valor MNTP podem ser calculados com base na equação linear
(y=log(sec); x=log(INR); m= subida da linha recta; b= intercepção axial das linhas rectas).
Para o cálculo dos parâmetros da equação linear, aplicar procedimentos matemáticos standard.
Valor local ISI
= 1/ m
MNPT
= 10b
Exemplo
Plasma de calibração
L1
L2
L3
L4
L5
L6
seg
INR
log INR
9,0
1,00
0,00
11,1
1,21
0,08
14,8
1,60
0,20
23,5
2,46
0,39
42,0
4,25
0,63
53,5
5,34
0,73
subida m
ISI local
Intercepção eixo y
MNPT
log seg
0,950
1,05
1,17
1,37
1,62
1,73
1,06
0,94
0,96
9,12 seg
Contudo, para estabelecer a curva de referência INR, o cálculo do ISI e MNTP não é
necessário. O respectivo INR pode ser lido directamente para cada tempo de coagulação. Além disso, a determinação directa do INR leva a uma melhor exactidão da determinação desse valor, em comparação com a utilização do valor ISI e MNPT indicado pelo
fabricante 1.
Limitações do procedimento
A curva de referência é válida para o lote do Multicalibrador TP e lote de reagente Tromboplastina Dade Behring respectivos e tem de ser estabelecida de novo, no caso de os lotes
ou reagentes serem substituídos e sempre que as condições experimentais se alterarem.
Ela é específica para combinação aparelho - reagente do momento, na determinação do
tempo de protrombina. Em caso de alterações e manutenção ou reparações dos aparelhos,
é necessária uma nova calibração.
Bibliografia
Veja a página 1.
Dade e Innovin são marcas registadas da Dade Behring Inc. nos EUA, Alemanha e noutros
países.
Thromborel é uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA, Alemanha e
noutros países.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com