Numération de cellules à l`aide d`une lame de comptage

Numération de cellules à l’aide d’une lame de comptage
Attention ! La lame est très fragile : ne pas la frotter pour l’essuyer !
La lame de comptage, ou « cellule de Malassez », est une lame de
verre spéciale comportant 2 rigoles qui délimitent une surface
plane. Lorsqu'on place la lamelle, celle-ci est maintenue à une certaine
distance de la lame, ce qui permet de définir un volume calibré entre
lame et lamelle :
Un quadrillage (ou deux) est tracé au centre de la lame : il délimite 100
« rectangle de Malassez » (RM), eux-même subdivisés en 20 carrés
(EM) :
1.
Observation du quadrillage de la lame
1.
2.
3.
4.
Observer la lame à l’œil nu et repérer le quadrillage au centre.
Placer la lame sur la platine du microscope, puis utiser les valets pour la fixer en veillant à bien la centrer.
Observer l’ensemble du quadrillage (QM) à faible grossissement en ajustant le centrage si nécessaire.
Oberver un rectangle de Malassez à moyen puis fort grossissement. NE PLUS BOUGER LA LAME !
5.
6.
Tourner délicatement l’objectif pour découvrir la lame.
Prélever la solution contenant les cellules avec une pipette pasteur et en déposer quelques gouttes sur un des
quadrillages de la lame de Malassez.
Placer la lamelle par dessus. Attention à bien éviter les bulles d'air se coinçant sous la lamelle.
Laisser les cellules sédimenter 1 à 2 min avant observation.
2.
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3.
Dépôt de la culture
Comptage des cellules dans un rectangle de Malassez (RM)
9.
Observer en commençant au plus faible grossissement, puis finir au plus fort grossissement. Condenseur
d'Abbe en position haute et diaphragme fermé.
10. Compter le nombre de cellules dans 2 rectangles de Malassez (RM) et en faire une moyenne.
Pour ne pas compter deux fois la même cellule qui serait à cheval entre deux carrés (EM), ne compter pour
chaque carré que les cellules présentes sur le bord supérieur et sur le bord droit.
4.
Calcul du nombre de cellules par mm 3
11. Calculer le nombre de cellules présent dans le quadrillage (QM) en multipliant par 100 cette moyenne. Multiplier
de nouveau par 100 le résultat obtenu pour obtenir le nombre de cellules dans un mm .
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